毕业论文：鸡大肠杆菌病病原的分离与鉴定及药敏试验
鸡大肠杆菌病的分离鉴定及药敏试验
２ ． １ 临床 观察
观察发病鸡群ｌ 临床症 状 ． 同时 对 病 死鸡 进 行 剖 检 ， 观察其病理变化 ， 详
实记录。 ２ － ２ 病 料 涂 片 染色 镜 检 将 病 料 进 行 触 片，进 行 革 兰 氏 染 色， 镜检。 ２ ． ３ 细 菌 的分 离 培 养 无 菌采 集 病 死 鸡 的 气 囊 、 心血 、 肝
牧 兽 医， ２ ０ ０ ９ （ ３ ６ ） ： Ｉ ５ ７
因 素 均可 促 发 或 加 重 大 肠杆 菌病 。 现
将 一 例鸡 大肠 杆 菌 病 的 分 离 与 鉴 定情 况 报 告 如下 ： ２ ０ １ ３ 年４ 月１ １ 日． 大 连 市 某 鸡 场 海 兰 蛋 鸡２ ８ ０ ０ 只 ，从 １ ９ ０ １ ３ 龄 开 始 陆续
９ ２ －９ ４
将 接种斜 面培 养１ ８ ～ ２ ４ ｈ 的 各 菌 株 菌 液 ，移 种 于 三 糖 铁 和葡 萄 糖 、 乳 糖、 麦芽糖 、 甘露醇 、 蔗糖发酵培养基 ， 并 接 种 于蛋 白胨 水 、 葡 萄 糖 蛋 白 胨水 、
【 ２ 】 田树飞， 李子平． 鸭 疫 里 默 氏杆 茵 病 原 与 防 治 研 究 进 展 ．安 徽 农 业 科 学 ， ２ ０ ０ ７ （ ２ ｏ ） ：
１ ６ ０－ｌ ６ １ ．
病混合或并 发感染而使 死亡率 升高 。
有研 究表 明 ，辽 宁 地 区 以５ 月份到９ 月
【 ３ 】 罗映 霞， 余 双祥． 鸭 疫 里 默 氏 杆 菌 病 的 发
Ｔ Ｅ ／ 卡 那 霉 素Ｋ Ａ Ｎ 均 耐药 ， 提 示 这 些 药
物 不 能 用 于该 病 的防 治 。 在 大 范 围 发 病 时 可 以先 用 头 孢 类 药 物 进 行 治疗 。
鸡大肠杆菌病病原的分离及药敏试验
ｆ ２ ６ 药敏试验 ．．
用灭菌环取大肠杆菌纯培养物， 置于２ｍ Ｌ
灭菌生理盐水中 ， 用灭菌玻棒 充分混匀 ， 之后用玻棒蘸取稀释
液均匀涂布于普通平板 上 ， 室温干燥后将 药敏片贴于平板 经
上， 每板 ４片 ，７℃培养 ２ ， ３ ４ｈ 观察结果 。 １２ ７ 动物致病性试验 ．．
摘要 ： 山东 省某 鸡场 的病死鸡 中分 离得 到疑似大肠杆菌 的菌株 ， 从 并对该 菌进行 分离鉴定 、 化试验 、 生 致病性试 验和药敏试验 。结果表 明 ， 分离菌对菌必治 、 先锋噻肟 、 先锋 必、 庆大霉素高度敏感 ， 对阿米卡星 、 氧哌 嗪青霉素 中度敏
感， 对链霉素 、 氨苄青霉素 、 复方新诺 明不敏感 。说 明该鸡 场出现了耐药性的致病性大肠杆菌。
类 生产 中危 害最 为严重 的传染病 之一 ， 该病 主要通过 消化 道 和呼吸道传播 。禽大肠杆 菌病 以幼年雏 和青年雏 发生较 多 ， 发病较早 的可以提前到 ４日龄 ， 常 １ 通 月龄发病较多 ， 年家 成 禽也有发生 。该病 引起 的生长 发育 迟缓 、 生产性 能下 降 、 饲料报酬下 降以及药费 、 死亡率 增加 的现 象给养殖 业造成 了 极 大的经济 损失 ； 同时 ， 禽大肠 杆菌病 还会 与其他 呼吸 系 统疾病混合感染 ， 造成家禽大 面积死亡 ， 有的甚至直接诱发新 城疫 、 禽流感等危 害性极大 的疾病 ， 造成更大 的经 济损失 。我 国每年 因大肠杆菌病死 亡 的鸡达 ３１０多万羽 ， ７ 经济损 失达 ３亿多元 。０ ０年 ６月 ， ２１ 山东 省某 鸡场 ４ ０日龄 肉鸡 出现个 别死亡现象 ， 解剖发 现病死鸡有肝 出血、 死现象 ， 坏 从临床症
２ 结 果 与 分 析
鸡致病性大肠杆菌的分离、鉴定及药敏试验
中 图 分 类 号 ：８ ２６ ￥ ５ ．１ ４ ２
文 献 标 识 码 ：Байду номын сангаас Ｂ
文 章 编 号 ：０ ４ ５ ９ （ ０ ）２ ０ ０ — ２ １０ — ０ ０ ２ １ ０ — ０ ３ ０ １
鸡 大肠 杆 菌 病 是 由大肠 杆 菌 的某些 致 病 性 血清 型 引
临床 剖检 有典 型心 包炎 、 周炎 、 肝 气囊炎 或 卵黄 性腹 膜炎 ，
疑 似 为 大 肠 杆 菌 感 染
１２ 试 剂 ． ・
分 离 、 定 ， 到接 种后 ７ｄ为止 。７ｄ后仍 存 活 的鸡 进行 鉴 直 解 剖 ．观 察病 变 作 细菌 分离 鉴 定 根 据 鸡 的死 亡 数 和病 变 程度确 定 分离株 的致 病性 １３ ．． 药 敏 试验 ４ 按 ＷＨ Ｏ推 荐 的 Ｋｒｖ Ｂ ｕ ｒ 片 扩散 ｉ — ａｅ 纸 ｂ
加 大肠 杆 菌病 给养禽 业造 成 了严 重的 经济 损失 ． 国每 我 年 因大 肠杆 菌病 造成 的经 济损 失达 ３ 多元 ． 亿 而且还 有增
加 的 趋 势 … 据 对 南 阳 市 及 周 边 主 要 养 禽 集 中 区 及 兽 医 门
诊 的调查 ． 规模 养禽场疫 病 的发 生 以大肠 杆菌病 居首位 。 由 于其 血清型 复杂 ． 耐药菌株 不断增 加 ． 给防治工 作带 来 了巨
苯尼 考 等有 一定 的 耐药 性 对 头孢 噻肟 、 丁胺 卡那霉 素 、 壮 观霉 素 和新 霉素 较 敏感
３ 讨 论 ３１ 血 清 型 分 析 ．
是卫 生 状 况差 、 养 密度 大 、 理 粗放 、 毒 不 严格 、 用 饲 管 消 使
大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验
河南农业大学本科生毕业论文(设计)题目鸡大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验学院牧医工程学院专业班级2011届动物医学专升本3班学生姓名王张凡指导教师许兰菊(教授)撰写日期：2011年5月10 日鸡大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验王张凡（2011届动物医学专升本3班）摘要：为了对巩义某鸡场疑似鸡大肠杆菌病的鸡群进行确诊，并为有效防治提供依据，本研究利用细菌学检验方法对采集的典型病料进行细菌分离鉴定和细菌药敏试验。
通过细菌分离培养、形态学观察、生化试验、动物试验和血清学试验。
结果表明：该鸡群中分离到的病原菌为鸡大肠杆菌。
动物攻毒试验结果表明：分离的鸡大肠杆菌具有明显的致病作用，雏鸡发病率为100%(5/5)，死亡率达60%(3/5)。
血清学鉴定结果显示，该分离菌血清型为O1。
药敏试验结果表明：该细菌对头孢曲松、头孢唑林、阿米卡星、复方新诺明（磺胺甲恶唑）、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、氨苄西林、米诺环素和庆大霉素均敏感，对阿莫西林和阿奇霉素为中度敏感;但对罗红霉素和四环素耐药。
本研究结果对准确诊断和有效防治该病提供了依据和条件。
关键词：鸡；大肠杆菌；分离鉴定；药敏试验Isolation, Identification and Antibiotic Sensitivity Testof Chicken Escherichia Coliwang zhangfan(Class 3 of Veterinary Medicine, Graduated in 2011)Abstract:In order to make a definite diagnosis for the suspend Chicken Escherichia Coli about chicken house from Gongyi and provide a reference for effective prevention and treatment. The bacteria was isolated and identified from typical samples and antibiotic sensitivity test was also adopted. By bacterial separate cultures, morphological observation, biochemical tests, animal experiment and serological tests, the pathogen of this chickens is pathogenic E.coli bacteria. The result of animal experiment showed: this Escherichia coli had obviously pathogenic; the morbidity of chicklings was 100%(5/5) and the mortality was 60%(3/5).Serological testing results indicated: the serotype of this strain was O1. The antibiotic sensitivity test results illuminated: the sensitivity of the strain to ceftriaxone、cefazolin and other 8 kinds of drug were sensitive; and the drug sensitivity to amoxicillin and azithromycin are intermediate;but the strain were drug resistant to roxithromycin and acheomycin. This research provided a scientific basis and qualification for exact diagnosis and effective prevention and treatment to Escherichia coli.Key word:Chicken,Escherichia Coli, Isolation and Identification, Antibiotic Sensitivity Test鸡大肠杆菌病是由禽致病性大肠杆菌(avian pathgenicity E．coli，APEC)引起的急性或慢性细菌性传染病，各种日龄的鸡均可发病，但雏鸡和产蛋鸡更易发病，其常与其他疾病混合感染加重病情，该病表现不同的病型，常见的病型有急性败血症、气囊炎、腹膜炎、卵巢炎、输卵管炎、脐炎、肉芽肿等[1, 2]。
鸡大肠杆菌的分离鉴定及药敏实验
鸡大肠杆菌的分离鉴定及药敏实验随着养鸡业集约化、产业化的不断发展，疾病越来越多，细菌对抗生素的耐药性越来越强，在临床疾病防治工作中，要取得较好的治疗效果，需要选择对致病菌比较敏感的药物来进行预防和治疗，达到有效控制疾病的目的。
为了控制鸡大肠杆菌在鸡群中的传播，我们对送检的疑似大肠杆菌病例进行病原的分离鉴定，并对分离菌的培养特性、致病力及抗菌药物的敏感性进行了研究，为有效防制鸡大肠杆菌病提供了依据。
关键词：大肠杆茵；分离鉴定；药敏1 材料1.1病料来源采自鸡场150～200日龄有典型气囊炎、肝包膜炎、心包膜炎和败血症的病死蛋鸡的肝脏、脾脏、心血等。
1.2 培养基普通琼脂培养基与普通肉汤培养基[LB培养基：固体：胰蛋白胨1.0g加入酵母提取物0.5g、NaCl0.5g，、琼脂粉1.5g使其充分溶解，高压灭菌20min，铺板并保存于4℃”。
液体：胰蛋白胨1.0g加入0.5g酵母提取物、0.5g NaCl，然后定容至100ml，高压灭菌20min，4℃保存]麦康凯琼脂培养基水解酪蛋白（MH）培养基三糖铁琼脂（蛋白胨20g，牛肉浸膏5g，乳糖10g，蔗糖10g，葡萄糖1g，NaCL5g，硫代硫酸钠0.2g，硫酸亚铁0.2g，琼脂粉20g，加热溶解后PH调至7.4加入0.4%酚红水溶液6.3ml蒸馏水定容1000ml，分装4-5ml灭菌，制成底层较深的斜面）胰蛋白胨水溶液（蛋白胨2.5g，NaCL 1.25g，蒸馏水250ml，PH调至7.6，分装灭菌）葡萄糖蛋白胨水溶液（100mlpH7.6的邓亨氏蛋白胨水中加葡萄糖1g，溶解后分装1ml 每管，灭菌）1.3 仪器与器材超净工作台，天平、接种环，平皿，试管，灭菌锅、恒温培养箱、显微镜、离心机、细菌微量生化反应器、pH计、旋涡混合振荡器96孔板、灭菌试管、容量瓶、刻度吸管、接种环、移液器和吸头等生化发酵管（葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、乳糖、尿素分解管、硫化氢、枸橼酸盐、赖氨酸、苯丙氨酸、鸟氨酸、半固体琼脂、蛋白胨水、木糖、葡萄糖磷酸盐、山梨醇等）1.4 药物与试剂琼脂，肉汤，麦康凯琼脂，95%酒精、甲基红、α萘酚酒精、氢氧化钾、结晶紫、草酸铵、碘化钾、碘片、复红、MH肉汤、MH琼脂M-R试剂（用95%酒精60ml溶解0.02g甲基红，定容100ml）V-P试剂（甲：5%α萘酚酒精溶液；乙：40%氢氧化钾水溶液，装于棕色瓶，4℃保存）草酸铵结晶紫染液（A液：结晶紫2g研细后加入95%酒精20ml使之溶解；B液：草酸铵1g溶于100ml蒸馏水，两液混合）革兰氏碘液（2g碘化钾溶解于少量水中，加入1g碘片使之完全溶解，定容300ml）复红染液（2.5ml复红加100ml酒精，取混合液10ml加80ml蒸馏水）2. 大肠杆菌的分离鉴定2.1大肠杆菌的分离培养无菌采集病、死鸡的肝脏、心血等组织，划线接种于普通琼脂平板、麦康凯琼脂平板及普通肉汤，37℃培养18～24h，挑取可疑菌落接种在麦康凯琼脂平板/普通琼脂上，37℃培养18～24 h；再挑取粉红色单个菌落再接种在麦康凯琼脂平板/普通琼脂上分区划线，37℃培养18～24h。
鸡病原性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验
2018年第2期鸡大肠杆菌病是由大肠杆菌引起的表现多种临床症状及病理变化的一类疾病，该病在养鸡业中很常见，给养鸡业造成一定的经济损失。
现在养鸡形式多以集约化饲养为主，养殖密度的增大加剧了该病的发生及流行，另外抗菌药物使用不当时有发生，使耐药性的产生更趋严重，给大肠杆菌病的防治带来诸多困难。
笔者分别从不同养鸡厂的病死鸡中分离出9株大肠杆菌，对分离出的9株大肠杆菌进行培养、染色、形态与生化特性及药敏试验，以期为临床防治鸡大肠杆菌病提供一定的参考依据。
1材料及方法采取自天津蓟县周边不同肉养鸡厂具有典型病变病死鸡的心血及脏器。
普通琼脂平板，营养肉汤，麦康凯平板，微量发酵管，M-R 试剂，V-P 试剂。
1日龄健康雏鸡。
（1）氧氟沙星；（2）盐酸环丙沙星；（3）乳酸环丙沙星；（4）沙拉沙星；（5）恩诺沙星；（6）洛美沙星；（7）培氟沙星；（8）双氟沙星。
均为原粉，市购，含量均达到90%以上，按试验要求配制成所需浓度，4℃保存备用。
采取症状典型病死鸡的心血、肝脏和脾脏，接种于麦康凯琼脂平板，37℃培养24h 。
挑取麦康凯琼脂平板上的粉红色菌落，按常规方法进行涂片、革兰氏染色、镜检。
1.6.1生化试验挑取麦康凯琼脂平板上的粉红色菌落，接种于肉汤37℃培养18h 。
然后将肉汤培养物接种于微量发酵管进行发酵试验，并进行生化反应试验。
1.6.2致病性试验选取10只10日龄健康雏鸡并分成2组，每组5只，第1组按照0.5mL/只的剂量腹腔接种肉汤培养物，第2组按照0.5mL/只的剂量腹腔注射生理盐水，观察各组发病情况。
判定标准：抑菌圈直径平均值小于10mm 为抗菌；10mm 轻度敏感；11~15mm 中度敏感；16~20mm 高度敏感。
2结果分离培养及纯培养结果表明其培养特性具有共同的特点，在普通琼脂平板上为灰白色、半透明、圆形光滑的中等大小菌落；在普通肉汤中可使肉汤均匀浑浊有腥臭味，试管底有沉淀物呈灰白色，轻摇后呈云雾状散开；在麦康凯平板上为砖红色、圆形微凸、边缘整齐、光滑湿润的小菌落。
鸡源大肠杆菌的分离与鉴定
菏泽学院Heze University本科生毕业设计（论文）题目鸡源大肠杆菌的分离与鉴定姓名学号系别制药工程系专业动物医学指导教师职称菏泽学院教务处制目录摘要 (1)关键字 (1)Abstract (1)Key words (1)引言 (2)1 材料与方法 (3)1.1材料 (3)1.1.1培养基及配制 (3)1.1.2试验仪器 (3)1.1.3药敏纸片 (3)1.1.4生化发酵管 (3)1.1.5大肠杆菌O因子诊断血清 (4)1.1.6 试验动物 (4)1.2方法 (4)1.2.1病料采集 (4)1.2.2病原体分离 (4)1.2.3病原体的纯培养 (4)1.2.4革兰氏染色镜检 (4)1.2.5生化试验 (4)1.2.6 动物试验 (4)1.2.7 血清学鉴定 (5)1.2.8 药敏试验 (5)2 结果与分析 (5)2.1病菌的培养及镜检结果 (5)2.2 生化试验鉴定结果 (5)2.3 抗原测定结果 (5)2.4 动物试验结果 (5)2.5 药敏试验结果 (5)3 讨论 (6)参考文献 (7)致谢 (8)鸡源大肠杆菌的分离与鉴定动物医学专业学生指导教师摘要：山东青岛即墨某鸡场所养雏鸡发生一种以败血症、高死亡率为特征的急性传染病，病鸡的临床症状多表现为精神萎靡，食欲减退或废绝，排白绿色稀粪等，剖检发现肝脏纤维素性炎症，呈铜绿色，脾充血、肿胀，心外膜水肿等。
从病鸡中分离到一株致病菌，经细菌学检查和动物试验，确定该致病菌为大肠杆菌，抗原鉴定该菌的优势血清型为O78。
环丙沙星、丁胺卡那、卡那霉素、新霉素、链霉素对该菌高敏；庆大霉素、罗红霉素对该菌中敏；对强力霉素、恩诺沙星对该菌低敏；对林可霉素、四环素、阿莫西林对该菌耐药。
关键词：鸡；大肠杆菌；分离与鉴定；药敏试验Isolation and Identification of E.coli from ChickenStudent Majoring in Veterinary MedicineTutorAbstract:An acute infectious diseases characterized by high mortality rate and sepsis was occurrenced in Chicken farms of Jimi in Shandong province, most of the chickens showed clinical symptoms of listlessness,loss of appetite,evacuated white-green liquid manure,and pathological change was showed that liver was copper green with fibrinous inflammation,spleen was congestion and swelling,epicardium edema and so on.A strain was isolated from diseased chickens and was examined with bacteriology inspection and animal test,and the result shows that the strain is Escherichia coli,and the serotype of the bacterium is O78 by antigenic identification.The bacterium is high-sensitivity with Ciprofloxacin,kanamycin,neomycin and streptomycin,middle-sensitivity with Gentamicin and net-mycin,low-sensitivity with doxycycline and enrofloxacin,and drug resistance with lincomycin,tetracycline and amoxicillin.Key words:chicken;Escherichia coli;Isolation and Identification;susceptibility test引言鸡大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起的鸡的不同类型疾病的总称[1]，是一种急性或慢性的细菌性传染病。
鸡源大肠杆菌临床株的分离鉴定及药敏试验
鸡源大肠杆菌临床株的分离鉴定及药敏试验2021年第3期鸡源大肠杆菌临床株的分离鉴定及药敏试验邹导夫，吉艺宽，李美娣*（梅州职业技术学院，广东梅州514011）摘要：研究2株分离自广东博罗地区某养鸡场和梅州地区某养鸡场的鸡源大肠杆菌进行分离鉴定和药物敏感试验，根据细菌培养特性试验与分子生物学的鉴定，确定分离菌株为鸡源性大肠杆菌并分别命名为ECGD2010-1株和ECGD2010-2株。
对分离鉴定所得菌株进行红霉素、青霉素、氨苄西林、头孢唑林、诺氟沙星、环丙沙星、复方新诺明、氯霉素、庆大霉素和丁胺卡那霉素的药物敏感试验。
结果显示，ECGD2010-1株高度耐药，仅对庆大霉素和丁胺卡那霉素敏感；ECGD2010-2株除对氨苄西林耐药外，对其他抗生素均表现出高度敏感。
关键词：鸡源大肠杆菌；分离鉴定；耐药性；药敏试验中图分类号：S855.1文献标识码：A文章编号：1672-9692（2021）03-0026-04Isolation,identification and drug sensitivity test of clinical strains of E.coli from chickenZou Daofu,Ji Yikuan,Li Meidi*(Meizhou Polytechnic,Guangdong Meizhou514011)Abstract:In the assay,two chicken-derived Escherichia coli strains isolated from a chicken farm in Guangdong were isolated and identified and tested for drug sensitivity.According to the bacterial culture characteristic test and molecular biology identification,the isolated strains were identified as chicken-derived Escherichia coli and named separately ECGD2010-1strain and ECGD2010-2strain.Drug sensitivity tests of erythromycin,penicillin,ampicillin,cefazolin, norfloxacin,ciprofloxacin,compound trimethoprim,chloramphenicol,gentamicin and amikacin were carried out to the isolated strains.The drug susceptibility test of muscarin and amikacin showed that the ECGD2010-1strain was highly resistant to gentamicin and amikacin;the ECGD2010-2strain was resistant to ampicillin,showed high sensitivity to other antibiotics.Key words:Chicken-derived Escherichia coli;Isolation and identification;Drug resistance;Drug sensitivity test大肠杆菌（Escherichia coli）学名大肠埃希氏菌，在养鸡业中长期存在，各种日龄的鸡均可感染，其中2~4周龄雏鸡易感性最高，发病时表现为急性败血症状，病死率较高[1-2]。
鸡大肠杆菌的分离鉴定
鸡大肠杆菌的分离鉴定李本科【摘要】本研究用菌采自滨州市某鸡场疑似大肠杆菌病死鸡的心血,肝脏,肾脏。
进行病原菌的分离,鉴定,生化试验动物试验和药敏试验,结果显示,引起该鸡场发病的病原菌为大肠杆菌,该菌株有较强的致病性,对阿米卡星、链霉素、庆大霉素敏感,对环丙沙星,诺氟沙星,卡那霉素中度敏感,而红霉素、青霉素、氨苄西林,头孢唑啉,头孢噻吩和复方新诺明对分离菌有耐药性。
表明该鸡场出现了耐药的致病性大肠杆菌,在以后的肉鸡生产中应慎用抗生素,在使用药物治疗大肠杆菌病时,应根据药敏试验结果,选择敏感药物,且应注意交替用药,按疗程投药。
【期刊名称】《山东畜牧兽医》【年(卷),期】2012(033)001【总页数】2页(P17-18)【关键词】大肠杆菌;分离鉴定;致病性;生化试验;药敏实验【作者】李本科【作者单位】山东省滨州市畜牧兽医局,256600【正文语种】中文【中图分类】S852.612鸡大肠杆菌病是由大肠埃希氏菌的某些血清型引起的鸡的传染病。
作为各种动物体内的常驻菌，大肠杆菌在自然环境中几乎无处不在，由其引起的大肠杆菌病流行分布极为广泛和普遍，给养鸡业带来巨大的经济损失。
本病一年四季均有发生，没有明确的季节性，尤其冬季和春季多发，该病症状一般均呈典型经过。
幼雏多发脐带炎，突然死亡。
大部分鸡只体温升高、精神委顿、羽毛蓬乱、呼吸困难和食欲废绝。
黄、白、绿稀便交替出现。
急性型往往发病后一周内即死亡，亚急性或慢性型多发于成年蛋鸡，患病的鸡精神不振，食欲减少，饮水量增加，逐渐消瘦和下痢，但死亡率不高。
除此之外，常见气囊炎的发生，表现程度不一的呼吸道症状。
有的鸡关节肿大呈跛行和胸卧姿势。
还有出现眼球炎及母鸡卵巢炎、输卵管炎等。
剖检可见气囊壁浑浊增厚，肝脏肿大变绿，表面有纤维素样物质覆盖，肠黏膜出血及产蛋母鸡卵巢变性成瘤块状[1]。
为了控制该大肠杆菌对鸡群的危害，笔者对送检的疑似大肠杆菌病料进行了分离鉴定，并通过药敏实验确定了敏感性药物，为有效防治大肠杆菌病提供了依据。
鸡大肠杆菌病病原的分离及药敏试验_兰罗勋
提供病料的鸡场， 病鸡表现精神萎靡， 采食减少， 排白 色、绿色稀粪， 冠呈暗紫色， 头插于翅内， 腿部干燥， 短期内死 亡。发病率为 ３０％～４０％， 病死率为 ２０％， 产蛋率下降 １０％， 曾 用 卡 那 霉 素 、四 环 素 、链 霉 素 等 多 种 药 物 治 疗， 疗 效 不 佳 ， 陆 续死亡。经确诊为大肠杆菌病后， 根据药敏试验结果， 对已出 现 症 状 的 病 鸡 用 １０％ 氟 苯 尼 考 注 射 液 肌 肉 注 射 ， 每 只 ０．１ｍＬ， 每天 １ 次， 连用 ３ｄ， 未出现症状的鸡群用“加康”（主要 成分： 氟苯尼考）按每吨饲料拌 ４００～８００ｇ 喂服， 连用 ３ｄ， 同时 用多种维生素混饮（ 按常规剂量） ， １ 周后， 疫情得到控制。 ５ 小结与讨论
盐水， 隔离饲养。 ３．２．６ 药 敏 试 验 用 灭 菌 接 种 环 取 大 肠 杆 菌 纯 培 养 物 置 于 ５ｍＬ 灭菌生理盐水中， 用灭菌玻璃棒 充 分 混 匀 ， ，取 此 液 滴 于 普通琼脂培养基表面， 用灭菌玻璃棒涂布使其覆盖整个培养 基 表 面 ， 置 ３７℃培 养 ８～１０ｍｉｎ 后 取 出［４］。用 灭 菌 尖 头 镊 子 取 １４ 种 抗 菌 药 纸 片 分 别 对 称 贴 到 上 述 的 营 养 琼 脂 培 养 基 上 。 每个平皿贴 ４ 种纸片， 为使抗菌药纸片与培养基表面密贴， 可用镊子轻轻按一下纸片， 在药敏纸片上做上标记或在平板 底上用笔写上其药名或贴上标签。将贴纸片的平板底部朝 下， 放 ３７℃温箱中培养 １８～２４ｈ。 ３．２．７ 用药治疗试验 确诊为大肠杆菌病后， 根据药敏试验 选择敏感药物对提供病料的鸡场进行治疗， 观察结果。 ４ 试验结果 ４．１ 细菌形态学检查
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毕业论文：鸡大肠杆菌病病原的分离与鉴定及药敏试验河南科技学院2013届本科毕业论文（设计）鸡大肠杆菌病病原的分离与鉴定及药敏试验学生姓名：时科所在院（系）：动物科学学院所学专业：动物医学导师姓名：常新耀完成时间：2013年5月鸡大肠杆菌病病原的分离与鉴定及药敏试验摘要鸡大肠杆菌感染是危害养鸡业的主要细菌性传染病，无菌采取南阳市唐河县某鸡场中疑似大肠杆菌病死雏鸡肝、脾、肺等脏器病料，通过结合综合流行病学、临床学、病理学、生物化学和传染病学，进行分离与鉴定，最终确诊为鸡大肠杆菌病。
从部分养鸡场分离出的细菌进行药敏试验，通过药敏试验筛选出敏感药物，为治疗与预防提供理论依据和实际应用参数。
关键词：大肠杆菌，分离，鉴定，药敏试验The Separation,Identification And Antimicrobial SusceptibilityTest Of Chicken ColibacillosisAbstractChicken colibacillosis infection is the major infectious diseases in poultry industry. Sterilely resorting to visceral organs, such as livers ,spleens, lungs of illness, chicklings that are suspected colibacillosis of each large chicken places in Shanxian,by the means of combing with epidemiology,clinical, pathology, biochemistry and epidemiology,we can separate and identificate to diagnose whether it is colibacillosis or not. By the means of form dyeing and Biochemical tests and then antimicrobial susceptibility test on bacterium that is separated from part chicken places,we can screen some Sensitive drugs and find more effective proprietary to Provide theoretical basis and practical parameters of treatment and prevention.Key words: Colibacillosis，Separation，Identification，Antimicrobial Susceptibility Test目录前言 01 材料与方法 01.1 材料 0病料来源 0仪器及设备 0培养基与试剂 0试验动物 (1)1.2试验方法1病理剖检 (1)大肠杆菌的分离鉴定 (1)病料采集 (1)分离培养 (1)镜检 (2)生化鉴定 (2)致病性试验 (2)药敏试验 (2)2结果与分析 (2)2.1病理剖检 (2)2.2大肠杆菌的分离培养 (3)2.3形态学观察 (3)2.4生化鉴定 (4)2.5致病性试验 (5)2.6药敏试验 (5)3讨论 (6)3.1注意种蛋卫生 (7)3.2加强卫生管理 (7)3.3适当添加维生素和微生态制剂，增强机体抵抗力 (7)3.4免疫预防接种 (7)4结论 (8)参考文献 (8)致谢 (10)前言鸡大肠杆菌病是由大肠埃希氏杆菌(Escherichiacoli，E.coli)某些血清型菌株引起的一类疾病的总称[1]。
大肠杆菌致病性菌株的致病因子主要由该病原体的三个特征所决定：侵袭力，感染力，致病性潜力。
该菌主要有三个原类型，即菌体抗原，表面抗原，鞭毛抗原。
该菌对外界的抵抗能力不强，一般60℃15min便可致死，对一般消毒药的抵抗力也很弱，但常用的消毒药水均能将其杀死[2]。
大肠杆菌病可以引起胚胎死亡、脐炎、败血症、肉芽肿、全眼球炎、气囊炎、腹膜炎、输卵管炎等一系列病症，是家禽中最常见的病原菌之一[3]。
由于该病在一些养殖场中严重发生，兽医临床上抗菌药物不得不大量地被应用，导致大肠杆菌耐药菌株不断出现，耐药谱不断扩大，形成恶性循环；同时加剧了抗菌药物在畜禽体内的残留，给养禽业的持续发展和人类的身体健康带来潜在危害[4]。
随着唐河县养鸡业的迅速发展与高度集约化饲养，鸡大肠杆菌已成为鸡群中重要疾病之一。
2012年12月，唐河六和饲料公司合作某鸡场所饲养的鸡于24天开始发病，两天之内，死亡21只。
病鸡多精神沉郁，食欲减退，腹部膨大，粪便呈灰绿色或黄色，本实验室对送检的病鸡48只，病死鸡进行了剖检、病理学诊断和病原检测，确诊该鸡场发生了大肠杆菌病，筛选出对这些致病菌比较敏感的几种药物进行治疗，控制疫情。
1 材料与方法1.1 材料所有病料来自于唐河六和饲料公司合作某鸡场提供的病鸡，初步确诊为大肠杆菌病，病鸡48只，其中死亡35只，死亡鸡死亡时间不超过24h，其中肉仔鸡、蛋雏鸡27只，产蛋鸡21只。
光学显微镜、恒温箱、高压灭菌器、无菌实验台、微量移液器等（由南阳市唐河六和化验室提供）。
麦康凯琼脂（NA）、伊红美兰琼脂、普通肉汤、营养琼脂（NA）验所用的培养基均参照《兽医微生物实验指导》制备。
硝酸盐还原剂、氧化酶试剂、微量生化试验管（购于上海睿智化学研究有限公司）、药敏纸片购自南阳市畜牧兽医站(上海市医学化验所试剂厂生产)1.1.4 试验动物小白鼠（购于南阳畜牧兽医站）和各日龄健康鸡（购自唐河县分散养殖场）1.2试验方法对送检的35只病死鸡进行了病理剖检及大体病变的观察。
样品↓在各种培养基上划线分离(置37℃培养24h)↓菌落形成↓—————————————————————↓↓↓挑取菌落染色镜检纯培养培养特性检查————————————————————————————↓↓↓↓染色镜检生化试验致病力测定药敏试验采集鸡场病死鸡各一只，无菌取心脏和肝脏。
注射器自心脏采血1ml用于细菌分离培养，用灭菌后的外科手术刀片烧烙脏被膜后，再用接种环刺入肝实质取肝样做分离培养。
以无菌操作的方法，将采取的病料，分别接种在普通琼脂平板、麦康凯琼脂、伊红美兰琼脂，37℃恒温培养24h，然后观察。
挑取表面光滑、边缘整齐、灰白色、半透明的单个微隆起小菌落，划线接种于肉汤中，在37℃恒温培养24h[5]。
挑取麦康凯琼脂平板上培养2O h的新鲜菌落,光滑、砖红色的单个菌落涂片，将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染液，染1min，水洗；滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗；滴加95%乙醇脱色约15～30s,直至染色液被洗掉，不要过分脱色，水洗；滴加番红染液，复染1min，水洗、待干、镜检。
结果：革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色[6]，观察记录菌体形态和染色特征。
a、糖发酵试验取可疑菌分别接种葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖发酵管，37℃培养2～3d，观察结果。
b、MR（甲基红）试验和VP（乙酰甲基甲醇试验）试验取可疑菌接种葡萄糖蛋白胨水，37℃培养2～3d，分别加入MR和VP指示剂，观察结果。
c、吲哚试验取蛋白胨水培养管先加少量乙醚，塞紧棉塞振摇试管，使蛋白胨水培养液与乙醚充分混匀，放于试管架上静置片刻，待乙醚漂浮于液面上层时，沿管壁滴加吲哚试剂2～3滴，观察其颜色变化[7]。
动物试验将分离菌接种于营养肉汤，于37℃恒温培养箱中培养24h。
取健康小白鼠6只，分为A、B两组，A组3只，腹腔接种营养肉汤菌液，每只0.2mL；B组3只，腹腔接种等量的灭菌生理盐水作对照组，分别隔离饲养观察。
取6只7日龄雏鸡，健康，也随机分为C、D两组，与小白鼠同样的方法，C组皮下接种营养肉汤菌液，每只0.2mL；D组接种等量的灭菌生理盐水，隔离饲养。
药敏纸片购于南阳市唐河县畜牧兽医站(上海市医学化验所试剂厂生产)，选取不同地区的分离株6株进行药敏试验。
在无菌条件下将培养24h的肉汤培养物，用灭菌生理盐水作10倍稀释，取0.2mL滴加在普通琼脂平板培养基上，用灭菌棒涂匀，平板置室温下干燥3～5min，用无菌镊子将卡那霉素、新霉素、庆大霉素、呋喃妥因、四环素、链霉素6种药物的含药纸片紧贴于琼脂表面，各纸片中心相距大于20mm，纸片距平板内缘大于15mm[8]；置35℃恒温箱内16～18h后，观察结果。
2结果与分析2.1病理剖检剖检时可闻到特殊臭味，见病鸡胸腔、腹腔内有大量黄色干酪样渗出物腹腔内大块黄色块状渗出物；肝脏肿大，表面瘀血，有散在的白色小坏死灶；纤维性心包炎，心包浑浊增厚，心包腔内充满大量淡黄色液体，心包膜及心外膜上有白色纤维蛋白附着，严重者可见心包膜与心外膜粘连；肺脏瘀血，表面的纤维性渗出物明显；肠黏膜弥漫性出血，整个肠管呈紫红色；肾脏体积肿大，呈紫红色，肾脏出血，水肿，质脆，一触即烂。
2.2大肠杆菌的分离培养麦康凯琼脂上形成红色、圆形隆起、光滑湿润、边缘整齐、直径为1.5～2.5毫米的小菌落（见图1）；在伊红美蓝琼脂上形成紫黑色、具有金属光泽的小菌落（见图2）；在普通琼脂斜面上形成灰白色的菌落；在普通肉汤中呈现均匀浑浊，管底形成灰白色沉淀，并有粪臭味。
图1 麦康凯琼脂图2 伊红美蓝琼脂2.3形态学观察经镜检可见到革兰氏阴性菌，两端钝圆，有长约1.5～3.O微米的短小杆菌，偶有2～3个菌体相连，无芽孢。
（见图3）图3 镜检结果2.4 生化鉴定将分离到的菌株，经生化试验鉴定，分解葡萄糖、麦芽糖、甘露醇产酸产气，不分解蔗糖,MR 试验呈阳性，VP 试验为阴性，吲哚试验阳性,硝酸盐试验阳性，枸橼酸盐试验阴性，硫化氰试验阴性。
此结果符合大肠杆菌的特征，见表1。
表1 分离菌生化试验结果生化试剂生化试剂乳糖 ⊕ 枸橼酸盐— 葡萄糖 ⊕ VP 试验— 甘露醇 ⊕ 靛基质+ 麦芽糖⊕ MR 试验+ 蔗糖— 硫化氢— 阿拉伯糖— 尿素酶— 山梨醇— 吲哚+ 硝酸盐+注：+表示阳性；一表示阴性；○+ 表示阳性并产气[9]。
2.5致病性试验小白鼠试验结果：接种36h内A组小白鼠全部死亡，解剖可见肝脏肿大、出血和灰白色坏死灶，脾脏瘀血肿胀等明显病理变化，从死亡小白鼠的肝、心、脾等病料中均能回收到接种菌；B组小白鼠饲养1周后全部存活，剖检无病理变化。
雏鸡试验结果：接种1周后，C组雏鸡全部死亡，取死鸡的肝、脾接种于普通营养琼脂培养基上，经37℃恒温培养24小时后，有菌落生长，生化鉴定及革兰氏染色表明：该菌与接种菌为同种细菌；D组雏鸡则正常。