抗心磷脂抗体检测标准操作规程(胶体金法)
金标免疫项目标准操作程序
SOP_13-5 金标项目标准操作程序一、目的：统一项目操作规程，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围：免疫学检验项目。
三、操作人员：检验科授权工作人员四、项目内容：丙型肝炎病毒抗体Anti—HCV检测爱滋病抗体Anti—HIV检测肌钙蛋白CTNI检测衣原体CT检测乙肝表面抗原(血清/血浆)检测胶体金法丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒（胶体金法）产品名称通用名：丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒（胶体金法）英文名：Diagnostic Kit for Antibody To Hepatitis C Virus(Colloidal Gold)包装规格：条型/卡型：40人份/盒、50人份/盒、100人份/盒预期用途丙型肝炎病毒可通过输血、血制品不洁注射、母婴和密切接触而传播，主要通过输血而引起，丙型肝炎约占输血后肝炎70%以上。
由于病毒的高变异型，目前还没有有效的丙肝疫苗面世，因此预防和控制丙型肝炎的感染和扩散变得尤为重要，而丙型肝炎的诊断是其中最关键的环节。
丙型肝炎病毒抗体作为一种重要的丙肝标志物，对其进行检测一直以来为临检所重视，是目前最主要的丙型肝炎辅助诊断手段之一。
本检测试剂盒用于定性检测人血清或血浆样本中的丙型肝炎病毒（HCV）抗体。
检验原理本品采用胶体金免疫层析技术，用用间接法原理定性检测人血清（浆）中HCV抗体。
在玻璃纤维素膜上预包被金标小鼠抗人(lgG Ab),在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被重组丙肝混合抗原（Core、NS3、NS4、NS5，源自大肠杆菌）和人lgG抗体（丙种球蛋白）。
检测阳性样本时，血清样本中HCV-Ab与胶体金标记小鼠抗人lgG抗体结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测限时与预包被的抗原结合形成“Au-anti+lgG Ab –HCV Ab–HCV Ab”夹心物而凝聚显色，游离金标小鼠抗人lgG抗体则在对照线处与人lgG 抗体结合而富集显色。
抗心磷脂体抗体检测
抗心磷脂体抗体检测1. 检验目的用于体外定性检测人血清或血浆中抗ACA-IgG、IgM、IgA的水平。
2. 方法原理包被纯化的心磷脂抗原与待测样品中的ACA-IgG、IgM结合，加入酶标抗体后，形成复合物，后者与底物作用呈显色反应，在450nm处测定其吸光度（OD）值，反映样品中ACA-IgG、IgA、IgM水平是否正常。
3性能参数阴性参考品血清、阳性参考品血清应符合阴阳性参考品血清要求，最低检测限符合最低检出限的检出要求，精密度CV（%）不高于15%，37℃放置6天产品性能稳定。
4.始样品系统4．1标本类型：血清或血浆4．2采血严格按照静脉采血的通用规则。
4．3样本在离心前，须凝固充分。
4．4不能使用在室温下放置超过8小时的样本。
4．5如果检测不能在8小时内完成，要将瓶盖紧闭，并存于2—8℃保存。
4．6如果样本在48小时内不检测，将样本血清冻存于-20℃。
4．7样本只能冻融一次。
4．8加样前样本须无纤维、气泡及其它物质。
4．9标本的拒收：严重溶血、脂血、血量不够、三查三对不合格者拒收。
5容器和添加物的类型5.1无抗凝剂的红色或黄色胶头真空试管。
5.2EDTA、肝素抗凝的紫色、绿色胶头真空试管。
6设备和试剂6.1分析仪器：酶标分析仪：TECAN公司移液器：5μl～450μl移液器恒温水浴箱：上海一恒公司的CU420微孔振荡器：分析试剂: ASKI ELISA法检测试剂盒6.2 组成：6.2.1 纯化抗原包被反应条：室温平衡30分钟方可拆开包装6.2.2 酶结合物：用于酶联反应6.2.3 阳性对照：用于阳性对照反应6.2.4 阴性对照：用于阴性对照反应6.2.5 样本稀释液：用于稀释样本6.2.5 浓缩洗涤液：用前以蒸馏水作30倍稀释6.2.6 底物A：用于显色反应6.2.7 底物B：用于显色反应6.2.8 终止液：用于终止显色反应6.3 试剂保存与有效期6.3.1 新购试剂保存于2-8℃，勿冷冻，在有效期内使用。
抗心磷脂抗体检测早期流产的临床价值
抗心磷脂抗体检测早期流产的临床价值
杨尚;李菁;杨辛
【期刊名称】《中国药业》
【年(卷),期】2012(021)A02
【摘要】目的探讨抗心磷脂抗体（ACA）检测早期流产的临床价值。
方法采用抗
心磷脂抗体胶体金法，对55例正常初孕妇（对照组）和49例流产孕妇（流产组）进行检测。
结果流产组孕妇中ACA阳性率高于对照组（P〈0．05）。
结论抗心磷脂抗体胶体金法检测简便、敏感性强、快速，在孕妇发生胎儿流产时有一定的诊断价值。
【总页数】1页(P253-253)
【作者】杨尚;李菁;杨辛
【作者单位】上海市控江医院,上海200093
【正文语种】中文
【中图分类】R714.21
【相关文献】
1.血清孕酮、人绒毛膜促性腺激素联合检测预测早期流产结局的临床价值 [J], 王
玲玲;杨丽玮
2.冠状动脉性心脏病患者血清抗心磷脂抗体检测的临床价值 [J], 高云琴
3.妊娠期高血压疾病孕妇检测抗心磷脂抗体与β2糖蛋白1型抗体的临床价值 [J], 张红萍;何海珍;郑加勇;王叶红;沈晓露;陈萍
4.抗中性粒细胞胞浆抗体及抗心磷脂抗体检测在神经系统疾病中的临床价值 [J],
鹿翔凤;王培昌
5.不孕不育患者抗精子抗体和抗心磷脂抗体检测的临床价值 [J], 乔杰
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胶体金方法学检测抗体方法
胶体金方法学检测抗体方法我折腾了好久胶体金方法学检测抗体方法，总算找到点门道。
说实话，一开始我完全是瞎摸索。
就感觉这东西很神秘，不知道从哪儿下手。
最开始我按照一些常规的步骤来，就像小孩儿搭积木一样，一步一步照着做，觉得这样应该不会出错。
我准备了所有需要的试剂啊，工具啊之类的。
那胶体金颗粒感觉就像一个个小金珠子，特别小，肉眼看也不是特别清楚的那种。
第一次做的时候，我失败得那叫一个惨啊。
我就想啊，到底哪儿出问题了呢？后来发现样本处理这一关我就没做好。
就好比做蛋糕，材料没准备好，你能指望蛋糕做成功吗？一样的道理。
样本处理得不干净，里面可能有杂质啥的，就会影响反应，这个真的特别关键。
后来我又试了一次，这次在样本处理上下了大功夫。
我把样品采集好之后，小心翼翼地按照比例加各种试剂，去除杂质。
就像洗水果，想要把脏东西都弄掉，还不能把果肉也洗没了。
但是新的问题又出现了，就是标记抗体这一步。
我发现标记的时候，我可能加试剂的速度太快了。
这就好比跑步的时候急刹车，哪能不出问题呢？这个速度把握不好，可能就导致抗体标记不均匀。
于是我又重新调整。
我在标记抗体的时候，放慢速度，一滴一滴地加，边加边轻轻地摇晃均匀，就像给小婴儿喂药一样，慢而细致。
然后再进行后面的反应步骤。
经过这么一番折腾，总算是看到了比较靠谱的结果。
我觉得有个地方我还不是很确定，就是在判断结果的时候。
有时候那个颜色变化不是特别明显，不太好判断到底是阳性还是阴性。
我觉得这个可能得多实践，把各种标准品的结果多看几遍，就像看熟人的脸一样，看久了就分得清谁是谁了。
还有啊，做这个实验一定要注意环境，温度啊湿度啊对反应多少都有影响。
温度过高或者过低，可能都会使那些小得像金珠子一样的胶体金发生反常的行为。
如果在夏天很热的时候做实验，一定要保证设备的散热良好，不然就像人在大热天干活一样，效率低还容易出错。
反正整个胶体金方法学检测抗体方法，每一步都需要小心谨慎，多从失败中总结经验，不断调整，总会慢慢掌握的。
免疫胶体金法实验流程
免疫胶体金法实验流程一、实验准备。
咱开始做免疫胶体金法实验之前呀，得把东西都准备好呢。
这就像出门旅行得先收拾好行李一样。
1. 试剂方面。
要准备好免疫胶体金试剂啦，这个试剂可是实验的关键呢。
就好像做菜得有主要的食材一样。
还有相关的缓冲液，它就像给试剂创造一个舒服的小环境，让它们能好好发挥作用。
2. 器材准备。
像检测用的试纸条或者检测板可不能忘，这是咱们看实验结果的重要家伙事儿。
然后就是移液器，这东西就像个精准的小助手，能准确地吸取咱们需要的试剂量。
再有就是干净的离心管，用来装各种试剂混合液之类的，得保证它干净无污染哦，不然就像在脏锅里做饭，结果肯定好不了。
二、样本采集。
接下来就是样本采集啦。
这一步也很重要哦。
1. 采集类型。
如果是做血液相关的免疫胶体金检测，那采血的时候得小心点儿。
采血量要按照要求来，不能太多也不能太少，就像 Goldilocks找合适的床一样，刚刚好才行。
要是采集其他样本，像尿液之类的，也要注意采集的方法和容器的清洁。
2. 样本保存。
采集好的样本可不能随便放着不管呀。
如果不能马上做实验，就得把它好好保存起来。
有的样本需要冷藏，那就得赶紧放到冰箱里，让它在合适的温度下待着，这样样本里的各种成分才不会变质，就像给它们盖了个小被子，让它们舒舒服服地等着被检测。
三、样本处理。
采集好的样本往往不能直接用来检测，得处理一下呢。
1. 稀释。
很多时候需要对样本进行稀释。
这就好比一杯浓咖啡太苦了，加点儿水稀释一下就好喝多了。
按照一定的比例把样本和缓冲液混合，这个比例可得算准喽，不然可能会影响实验结果的准确性。
2. 离心。
要是样本里有一些杂质或者细胞之类的，离心就很有必要啦。
就像把沙子和水混合了，通过旋转的力量把沙子沉到底下，让上层比较清澈的液体可以用来做检测。
离心之后，小心地吸取上面的液体，可别把下面的杂质也吸进去了。
四、加样。
处理好样本之后，就到了加样这个环节啦。
1. 加到检测板或试纸条。
把处理好的样本加到检测板或者试纸条上的时候，要加得准确无误。
磷脂检验标准操作规程
文件制修订记录1.0目的制定磷脂的检验操作规程，确保生产质量。
2.0适用范围本规程适用于磷脂的质量评价与质量控制。
3.0职责质量管理部负责本规程的实施。
4.0正文4.1 外观取适量试样，置于清洁、透明的玻璃器皿中，在自然光线下，目视观察其色泽和状态，嗅其气味。
4.2含量测定4.2.1试剂4.2.1.1 正己烷：色谱纯。
4.2.1.2 异丙醇：色谱纯。
4.2.1.3 水：色谱纯。
4.2.1.4 冰醋酸：色谱纯。
4.2.1.5 1％冰醋酸溶液：1ml冰醋酸用色谱纯水定容到100ml。
4.2.1.6 磷脂酰胆碱：标准物质，纯度≥99％。
4.2.1.7 流动相：V(正己烷)+V(异丙烷)+V(1％冰醋酸溶液)=8+8+1。
4.2.2仪器与设备4.2.2.1 分析天平：精度为0.0001g。
4.2.2.2 刻度吸管：0.5ml，1ml，5ml。
4.2.2.3 容量瓶：5ml，10ml，100ml。
4.2.2.4量筒：100ml，500ml，1000ml。
4.2.2.5 液相色谱仪。
4.2.2.6 液相色谱柱：Si-60柱子，填料粒度为5um。
长度250mm，内径4.6mm。
4.2.3分析步骤4.2.3.1 标准溶液的配制精确称取约20mg磷脂酰胆碱，用V(正己烷)+V(异丙醇)+V(1％冰醋酸溶液)=8+8+1混合溶剂溶解并定容到10ml ，配制磷脂酰胆碱标准溶液，使溶液中磷脂酰胆碱为2mg/ml 。
准确吸取此溶液0.25ml 、1.25ml 、2.50ml 、3.75ml 、5.00ml ，并用V(正己烷)+V(异丙烷)+V(1％冰醋酸溶液)=8+8+1混合溶剂定容到5ml ，使溶液中磷脂酰胆碱的最终浓度为0.1mg/ml~2.0mg/ml 。
低于﹣16℃保存备用，保存时注意容器口的密封。
4.2.3.2 标准工作曲线的制作分别取不同浓度的磷脂酰胆碱标准溶液10uL 注入液相色谱中。
以样品组分浓度为横坐标，组分峰面积为纵坐标，绘制磷脂酰胆碱的标准工作曲线。
抗心磷脂抗体(ACA)IgGELISA
抗心磷脂抗体(ACA) IgG ELISA磷酯有着广泛的生理意义。
循环抗磷脂抗体的存在可引起种种疾病，这些抗磷脂抗体的作用途径至今不清楚。
可能通过与内皮细胞膜上磷脂的交叉反应防止花生四烯酸释放，致使前列环素合成减少，从而促进血小板凝聚；另一种机理是防止血纤维蛋白溶解酶原激活剂的释放，降低血纤维蛋白溶酶原转变成血纤维蛋白溶酶，致使血纤维蛋白裂解减低。
ACA的存在常易发生静脉及动脉血栓形成。
ACA对血小板膜上的磷脂具有交叉反应，导致网状内皮系统摄血小板作用加强。
ACA阳性见于急性缺血性脑病，缺血性视神经病、脑血栓形成、偏头痛样头痛、肺源性高血压和习惯性流产。
抗磷脂抗体综合症的实验室诊断主要是抗磷脂抗体测定。
本试剂盒用于定性检测人血清中的抗心磷脂抗体ACA IgG浓度。
酶标板96wells 浓缩洗涤液(20X) 25ml吸收液12ml 酶联物12ml底物A 6ml 阴性对照 1 vial底物B 6ml 终止液6ml1.避免溶血、高血脂标本。
2.标本中若有悬浮物，应离心去除。
3.标本若不及时检测，请冻存于-20°C。
1.取出所需板条，其余立即密封放回2-8°C。
取出的板条应放入自封袋内（密封）平衡至室温再试验，以防水滴凝聚在冷板条上。
2.浓缩洗涤液(20X)用双蒸水稀释成1X(至500ml)。
未用完的放回2-8°C。
3.试剂盒应平衡至室温再试验。
1.样品孔内先加入100ul吸收液，再加入10ul血清标本。
2.加入100ul阴性对照至相应孔内。
(必要时加入100ul阳性血清至适当孔内)3.空白孔内加入100ul吸收液。
4.轻轻混匀30秒钟，封住板孔，37°C 45分钟。
5.洗板：甩尽孔内液体，每孔加入洗涤液350ul,静止30秒后甩尽液体，在厚叠吸水纸上拍干，洗5次。
6.每孔加入100ul 酶联物, 轻轻混匀30秒钟，封住板孔，37°C 30分钟。
7.洗板：甩尽孔内液体，每孔加入洗涤液350ul,静止30秒后甩尽液体，在厚叠吸水纸上拍干，洗5次。
胶体金法操作流程
胶体金法操作流程嘿，朋友！你要是想知道胶体金法咋操作，那你可算是找对人啦。
这胶体金法就像一场小小的寻宝之旅呢。
咱先说准备工作。
你得把要用的东西都找齐咯。
就好比你要出门旅行，得先把行李收拾好一样。
你得有那胶体金检测试剂，这个可不能少，它就像是我们寻宝的地图一样重要。
还有啊，一次性的采样拭子，这就像是我们寻宝的小铲子。
再有呢，样本提取管也得备着，这就像是装宝贝的小盒子。
当然啦，还有个小滴管，这就像给宝贝注入魔法的小魔杖。
然后就开始采集样本啦。
这时候啊，我就想起我那朋友小张，他第一次做这个的时候，紧张得手都有点抖呢。
你要拿着采样拭子，轻柔地去采集你要检测的部位的样本。
比如说检测鼻腔的话，就像轻轻抚摸鼻子里面一样，可别太粗鲁啦，不然样本采集不好，就像你挖宝藏的时候，一铲子下去把宝贝给弄坏了，那可不行。
把采样拭子在鼻腔里转几圈，让它充分地沾到样本，这就像是小铲子把宝藏都挖起来一样。
采集完样本后，把采样拭子放到样本提取管里。
这一步啊，就像是把挖到的宝藏小心翼翼地放到小盒子里。
然后按照试剂的说明，往提取管里加入适量的提取液。
这提取液就像是能让宝藏现身的神奇药水。
加的时候可得看准咯，可不能加多或者加少啦，不然就像你在调配魔法药水的时候比例不对，那魔法可就不灵验喽。
接下来就是把提取管里的液体滴到胶体金检测试剂上。
这就像把带有宝藏魔力的水洒到地图上，好让宝藏的位置显示出来。
滴的时候呢，要垂直滴加，就像一个小水滴直直地落下去，要是滴歪了，那显示的结果可能就不准确啦，这多让人懊恼呀。
等上一小会儿，就像等待魔法生效的时间。
这时候你就盯着那检测试剂看，就像盯着即将打开的宝藏箱一样充满期待。
如果出现了两条红线，那可能就像发现宝藏里面有两个大宝贝一样，这时候你就得重视起来啦。
要是只有一条红线呢，那就像只找到一个小宝贝，是个好结果呢。
要是啥都没有，那就像挖了半天啥都没挖到，可能就得重新检测一次啦。
我觉得胶体金法操作虽然看起来有点小复杂，但只要你像对待宝藏一样认真仔细，按照步骤来，就不会出啥大差错。
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抗心磷脂抗体（AcA）检测标准操作规程(胶体金法)
1.目的：
规范抗心磷脂抗体（AcA）检测的操作标准，确保检测结果的准确性
2. 原理：
斑点反应板上固相心磷脂抗原与血清中的抗心磷脂抗体形成复合物，胶体金标记的抗人IgG 单抗再与复合物结合，形成肉眼可见的红色圆斑点，即为阳性结果，否则为阴性结果。
3. 标本要求：
（1）标本采集：静脉抽血3ml，不抗凝。
（2）标本保存：2-8℃可保存3天，不易反复冻融。
（3）特殊样本：溶血，高脂血等特殊样本在检测时会使背景偏深影响结果判断，可尝试用生理盐水稀释血清样本后检测。
4. 检验方法
（1）将待测血清样本和试剂盒恢复室温；
（2）取出反应板，与反应板中滴入试剂A二滴，静置，待试剂A完全吸入；
（3）用吸管吸取待测血清样本，滴四滴（约150微升）于反应板孔中，静置，待血清完全吸入；
（4）取下反应板上的蓝色耳盖，滴入试剂B三滴，静置，待试剂B完全吸入；
（5）再滴入试剂A二滴，静置，待试剂A完全吸入，在5分钟内观察反应板孔中的现象；
5. 结果判断
（1）阳性：反应孔中显现清晰的红色质控线和红色圆斑的为阳性；
（2）阴性：反应孔中只显现清晰的红色质控线为阴性；
（3）无效：反应孔中未显现红色质控线，表示操作失误或试剂无效。
6. 检验结果的解释
检验结果为阳性者即为抗心磷脂抗体（AcA）检出阳性，阴性者即为抗心磷脂抗体（AcA）未检出。
若检测为无效结果，则应进行重复检测，并及时与生产厂家联系。
7.注意事项
（1）本品仅用于体外诊断。
（2）本品的检测结果仅可作为疾病的辅助诊断指标。
8. 临床意义：
抗心磷脂抗体（AcA）是一种以血小板和内皮细胞膜上带负电荷的心磷脂作为靶抗原的自身抗体，是抗磷脂抗体的一种，也是抗磷脂抗体综合征（APS）的标志性抗体，在多种自身免疫疾病中具有阳性意义。
ACA抗体阳性或持续升高与患者的动静脉血栓形成、血小板减少、习惯性流产、精神分裂症、衰老、脑卒中、肾病综合征、结缔组织病及神经系统损伤为特征的多系统受累的抗磷脂综合征等存在密切的关系。
因此，ACA的检测可用于各种自身免疫疾病(如、系统性红斑狼疮、风湿性疾病)、脑血管性疾病、习惯性流产及卵巢早衰疾病的辅助诊断。