酶水解酪蛋白(酪素)使用说明
酶水解酪蛋白(酪素)
CaseinEnzymaticHydrolysate产品编码产品名称规格
北京华越洋JG553酶水解酪蛋白(酪素)100g,500g
产品简介：
中文名：酶水解酪蛋白(酪素)
中文别名：酶水解酪蛋白(酪素）
英文名：CaseinEnzymaticHydrolysate
英文别名：CaseinEnzymaticHydrolysate
CAS：91079-40-2
级别:ReagentGrade
纯度:N/A
存储条件：118~25°C
物理性质：浅黄色粉末，溶于水
产品用途：
常用于制备培养基
酶水解酪蛋白(酪素)其他培养基：
AAM培养基A1培养基DKW培养基NT培养基MT培养基KnudsonC培养基ISP培养基
显色培养基血琼脂平板培养基R3增殖培养基L-15培养基麦康凯培养基牛肉膏蛋白胨培养基
酶样品测定方法
酶样品待测酶液制备方法
磷酸缓冲液的制备
中性蛋白酶（pH=7.5）
准确称取磷酸氢二钠6.02g和磷酸二氢钠0.5g，加水定容至1000ml，配好后用pH计校正。
淀粉酶（pH=6）
称取磷酸氢二钠45.23g，柠檬酸8.07g，用水溶解并定容于1000ml，配好后用pH计校正。
脂肪酶（pH=7.5）
称取磷酸二氢钾1.96g，十二水磷酸氢二钠39.62g，用水溶解并定容于500ml，配好后用pH计校正。
酶液的制备
称取样品1.000g至10ml试管中，加入磷酸缓冲液5ml，置于高速匀浆机捣碎，然后连残渣一起倒入100ml容量瓶中定容，室温静置1h，期间反复震荡3次，然后取4ml在16000r/min下离心5分钟，取上清液4℃保存待测。
酶活测定
淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶采用建成生物工程研究所试剂盒测定，中性蛋白酶采用福林酚法测定。
淀粉酶
原理：淀粉酶能水解淀粉生成葡萄糖、麦芽糖及糊精，在底物浓度已知并且过量的情况下，加入碘液与未水解的淀粉结合生成蓝色复合物，根据蓝色的深浅可推算出水解的淀粉量，从而计算出淀粉酶的活力。
单位定义：在37℃、pH6.0下，与底物作用30分钟，水解10mg淀粉定义为1个淀粉酶活力单位。
分析方法：
试剂：0.4mg/ml底物缓冲液，0.01mol/L碘应用液。
测定管 空白管
底物缓冲液ml 0.5 0.5
待测样本ml 0.1
混匀，37℃水浴，准确反应7.5分钟。
碘应用液 0.5 0.5
蒸馏水 3.0 3.1
混匀，660nm波长，1cm光径，蒸馏水调零，测定各管吸光度。
计算：酶活力（U/g）= (空白管吸光度-测定管吸光度)/空白管吸光度 ×(0.4×0.5/10) ×(30分钟/7.5分钟) ÷（取样量×酶液浓度）
脂肪酶
原理：甘油三酯和水制成乳化液，因其胶束对入射光的吸收及散射而具有乳浊性状，胶束中的甘油三酯在脂肪酶的作用下发生水解，使胶束分裂，散射光或浊度因而降低，降低的速率与脂肪酶活力有关。
碱性蛋白酶使用方法
碱性蛋白酶使用方法
碱性蛋白酶是一种常用的酶类试剂，广泛应用于生物学、生物化学和分子生物学等领域。它能够在碱性条件下高效催化蛋白质水解反应，常用于蛋白质纯化、酶切、免疫学实验等。本文将介绍碱性蛋白酶的使用方法，希望能够对使用者有所帮助。
1. 确定使用条件。
在使用碱性蛋白酶前，首先需要确定实验所需的碱性条件。一般来说，碱性蛋白酶的最适作用pH为8.0-9.5，因此在实验中需要选择适合的缓冲液来维持碱性条件。
2. 酶解反应条件。
将待酶解的蛋白样品与适量的碱性蛋白酶按照比例混合，通常在室温下进行反应。酶解的时间可以根据需要进行调整，一般情况下15-60分钟即可完成反应。
3. 反应终止。
在酶解反应结束后，需要及时终止反应以防止酶的过度作用。一般常用的方法是加入蛋白质酶抑制剂或直接加热至95℃以上，使酶失活。
4. 样品处理。
酶解后的样品可以根据实验需要进行进一步处理，如进行电泳分析、质谱分析、免疫印迹等。
5. 储存条件。
碱性蛋白酶通常以粉末形式供应，应密封保存于-20℃以下，避免受潮和高温。在使用过程中，应尽量避免长时间暴露于室温下。
6. 安全注意事项。
在使用碱性蛋白酶时，应注意避免吸入粉尘或接触皮肤和眼睛，避免误食。使用过程中应佩戴口罩、手套和护目镜，避免产生粉尘。
总之，碱性蛋白酶是一种非常重要的酶类试剂，正确的使用方法能够有效提高实验效率，获得准确的实验结果。希望本文介绍的使用方法能够对使用者有所帮助，祝实验顺利！
蛋白酶测定方法
蛋白酶活性测定方法
一 蛋白酶活力单位定义
1g 固体酶粉(或1mL液体酶)，在一定温度和pH值条件下，1min水解酪素产生1μg酪氨酸为一个活力单位，以u/g(u/mL)表示。
二 测定原理
蛋白酶在一定的温度与pH条件下，水解酪素底物，然后加人三氯乙酸终止酶反应，并使未水解的酪素沉淀除去，滤液对紫外光有吸收，可用紫外分光光度法测定。根据吸光度计算其酶活力。
三 应用范围
本法适用于各种含有酸性蛋白酶的复合酶和液体酶及单酶的测定。
四 测定条件
4.1 底物： 酪蛋白
4.2 pH： 3.00
4.3 温度： 40℃±0.5℃
4.4 保温时间： 10min
五 仪器
5.1 紫外分光光度计
5.2 超级恒温水浴 40±0.2℃
5.3 秒表
5.4 分析天平：感量0.0001g
六 试剂和溶液
6.1.2 碳酸钠溶液c(Na2CO3)=0.4 mol/L
称取无水碳酸钠(Na2CO3)42.4 g ，用水溶解并定容至1000 mL。
6.1.3 三氯乙酸c(CCI3·COOH)=0.4 mol/L
称取三氯乙酸65.4 g ，用水溶解并定容至1000 mL。
6.1.4 氢氧化钠溶液c(NaOH)=0.5mol/L
按 GB 601配制。
6.1.5 盐酸溶液c(HCl)=1 mol/L及0.1 mol/L
按 GB 601配制。
6.1.6 缓冲溶液
a.磷酸缓冲液(pH=7.5)，适用于中性蛋白酶
称取磷酸氢二钠(Na2HP04·12H20)6.02 g和磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H20)0.5
g，加水溶解并定容至1000 mL。
b.乳酸缓冲液(pH=3.0 ) 适用于酸性蛋白酶
甲液 称取乳酸(80%～90%)10.6 g，加水溶解并定容至1000 mL。
乙液 称取乳酸钠(70%)16 g，加水溶解并定容至1000 mL。
使用溶液 取甲液8 mL，加乙液1 mL,混匀，稀释一倍，即成0.05mol/L乳酸缓冲溶液。
用胰蛋白酶酶解蛋白的基本方法
附件1：用胰蛋白酶酶解蛋白的基本方法
基本原理：
将蛋白样品还原并烷基化后，用胰蛋白酶把蛋白酶解成肽段，然后用液相色谱/质谱仪对其进行分析。
试剂、生产厂家以及产品编号：
Reagent Manufacturer Catalog #
Iodoacetic acid Pierce Endogen 35603
Guanidine SIGMA G-4505
Dithiothreitol (DTT) BIO-RAD 161-0611
Centricon filters (10000 Da) Millipore 42407
Ammonium bicarbonate SIGMA A-6141
Trpsin Promega V511C
使用方法：
1. 取约1毫克的总蛋白样品放入离心管中，加入1毫升6M的Guanidine(配制在100mM
NH4HCO3中，PH 8.0)溶液，得到1mg/mL的蛋白溶液。
2. 加入20微升1M的DTT到上述离心管中，震荡混合5秒钟。
3. 将上述离心管恒温在37℃条件下反应1小时(以还原蛋白中的双硫键)。
4. 加入25微升1M新鲜配制在1M NaOH中的Iodoacetic acid，在避光、室温条件下放置30分钟。
5. 将以上样品平均注入两个(每个约注入500mL)具有分离10kDa以下蛋白的Centricon
filter，以12000rpm离心50分钟。
6. 在以上离心管中分别加入200mL 0.1M的NH4HCO3，并离心30分钟。多次重复此操作，以使蛋白样品中的Guanidine含量降到0.5M左右。
7. 将以上两个离心管滤层上的蛋白样品，分别、多次加入总量约500mL 0.1M的NH4HCO3溶液以完全溶解，并将这些含有蛋白样品的溶液转移到装有20mL的Trypsin试管中，再加入500mL 0.1M的NH4HCO3溶液。使试管中液体的总量为1000mL，Trypsin约占总量的1/50。
蛋白质酶解操作规程
Digest SOP
- 1 - 有还原烷基化蛋白质消化操作流程
1. 将所选择的胶点用1.5mm切胶笔切下，置于eppendorf (EP) 管或96孔PCR板中,并记录点号及相应的位置；
2. 加50μL DD.H2O 洗两次，10min/次；
3. 加50 mM NH4HCO3/乙腈=1：1溶液(考染脱色液)50μL，超声脱色5min或37℃脱色20min，吸干；(若为银染, 一般不需要脱色; 若必须脱色,使用15mM
K3Fe(CN)6/50mM Na2S2O3 , 轻摇直到变为淡黄色透明,再用水反复洗至无色)
4. 重复步骤3，直至蓝色褪去；
5. 加乙腈50μL脱水至胶粒完全变白，真空抽干10min；
6. 加10 mM DTT（10μL 1M DTT，990μL 25mM NH4HCO3配制） 20μL，56℃水浴1hr；
7. 冷却到室温后，吸干，快速加55 mM IAM （55μL 1M IAM，945μL 25mM
NH4HCO3配制）20μL，置于暗室45min；
8. 依次用25 mM NH4HCO3 ( 2X10分钟)、25 mM NH4HCO3 +50％乙腈溶液( 2X10分钟)和乙腈洗(10分钟)，乙腈脱水到胶粒完全变白为止，真空抽干10min；
9. 将0.1μg/μL的酶储液以25 mM NH4HCO3稀释10~20倍，每EP管加2~3μL，稍微离心一下，让酶液充分与胶粒接触，4℃或冰上放置30min，待溶液被胶块完全吸收，加25mM NH4HCO3 至总体积10-15μL置37℃，消化过夜；
10. 加入1%TFA终止反应，使TFA终浓度为0.1％，振荡混匀，离心。
说明:
1.每加一次溶液都要漩涡振荡，胶粒要完全浸没在溶液中，进行下一步操作前要把溶液吸走。
2．如果胶粒超过1.5mm3,把胶粒分成约为1.5mm3大小再进行脱色，使用的各种溶液的量也相应增加。
《课题3 分解纤维素的微生物的分离》导学案
文化立校 注重细节 养成习惯 规范有效
1 《课题3 分解纤维素的微生物的分离》导学案
【学习目标】
1．简述纤维素酶的种类及作用；
2．从土壤中分离出分解纤维素的微生物，了解这类微生物的应用；
3．能掌握从土壤中分离某种特定微生物的操作技术。
【学习重点】从土壤中分离分解纤维素的微生物。
【学习难点】从土壤中分离分解纤维素的微生物。
【预习指导】课前通过阅读教材、查阅教辅资料、交流，初步完成下列问题。
【学习过程】
一、基础知识
活动1：阅读P27“课题背景”和“纤维素与纤维素酶”，回答下列问题：
1、纤维素是一种由 首尾相连而成的 化合物，是含量最丰富的多糖类物质。纤维素能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生 。
2、 是自然界中纤维素含量最高的天然产物。纤维素的分解需要在 酶的催化作用下完成，请完成下列过程：
3、1个酶活力单位是指在温度为 ℃，其它反应条件最适宜情况下，在 min内转化
的底物所需要的酶量。
4、P27小实验：通过设置对照实验体会纤维素酶的作用。分析课本是如何设置对照的？
活动2：阅读P28“纤维素分解菌的筛选”，回答下列问题：
1、筛选纤维素分解菌的方法是 。该方法可以通过 反应直接筛选。
2、其原理是：刚果红可以与纤维素形成 ，当纤维素被 _分解后，红色复合物无法形成，出现以 为中心的 ，我们可以通过是否 来筛选纤维素分解菌。
二、实验设计
实验方案流程图：
活动3：阅读资料一 “土壤取样”，回答下列问题：
土壤取样：纤维素分解菌大多分布在 的环境中。若找不到合适环境，可将滤纸埋在土壤中一个月左右，也会有能分解纤维素的微生物生长。
蛋白酶产生菌的分离
蛋白酶产生菌的分离、活化选育、发酵及酶活力的测定
许多细菌和霉菌产生蛋白酶，细菌中的芽孢杆菌是常见的蛋白酶产生菌。本实验将土壤样品悬液加热处理，杀死非芽孢细菌及其它微生物后进行划线分离得到芽孢杆菌，将其接种到酪蛋白平板进行培养，根据酪蛋白平板的水解圈做初筛。也可直接将细菌或霉菌接种到酪蛋白平板进行培养，分离筛选其它蛋白酶产生菌。本实验主要包括：蛋白酶产生菌的分离纯化、产酶微生物菌种的选育、产酶微生物的发酵与酶活力的测定、蛋白酶产生菌的生长及生长曲线、培养基优化。
通过本实验项目，使学生学会从自然界中分离蛋白酶产生菌的方法，菌种的纯化技术、高产菌的选育技术；了解蛋白酶产生菌的生长情况，学会绘制其生长曲线；学会培养基优化的方法；了解蛋白酶的性质及蛋白酶的测定原理；掌握蛋白酶的发酵及酶活力测定方法。
1 实验材料
1.1 实验样品
校园内土壤样品
1.2实验仪器与材料
牛肉膏蛋白胨培养基平板、酪蛋白平板、无菌水（带玻璃珠）、芽孢染色液番红；显微镜、恒温水浴锅、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌移液管、无菌试管、血球计数板、试管、三角烧瓶、烧杯、量筒、，玻棒、电子天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸（ pH 5．5—9．0）、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、培养皿、胶头滴管、分光光度计（应符合GB9721的规定）等。 2实验方法与步骤 2.1 培养基的配制方法
1.称量
按培养基配方比例依次准确地称药品放入烧杯中。
2.溶化
在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。
3.调pH
4.分装
按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。
5．包扎
塞好棉花的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆扎，用记号笔注明培养基名称、组别、日期。 6．灭菌
将上述培养基以1.02kg/cm2（15磅/英寸2），121．3℃， 15-20min高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。
蛋白酶K溶液说明书
北京索莱宝科技有限公司
第1页共1页蛋白酶K溶液（10mg/ml）说明书货号：P1120规格：1ml/5ml保存：-20℃储存，有效期至少12个月。产品说明：ProteinaseK，中文名为蛋白酶K。进口产品配置，不含DNase，不含RNase，可直接使用。可以用于消化各种蛋白。用于各种常见的分子生物学、细胞生物学等相关实验，例如基因组DNA抽提、酶的消化去除等。酶活力>30U/mg。在37ºC、pH7.5条件下，每分钟可水解底物酪蛋白生成1µmol酪氨酸所需蛋白酶K的量，定义为一个单位（U）蛋白酶K酶活力。在很宽的pH范围内有效，有效的pH范围为pH4.0-12.5，最佳pH范围为pH7.5-8.0。蛋白酶K的最佳反应温度为65℃，但在65℃或更高的温度蛋白酶K自身的也非常迅速地降解。很多时候反应温度选择50-55℃。在0.2-1%SDS或约10mM尿素存在的情况下，蛋白酶K显示更高的酶活性。蛋白酶K的常用工作浓度为0.05-1mg/ml，根据所用缓冲液是否含有SDS、尿素、pH是否适合、温度是否适合等因素确定具体的工作浓度。常用浓度的EDTA、TritonX-100、Tween20、Sarkosyl、盐酸胍对蛋白酶K的活力影响不大。注意事项：如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
碱性蛋白酶技术参数
蛋白酶可以分为很多种，其中一种就是碱性蛋白酶，由于具有较强的分解能力，因此被广泛应用于食品、酿造、洗涤、丝绸等行业。有关企业在选择这个产品的时候需要对其技术参数信息做好详尽的了解。
碱性蛋白酶也就是碱性条件下能够水解蛋白质肽键的酶，相关的技术参数如下：
【别名】地衣芽胞杆菌蛋白酶，2709碱性蛋白酶，地衣杆菌蛋白酶
【酶活定义】在40℃，PH10.5条件下，每分钟水解酪素产生1ug酪氨酸所需的酶量为1个酶活力单位，以u表示。
【产品规格】5-160万u/g，可根据客户要求生产不同规格的产品。
【应用条件】最适PH值：9-12 最适温度：40℃--55℃
【产品用途】
1、皮革脱毛 原料皮→水洗→脱脂→碱膨胀→拔毛→剖层→脱碱→酶脱毛→水洗→浸酸→鞣制。酶脱毛具有简化物产工序，缩短周期，提高成品质量，增加得革率，降低生产成本，改变劳动成本与环境卫生，变污水为肥等优点。
2、食品加工 应用于食品行业动植物蛋白质的水解，生成多肽或氨基酸，形成具有独特风味的蛋白质水解液，被广泛使用在调味液和保健品行业当中。
3、日化行业 将蛋白酶加入洗衣粉、洗涤剂等洗涤用品中，能大幅度提高洗涤去污能力，特别对血渍、汗渍、奶渍、油渍等蛋白类污垢, 也可作医用试剂清洗生化仪器等，具有独特的洗涤效果。
以上就是对于碱性蛋白酶相关的产品信息介绍了，由于每个厂家生产的碱性蛋白酶型号不同，技术方面的信息可能总结的不全面，建议大家找到产品厂家做详细的了解。
酶活测定方法
酶活测定方法
还原法
酶与底物在特定的条件下反应,酶可以促使底物释放出还原性的基团。在此反应体系中添加
化学试剂 ,酶促反应的产物可与该化学试剂发生反应,生成有色物质。通过在特定的波长下
比色 ,即可求 出还原产物的含量 ,从而计算出酶活力的大小 。
色原底物法
通过底物与特定的可溶性生色基团物质结合,合成人工底物。该底物与酶发生反应后 ,生色
基团可被释放出来 ,用分光光度法即可测定颜色的深浅,在与已知标准酶所做的曲线比较后 ,即
可求出待测酶的活力。
粘度法
该法常用于测定纤维素酶、木聚糖酶和 β-葡聚糖酶 的活力。木聚糖和 β-葡聚糖溶液通常
情况下可形成极高的粘度,当酶作用于粘性底物时木聚糖和 β-葡聚糖会被切割成较小的分子
使其粘度大 为降低。基 于 Poiseuille 定律我们知道
,只要测定一定条件下溶剂和样品溶
液的运动粘度,便可计算特性粘数,并以此来判断酶的活力。
高压液相色谱法
酶与其底物在特定的条件下充分反应后 ,在一定的色谱条件下从反应体系中提取溶液进行
色谱分析,认真记录保留时间和色谱图,测量各个样的峰高和半峰高,计算出酶促反应生成物
的含量 ,从而换算出酶活力的数值。
免疫学方法
常用 于酶活性分析的免疫学方法包括:免疫电泳法 、免疫凝胶扩散法。这两种方法都是根
据酶与其抗体之间可发生特定的沉淀反应 ,通过待测酶和标准酶的比较,最终确定酶活力。
免疫学方法检侧度非常灵敏,可检侧出经过极度稀释后样品中的酶蛋白,但其缺点是不同厂
家生产的酶产品需要有不同特定的抗体发生反应。
琼脂凝胶扩散法
将酶作用的底物与琼脂混合熔融后 ,倒入培养皿中或载波片上制成琼脂平板。用打孔器在
琼脂平面上打出一个约4-5mm 半径 的小孔。在点加酶样并培养24h 以后 ,用染色剂显色
或用展开剂展开显出水解区,利用水解直径和酶活力关系测定酶活力。
蛋白酶活力的测定 随着生物技术的发展及环保要求的提高，越来越多的酶制剂应