第十章 转基因植物的检测与鉴定
二、外源基因整合的PCR-Southern检测
该方法是先对被检测材料进行外源基因的PCR扩增， 然后再用目的基因的同源探针与扩增的特异性条带 进行杂交。 注意：设置三个对照 空白对照：无任何DNA模板；
阳性对照：以外源基因的重组质粒DNA为模板；
阴性对照：以非转化植株基因组DNA为模板。
图28-3地高辛标记探针杂交体检出原理示意图
3、标记方法
放射性标记有体内标记法及体外标记法。体外 标记法包括化学法、酶法和PCR法
酶法：是先将标记物标记在核苷酸上，然后通
过酶促聚合反应使带标记的核苷酸掺入到核酸 序列中，产生合适探针。 包括切口平移法及随机引物法。
PCR法：是利用Taq酶可将修饰的核苷酸掺入到 PCR产物中（如32P-dNTP、地高辛-dUTP荧光素 标记的dNTP）所得PCR产物可用作探针。 化学法：是通过标记物的活性基团与核酸分子 中的某种基团发生化学反应而继续标记，标记 物直接与核酸分子相连。
抗生物素蛋白可与酶、荧光素等物质结合，是抗生物 素蛋白被这些物质标记，杂交时，生物素标记探针与 被检的单链DNA中同源序列杂交，检出时，加入被酶等 标记物标记的抗生物素蛋白，生物素与被标记的抗生 物素蛋白特异结合，形成杂交DNA-生物素-抗生物素酶等标记物的杂交检出体系，根据抗生物素蛋白上的 标记物性质进行检出。
一、ELISA检测
1、抗体的制备
抗体：是机体应抗原刺激产生的一组特殊的 球蛋白，Ig表示。
ELISA检测中涉及的抗体有两种，未标记的抗 体和酶标记的抗体，酶标记的抗体有包括两 种：一是针对特异抗原的酶标一抗，一是针 对一抗的酶标二抗。
2、包被
包被是将抗原或抗体固定在固相载体表面。常
用的固相载体是多孔的聚苯乙烯微量反应板。
28-4切口平移法
28-5随机引物法
三、Southern印迹杂交
程序 1、植物总DNA的限制酶切 2、凝胶电泳分离酶切片段 3、凝胶中的DNA变性 4、印迹：毛细转移法和电转移法 5、杂交 6、杂交信号的检出
5、杂交
1）杂交体系： 探针浓度：控制在0.5ng/ml或更低 杂交反应温度：低于Tm值15-25℃ 杂交时间：
第二节 外源基因整合的Southern杂交鉴定
Southern杂交是以DNA或RNA为探针，检查DNA链，用于 外源基因整合的鉴定及分析。
具有灵敏度高（可检出1pgDNA样品）；特异性强（可 鉴别出20个碱基对左右的同源序杂交、斑点或 狭缝杂交和细胞原位杂交等。
第三节 外源基因转录的Northern杂交检测
植物细胞总RNA的提取 探针的制备 印迹及杂交
外源基因表达的RT-PCR检测
第四节 外源基因表达蛋白的检测
外源基因表达蛋白检测主要利用免疫学原理， 主要方法是Western杂交和ELISA 酶联免疫吸附法（ELISA）是一种利用免疫学 原理检查抗原、抗体的技术。 检测程序包括：抗体制备、抗体或抗原的包被 和免疫反应及检出。
3、免疫反应
4、检出
图30-1夹心法示意图
二、Western杂交
Western杂交是将蛋白质电泳、印迹、免疫 测定融为一体的蛋白质检测方法。 程 序： 植物蛋白质的提取 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质 蛋白质条带印迹 探针制备 杂交与检出
操作：将印迹后的固相膜放在含封闭剂的预杂交液中， 37-42 ℃温育3-12h
洗膜：是杂交后将固相膜依次置于不浓度的溶 液中漂洗，以除去游离的及非特异性位点上结 合的探针。 洗膜液的温度、离子强度及洗膜时间是影响洗 膜效果的三要素。
6、杂交信号的检出
放射性标记的探针通过放射自显影检出； 包括：感光材料曝光、显影、定影、水洗等 过程。 非放射性标记的探针主要通过酶反应法检出 包括：偶联反应和酶的显色反应两阶段。
第九章
转基因植物的检查与鉴定
第九章
转基因植物的检查与鉴定
第一节 报告基因的表达检测 第二节 外源基因整合的Southern杂交鉴定
第三节 外源基因转录的Northern杂交检测
第四节 外源基因表达蛋白的检℃测
第一节 报告基因的表达检测
报告基因的两大特点：
表达产物及产物的类似功能在未转化的植 物细胞内并不存在； 便于检查
目前常使用的报告基因GFP，GUS，BAR，NPTII等
1、gfp（绿色荧光蛋白）基因
简介：绿色荧光蛋白是一些腔肠动物所特有的生物荧 光素蛋白。生物荧光素蛋白是指存在于生物体的、能 在激发光作用下发射出荧光的蛋白质。它是一种能接 受荧光辐射能并最终发射荧光的物质。
从水母中分离纯化的Gfp是由238个氨基酸残基组成的
单体蛋白，分子量26888Da，它在蓝光激发下能发出绿 光。
Gfp作报告基因的优点：
适用于各种生物的基因转化； 检查方法简便，无需底物、梅、辅因子等物质； 便于活体检测； 检测是可获得直观信息。
2、gus（β -葡萄糖苷酸酶）基因
Gus基因存在于某些细菌体内，是一种水解酶，能催化 许多β -葡萄糖苷酯类物质的水解。 检测方法：组织化学染色定位法 以X-Gluc为底物，通过显色反应可直接观察到组织器 官中gus基因的活性。在适宜的条件下，该酶可将XGluc水解成蓝色物质，此靛蓝染料使具有Gus活性的部 位或位点呈现蓝色，用肉眼或显微镜即可观察。
分子杂交涉及三大内容：制备杂交探针；制备被检的 核酸或蛋白质样品；印迹及杂交。
一、Southern杂交步骤
（一）植物总DNA提取
（二）杂交探针的制备
探针：是经过特殊化合物标记的特定的核苷酸序列。 分为DNA探针和RNA探针，DNA探针又分为单链DNA探针 和双链DNA探针。
杂交探针制备包括：探针核苷酸序列的获取及标记两 部分。
（3）非放射性标记物
特点：敏感性较差； 稳定性好、分辨力高，检测所需时间短。对人和环境 无害。 生物素:是一种水溶性B族维生素，其分子中的戊酸羧 基经化学修饰可含有各种活性基团，它能与蛋白质、 核酸等多种物质发生偶联，从而使这些物质被生物素 标记。
生物素标记的探针可通过生物素-抗生物素蛋白的亲和 系统检出，也可通过生物素-抗生物素抗体的免疫系统 检出。
稳定、安全、无环境污染；
经济。
标记物分为：放射性和非放射性两类 放射性标记物主要有32P、35S、125I、14C等；
非放射性标记物主要有生物素、地高辛、荧光素、 辣根过氧化物酶等.
（2）放射性标记物
制备核酸探针时使用的放射性标记物多为三磷酸核苷 酸（NTP）或脱氧三磷酸核苷酸（dNTP），以这些标记 的核苷酸作底物，通过酶促聚合反应，使标记物掺入 到多核苷酸链中，从而获得合适探针。 特点：放射自显影灵敏度高，压片时间短； 分辨力较低； 探针不能长期保存
1、探针核苷酸序列的获取
鉴定转基因植株时应使用同源探针，常以转化的目 的基因作探针。 目的基因探针一般从载体质粒上切取。包括质粒DNA 的分离纯化；限制性内切梅切割；电泳分离酶切片 段；从凝胶中回收目的片段。
2、探针标记
（1）理想的标记物条件：
标记前后探针的基本结构相同，标记物不影响探针 的杂交特异性； 检测灵敏度高、特异性强、本底低、重复性好且操 作简便、省时；
2）预杂交及洗膜
杂交的特异性是影响杂交效果的重要因素，非特异性杂交的去除主 要是通过杂交前的预杂交和杂交后的洗膜完成。
预杂交：是在加入探针前用封闭剂封闭膜上的非特异性 位点。 常用封闭剂包括变性的非特异性DNA，如鲑鱼精子DNA， 小牛胸腺DNA等；另一类是高分子化合物，如Denhardts
转基因植物分子检测技术
转基因植物分子检测技术姜桐桐,2，黄凤兰1,2*，陈晓凤1,2，赵永1,2，李佳会1,2，周婷婷1，常旭丰1，刘佳琪1（1.内蒙古民族大学生命科学学院.内蒙古通辽028000；2.内蒙古自治区高校蓖麻产业技术研究中心.内蒙古通辽0280003内蒙古自治区高校蓖麻育种重点实验室.内蒙古通辽028000）摘要：分子生物学和植物基因工程技术不断发展，转基因分子检测技术也得到不断发展，本文介绍了外源基因整合的检测技术和外源基因表达的检测技术，细致的描述了每种检测技术的原理和优缺点。
关键词：分子检测技术；转基因植物；原理Transgenic plant molecular detection technology Tongtong jiang1.2 Fenglang Huang1.2 * xiaofeng chen1.2 Yong Zhao1.2 Jiahui Li1.2Tingting Zhou1 Xufeng Chang1 Jiaqi Liu1(1.College of Life Science, Inner Mongolia University for the Nationalities, Tongliao city，028000；2.Inner Mongolia RegionIndustrial Engineering Research Center of Universities for Castor, Tongliao city，028000；3 The Inner Mongolia autonomous region castor breeding, key laboratory of colleges and universities, Tongliao city，028000）Abstract:With the continuous development of molecular biology and plant gene engineering and transgenic molecular detection technology development, this paper introduces the foreign gene integration testing technology and exogenous gene expression detection technology, detailed describes the principle and advantages and disadvantages for each testing technology.Keywords:molecular detection technology; The transgenic plants; The principle of1近年来，转基因植物检测技术日趋成熟，多角度的多方面的检测方向分别从DNA、RNA、蛋白质来对转基因植物进行检测，无论从外源基因整合的方向，还是外源基因表达的方向，都能检测出正确的结果。
实验五转基因植物的检测
30Cycles
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目前研究转基因植物外源基因转 录表达的常用方法
1、RT-PCR (RNA) 2、Northern blot (RNA)
3、real-time PCR (RNA ）
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结果与分析
❖ 利用凝胶成像分析仪对电泳结果进行拍照和结果记录； ❖ 观察胶上是否有预扩增的主要产物带。对比目的基因产物的电
实验材料、设备及试剂
1、材料： 转基因植物的RNA或mRNA制备物。
非转化的植株材料总RNA或mRNA制备物 2、设备：PCR仪、移液器、PCR管等。 3、试剂：10×RT缓冲液、dNTP、逆转录酶、 引物（随
机引物，Oligo dT; 特异引物)、 10×One Step RNA PCR Buffer、25 mM MgCl2、10 mM dNTP、RNase Inhibitor (40 U/μl)、AMV-Optimized Taq1 μl、 AMV RTase XL (5 U/μl)、上游特异Primer (20 μM)*1、下游特异Primer (20 μM)*2、RNase Free H2O。
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实验一、质粒三种提取方法的比较
为什么要用对数期的菌液提取质粒 ？ 因为对数期菌的 生长状况和数量最佳,有利于提取质粒 溶液Ⅱ、溶液Ⅲ的作用？ ❖ 溶液Ⅰ 50mM 葡萄糖 / 10mM EDTA / 25mM Tris-HCl，pH=8.0
❖ 葡萄糖增稠，使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部；EDTA 抑制DNase的活性。 这一步溶液中还可以加入RNase，不受EDTA影响，并且可以在后续步骤中被除去
农作物基因鉴定与转基因技术
农作物基因鉴定与转基因技术农作物是人类的重要食源之一，因此，研究和开发适应不同环境和需求的农作物品种受到了广泛的关注。
在这个过程中，农作物基因鉴定和转基因技术成为了研究人员的重要工具。
农作物基因鉴定技术主要是指对农作物的基因进行检测和分析，了解其遗传特性以及相关的生理、形态和产量特征。
目前，应用较广泛的基因鉴定技术包括PCR技术、DNA芯片技术、同源性比对以及基于测序分析的方法等。
PCR技术是将DNA扩增至可检测水平的一种技术。
它可以根据需要选择一段基因特定的引物，将目标DNA片段扩增出来，并对扩增产物进行分析和鉴定。
这种方法可以用于快速检测作物中的特定基因或基因组，比较经济和简便。
在现代育种中，PCR技术被广泛应用于种品质检测和品种鉴别等方面。
DNA芯片技术是一种基于高通量检测原理的技术，可以同时检测和鉴定大量的基因。
这种技术在基因组学研究中被广泛运用，可以对作物中的成千上万个基因进行分析和鉴定。
与PCR技术相比，DNA芯片技术的检测速度更快、准确性更高。
同源性比对是一种在作物基因组学中常用的方法，它可以通过比对作物DNA序列和其他物种的DNA序列进行匹配，从而分析和鉴定出目标基因。
这种方法在作物基因鉴定和育种研究中具有重要意义，能够为品种改良提供有益的信息。
基于测序分析的方法则是提取目标作物DNA，进行高通量测序后再利用生物信息学技术对其进行分析和鉴定。
这种方法实验流程比较复杂，但是可以获取准确性高、信息量大的结果。
在研究作物基因组结构和功能方面，基于测序分析的方法被广泛应用。
除了农作物基因鉴定技术外，转基因技术也是农作物品种改良和产量提高的重要方法之一。
转基因技术是指将人为设计的基因或DNA片段导入其他生物体内的一种技术。
在农业领域，转基因技术可以实现对作物特定性状的精准调控，如抗虫、抗病、抗旱、耐盐等。
转基因作物的应用，受到广泛的关注和争议。
其中一个重要的原因是转基因技术的安全性问题。
虽然经过多年的研究和实践，当前认为转基因技术的安全性得到较好的控制，但对于人类健康和环境的长期影响还需要更多的研究。
转基因材料的检测
转基因材料的检测—转病毒复制酶基因“华农1号”番木瓜的PCR检测XXXXX大学生命科学学院20XX级生物技术专业摘要本实验采用定性的一次PCR反应分析方法，根据提供的转基因植物材料中转入基因，启动子，终止子和基因本身的DNA序列，设计出一对特异的PCR扩增引物HN2F和HN2R，然后以野生型番木瓜和转基因番木瓜“华农1号”以及水稻金丝苗DNA的基因组DNA为模板进行PCR扩增，电泳结果显示引物组合HN2-F，HN2-R对野生型和转基因材料的基因组DNA 为模板进行PCR扩增的结果不太理想，无法对其是否为转基因材料下定论，而对水稻金丝苗DNA扩增的结果良好，确定实验室的水稻金丝苗为转基因水稻。
关键词转基因；PCR检测；华农1号引言转基因技术是现代生物技术的核心，是研究植物基因功能及对植物各种农艺性状进行改良的重要手段之一。
与传统育种相比较，运用该技术能够较快培育出优质、高产、高效、抗病虫、抗逆等新品种，进而有效减少肥料、农药投入，保护生态环境，保障人体营养健康。
目前全球转基因作物种植面积激增，累计推广已突破10 亿hm2。
迄今为止，抗病番木瓜、抗虫棉花等7 种转基因植物已在我国获得批准并发放了农业转基因生物安全证书［1］。
转基因技术能提高动植物驯化水平、获得人类所需要的产品, 然而，随着转基因技术的迅速发展与大规模应用，转基因作物的种类越来越多，含有的外源基因成分也日趋复杂。
所以其安全性也备受争论, 因此，对转基因生物的检测也颇受关注。
国内外对转基因作物的检测技术综合起来主要有两大类型：一是基于转入的外源基因核酸水平上的检测；二是基于转入外源基因表达产物蛋白质水平上的检测。
前者的检测，以采用聚合酶链式反应(polymerasechain reaction，PCR)定性检测为主［2-4］。
早在20世纪初科学家就发现了病毒具有交互保护作用，近年来，科研工作者也利用这一原理开展了大量的转病毒部分基因组的转基因工作，使得植物病毒病的防治有了新的发展。
转基因检测
6、特异蛋白质检测法 ---双向电泳技术 ---双向电泳技术
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6、特异蛋白质检测法 ---双向电泳技术 ---双向电泳技术
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6、特异蛋白质检测法 ---双向电泳技术 ---双向电泳技术
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6、特异蛋白质检测法 --免疫荧光法 --免疫荧光法
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6、特异蛋白质检测法 --western杂交 western杂交
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2、PCR 检测法
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3、转基因芯片法
• 转基因产品检测芯片法将当前通用的报告基因、 抗性基因、启动子和终止子的特异片段(靶片 段)固定在玻片上制成检测芯片。 • 将从待检样品中提取的DNA 扩增、标记后与 检测芯片进行杂交，杂交信号由扫描仪扫描后 再经计算机软件进行分析判断。
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3、转基因芯片法
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6、特异蛋白质检测法 • • • • • 双向电泳 免疫胶体金技术 免疫酶标技术 免疫荧光杂交 western杂交 western杂交
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6、特异蛋白质检测法 ---双向电泳技术 ---双向电泳技术 • 双向电泳技术是目前 使用最广泛的一种高 分辨率的蛋白质分离 技术。 技术。 • 2-DE技术利用蛋白 DE技术利用蛋白 质的等电点差异完成 第一向电泳分离， 第一向电泳分离，随 后利用分子量差异进 行二维电泳分离后。 行二维电泳分离后。 比较分析不同样品的 蛋白质的种类和含量。 蛋白质的种类和含量。
表现型
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谢谢大家 Thanks for your attention
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3、转基因芯片法
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4、Southern杂交 Southern杂交
• 将DNA分子经酶切及琼脂糖凝胶电泳按大小 分子经酶切及琼脂糖凝胶电泳按大小 分离后， 处理使之变性， 分离后，用NaOH处理使之变性，再通过毛细 处理使之变性 管作用或电转移把凝胶中的DNA片段转移到 管作用或电转移把凝胶中的 片段转移到 尼龙膜上，然后与标记的核酸探针进行杂交， 尼龙膜上，然后与标记的核酸探针进行杂交， 最后通过放射自显影、 最后通过放射自显影、显色等方法检测杂交信 号。 • 通过Southern杂交可以检测未知DNA样品中 通过Southern杂交可以检测未知 杂交可以检测未知DNA样品中 是否存在与探针同源的DNA序列。 是否存在与探针同源的DNA序列。 序列
植物遗传转化方法和转基因植株的鉴定
植物遗传转化方法和转基因植株的鉴定金万枚 巩振辉 李桂荣 张桂华(西北农业大学 陕西杨陵 712100)提 要 对现有主要植物遗传转化方法和转基因植株的鉴定进行了比较分析,并对它们在植物遗传转化中的前景进行了展望。
关键词 植物;遗传转化方法;转基因植株;转基因植株鉴定 人们可通过有性杂交,物理化学诱变或自然变异来创造新物种和新品种。
但常常存在着杂交不亲和或杂种不育而造成的生殖隔离,也存在诱变的非定向性。
采用遗传转化技术,将所要求的外源目的基因导入受体植株,并通过对转化植株的鉴定选择,从而创造出人类所需要的新品种或新物种。
植物遗传转化方法和转基因植株的鉴定是植物遗传转化的重要环节。
关*国家自然科学基金资助,项目编号39770522。
优质小麦品质的决定性因素;其次要有较强的生活力,保证营养生长健壮。
3.3.2 播种 研究表明,适当晚播和增加密度能在稳定产量的基础上提高小麦品质。
根据我省实际,关中优质专用小麦播量应控制在每亩6～8kg,渭北应控制在9kg。
播期可依据实际情况较当地常规适播期推迟2～3d。
提倡机械以精量半精量播种。
3.4 灌水灌水对小麦品质的影响比较复杂,尤以抽穗至成熟期间影响最大,此期灌水会降低蛋白质含量,对沉淀值等加工品质也不利,但如果氮量充足或灌水与施氮结合则蛋白质含量不下降或下降很慢。
因而施肥上的前氮后移也为后期合理灌水提供了条件。
中国农业大学曾研究出一套节水高产栽培技术,小麦春季可只灌一次,并将灌水时期移至孕穗期;若特别干旱,可在拔节期和开花期分别灌水。
这种灌水制度与前氮后移的施肥方法配合起来,有利于优质专用小麦生产。
3.5 地膜覆盖地膜覆盖栽培能使小麦产量大幅度提高,对品质的影响这方面研究还较少。
陕西省农科院小麦中心的初步研究表明,小麦覆膜后籽粒容重有不同程度提高;蛋白质含量与正常露地播种没有差异;覆膜不影响不同生态类型品种的干、湿面筋值和沉淀值;但不同生态类型品种之间籽粒容重、蛋白质含量、干、湿面筋值和沉淀值存在较大差异。
转基因检测的主要技术方法及基本流程
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第十章转基因食品检验
你吃过转基因食品吗？
❖不管您愿不愿意，您己经或正在把转基 因食品吃进肚里
05.08.2020
❖ 转基因食品已经走进我国百姓的生活。 ❖ 国内尚没有转基因作物的大规模生产 ❖ 近几年我国大量从美国、阿根廷等国进口大豆，
其中大部分是转基因大豆。 ❖ 我国有一半以上的大豆色拉油含有转基因成分。
05.08.2020
“转基因生物”
❖是指遗传物质基因被改变的生物，其 基因改变的方式是通过转基因技术， 而不是以自然增殖或自然重组的方式 产生。
❖简称：GMOs
05.08.2020
转基因生物的种类？
❖目前已经进入食品领域的三类转基因生物包 括： 1、转基因动物 2、转基因植物（最多，最重要） 3、转基因微生物
❖ 就目前而言，还没有发现转基因食品对人类有害， 但同时也缺乏证据证明它的无害性，因此产生了 一些争论。
05.08.2020
❖ 从本质上讲，转基因生物和常规育种的品种是一 样的．
❖ 两者都是在原有的基础上对某些性状进行修饰， 或增加新性状、或消除原有不利性状。
❖ 有意识的杂交育种已有100多年的历史。
05.08.2020
2、环境安全性因素
（1）转基因生物对农业和生态环境的影响； （2）产生超级杂草的可能； （3）种植抗虫转基因作物后可能使害虫产生免疫并
遗传、从而产生更加难以消灭的“超级害虫”；
05.08.2020
（4）转基因向非目标生物漂移的可能性； （5）其他生物吃了转基因食物是否会产生畸变
（2）转基因间接影响：经遗传工程修饰的基因 片段导入后，引发基因突变或改变代谢途径， 致使其最终产物可能含有新的成分或改变现有 成分的含量所造成的间接影响；
转基因_检测_实验报告
一、实验目的通过本实验，学习并掌握转基因检测的基本原理和方法，验证转基因植物或生物体内是否存在特定目标基因，为转基因生物的安全评估提供技术支持。
二、实验原理转基因检测主要基于分子生物学技术，通过PCR（聚合酶链反应）、Southern blotting、Western blotting等方法，检测转基因生物体内是否存在目标基因及其表达产物。
三、实验材料1. 转基因植物或生物样品2. 靶标基因DNA或cDNA3. DNA提取试剂盒4. PCR试剂5. Southern blotting试剂6. Western blotting试剂7. 仪器：PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、离心机等四、实验方法1. DNA提取（1）取一定量转基因植物或生物样品，按照DNA提取试剂盒说明书进行操作，提取总DNA。
（2）对提取的DNA进行定量，确保其浓度和纯度符合实验要求。
2. PCR检测（1）根据靶标基因设计特异性引物，进行PCR扩增。
（2）将PCR产物进行电泳分析，观察扩增条带。
3. Southern blotting检测（1）将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，转移至尼龙膜上。
（2）用靶标基因探针进行杂交，洗涤后进行化学显色。
4. Western blotting检测（1）将转基因植物或生物样品制备成蛋白质提取物。
（2）进行SDS-PAGE电泳，转移至NC膜上。
（3）用靶标蛋白抗体进行免疫检测，洗涤后进行化学显色。
五、实验结果与分析1. PCR检测通过PCR扩增，成功得到预期大小的靶标基因片段，说明转基因植物或生物体内存在目标基因。
2. Southern blotting检测通过Southern blotting检测，成功将PCR产物与靶标基因探针进行杂交，说明转基因植物或生物体内存在目标基因。
3. Western blotting检测通过Western blotting检测，成功检测到目标蛋白的表达，说明转基因植物或生物体内存在目标基因的表达产物。
转基因植物成分检测方法及标准概述
24 食品安全导刊 2020年7月1 引言随着分子生物学、转基因技术的发展与应用，转基因作物的种植和转基因食品的生产规模日益增长。
转基因作物具有高营养、抗病虫、抗除草剂等优势，转基因作物在带来巨大利益的同时也存在许多争议，例如转基因食品的食用安全性，对生态环境的影响，对人类健康的潜在危害等，这些都受到了人们越来越多的关注[1]。
因此，许多国家针对转基因食品出台了相应的管理办法，对转基因产品实行强制性标识。
转基因成分的检测为转基因食品的科学监管提供了重要的技术保障，因此加强对转基因植物及其成分的检测尤为重要。
2 转基因植物成分检测技术研究进展目前，国内外常用的转基因产品及其成分的检测方法主要有两大类：一类是核酸水平的检测，如定性PCR 技术、实时荧光定量PCR 技术、数字PCR 技术、等温扩增技术、基因芯片技术以及二代测序技术等[2]；另一类是蛋白水平的检测，如酶联免疫分析技术（ELISA 法）、SDS 聚丙烯凝胶电泳分析技术等。
由于转基因食品中的蛋白质很不稳定，影响了检测的灵敏度，核酸水平的检测具有很好的特异性和灵敏度，因此核酸成分检测技术逐渐发展为转基因产品及其成分检测的常用方法[3，4]。
3 转基因植物成分检测方法标准目前，对于转基因植物成分检测，国内已发布的现行有效的标准有：国家标准2项，农业部标准及公告91项，行业标准4项及地方标准3项。
其中以PCR 检测方法为主，还有试纸条法、微流滴数字PCR 法等，详细方法标准编号见表1。
目前颁布的这些标准中基本涵盖了常见的转基因植物外源性成分，对于可能遇到的转基因植物外源基因均可检测，各检测实验室可以根据这些方法标准的适用范围，自主选择适合检测方法。
4 讨论与建议目前，转基因植物成分的PCR 检测方法主要是对外源核酸进行检测，检测方法以普通PCR 和实时荧光PCR 检测方法为主。
实时荧光PCR 检测技转基因植物成分检测方法及标准概述□ 刘岑杰 杨 滴 大连市检验检测认证技术服务中心摘 要：本文详细介绍了转基因植物成分的检测方法，查阅资料，对国内转基因植物成分的检测方法进行了分析归类，对目前为止现行有效的检测方法进行分类总结。