18株植物内生真菌的分离纯化及鉴定
植物病原菌分离方法
病原菌分离方法
一、 实验原理：
植物患病组织内的真丝菌丝体，如果给予适宜的环境条件，除了个别种类外，一般都能恢复生长和繁殖。植物病原菌的分离就是指通过人工培养，重染病植物组织中将病原真菌与其他杂菌相分开并从寄主植物中分离出来，再将分离得到的病原菌于适宜环境内纯化，这个过程总称植物病原的分离培养。
二、 实验用具：
酒精灯、手术剪、镊子、75%酒精、3%~5%次氯酸钠、灭菌水、培养皿、封口膜、乳酸等
三、 实验前的准备工作：
1、 煮培养基（PDA）：马铃薯200g,葡萄糖20g，琼脂粉(AGAR)20g（10:1:1）水1000ml
（1） 将去皮称量好的马铃薯切片后加水煮沸15~20min（水可以适量多加200ml左右，因为在煮的过程中会蒸发一些），待土豆煮软即可。
（2） 三层纱布滤去马铃薯后将过滤的水倒入洗净的锅中，加琼脂粉搅拌充分后再加热煮沸，小火使其充分融化。
（3） 加入葡萄糖并不断搅拌，待其完全融化后双层纱布过滤，定容到1000ml，分装到500ml的玻璃瓶内，每个玻璃瓶最多装300ml，121℃湿热灭菌30min。
2、培养皿干热灭菌170℃1h;蒸馏水、枪头等湿热灭菌121℃30min。
四、 实验步骤：
1、 用75%酒精擦拭超净工作台，所有器具用紫外灯灭菌30min,分离室要保持清洁。
2、 取样，病斑大小约20个（含病缘线）
3、 分装培养基：（1）融PDA，松盖在微波炉中加热约3min（看量多少而定）
（2）待冷却至50℃后在超净工作台指示灯显绿灯时分装
(3) 分装时滴入一管乳酸约20滴（每10ml培养基中加3滴乳酸）
（4）左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基约15m1(300ml一瓶的培养基倒20多个平板)，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平板。
植物根系微生物的分离检测方法
植物根系微生物的分离检测方法
植物根系微生物的分离检测方法可以使用以下步骤：
1. 样品采集：从根系表面或根系内部采集样品。可以选择不同深度和不同部位的根系样品来获得更全面的微生物信息。
2. 样品处理：将采集到的根系样品进行处理，例如清洗、消毒等，以去除外界微生物，并提高目标微生物的分离效果。
3. 分离培养：将根系样品分别在不同的培养基上进行分离培养。可以选择富含特定营养物质的培养基来促进目标微生物的生长。
4. 纯化：从培养基上挑选出单一菌落并进行纯化。可以使用传统的菌落挑选方法，如划线法或接种法，将单一菌落进行扩培。
5. 鉴定性状观察：观察分离出的微生物的形态、颜色、生长速率等鉴定性状，并与已知的微生物进行比较，尝试初步确定其分类、种属等信息。
6. 分子生物学鉴定：对分离出的微生物进行16S rRNA基因序列分析或其他特定基因片段的测序，通过比对数据库中的序列信息来鉴定分离的微生物。
7. 功能鉴定：通过进一步的实验或鉴定方法，如活性测定、生理生化试验等，来确定分离出的微生物的功能，如氮固定、生物防治等。
以上是常见的植物根系微生物分离检测方法，可以根据具体实验目的和需求选择适合的方法进行。
蛇足石杉内生真菌的研究进展
石 震石杉内生真菌的研究 杉内 生真菌
Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ＥｎｄｏｐｈｙｔｉＣ Ｆｕｎ９ｉ ｆｒｏｍ Ｈｕｐｅｒｚｉａ Ｓｅｒｒａｔａ 的 研 究 齐丽霞 张琳 魏志刚 杜鹃－胡颂平・ 进 展 Ｑｉ Ｌｉｘｉａ Ｚｈａｎｇ Ｌｉｎ Ｗｅｉ Ｚｈｉｇａｎｇ Ｄｕ Ｊｕａｎ Ｈｕ Ｓｏｎｇｐｉｎｇ （１．江西农业大学生物科学与工程学院，江西南昌３３００４５；２．江西农业大学理学院，江西南昌３３００４５） （１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆＳｃｉｅｎｃｅ，Ｊｉａｎｇｘｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉａｎｇｘｉ Ｎａｎｃｈａｎｇ ３３００４５；２．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｊｉａｎｇｘｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉａｎｇｘｉ Ｎａｎｃｈａｎｇ ３３００４５） 摘 要：蛇足石杉由于其治疗老年痴呆等疾病，具有特殊的药用价值和潜在的巨大经济价值，正日益受 到国内外的关注。本文综述了近年来国内外对蛇足石杉内生真菌的生物学性状、分离纯化、菌种鉴定、发酵产 物及活性筛选等方面的研究现状，并提出一些建议，对未来蛇足石杉内生真菌的研究进行了展望。‘ 关键词：蛇足石杉；内生真菌；分离鉴定；石杉碱甲；活性筛选 中图分类号：Ｑ９４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７１．４７９２．（２０１ １）１２。００７９．０３ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｗａｓ ｍｏｒｅ ａｎｄ ｍｏｒｅ ｃａｒｅｄ ｂｙ ａｌｌ ｏｖｅｒ ｔｈｅ ｗｏｒｄ ｆｏｒ ｉｔｓ ｓｐｅｃｉａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｖａｌｕｅ ａｎｄ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｎｄ ｔｒｅｍｅｎｄｏｕｓ ｅｃｏｎｏｍｉｃ ｖａｌｕｅｓ ｏｎ ｃｕｒｉｎｇ ｔｈｅ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ＇ｓ ｄｉｓｅａｓｅ（ＡＤ）．Ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ ｓｕｍｍａｒｉｚｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｒａｉｔｓ，ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｕｎｇｉ ｓｐｅｃｉｅｓ，ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｅｔｃ．ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｆｒｏｍ Ｈｕｐｅｒｚｉａ Ｓｅｒｒａｔａ ｉｎ ｔｈｅ ｗｏｒｌｄ ｒｅｃｅｎｔｌｙ，ａｎｄ ｐｕｔ ｆｏｒｗａｒｄ ｓｏｍｅ ｐｒｏｐｏｓａｌｓ， ａｎｄ ｍａｄｅ ｓｏｍｅ ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ｆｕｔｕｒｅ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｆｒｏｍ Ｈｕｐｅｒｚｉａ Ｓｅｒｒａｔａ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｈｕｐｅｒｚｉａ Ｓｅｒｒａｔａ；Ｅｎｄｏｐｈ￣ｉｃ Ｆｕｎｇｉ；Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；Ｈｕｐｅｒｚｉｎｅ Ａ：Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｓｃｒｅｅｎ。 ｉｎｇ 蛇足石杉Ｈｕｐｅｒｚｉａ ｓｅｒｒａｔａ（Ｔｈｕｎｂ）Ｔｒｅｖ为蕨类 择性抑制乙酰胆碱酯酶（ＡＣＨＥ）的药物，对治疗重症 植物，属石杉科（Ｈｕｐｅｒｉａｃｅａｅ），石杉属（Ｈｕｐｅｒｚｉａ 肌无力 中老年痴呆及提高记忆力具有良好的疗效， Ｂｅｒｎｈ），又名千层塔、蛇足草、宝塔草等。千层塔植株 并对抑制有机磷酸中毒有～定的作用。目前国际上 为丛生的草本植物，群落多生于ｊ ＬＪ地密林下或沟谷 已将石杉碱甲列为第二代乙酰胆碱酯酶抑制剂之 阴湿土中，海拔４００－１６００ｍ。蛇足石杉主要分布于 一。由于全合成石杉碱甲素步骤繁琐、价格昂贵且有 长江流域、云南、贵州、东北及两广地区。民间常将全 副作用，因此，现在无论是结构改造还是直接作为药 草人药，有毒，用于退热、止血、消肿散毒。１９７２年， 品，石杉碱甲的主要来源还是蛇足石杉等少数石杉 国内首次报道该植物的生物碱（石杉碱甲Ｈｕｐｅｒｚｉｎｅ 科植物的提取。但是石杉碱甲在蛇足石杉体内含量 Ａ，简称Ｈｕｐ Ａ）在动物试验上有松弛横纹肌的作用 很低，而蛇足石杉生长又非常缓慢，仅从原植物体中 之后，又证明Ｈｕｐ Ａ是一种高效、低毒、可逆并高选 提取已经远远无法满足需要。为更好地研究和开发 蛇足石杉资源．本文对近年来国内外对 早石杉肉 事孚 登农 学青年基金项目（０９ｏ０３３２５），江 生真菌各方面的研究进行了系统的综述。 耄薏 只（３ ６）， 市农业生物基因中 １蛇足石杉内生真菌的分离与纯化 心重点项目（沪农基２００９０３）资助。 ～………～
宁夏黄花棘豆中产苦马豆素内生真菌的分离及鉴定
宁夏黄花棘豆中产苦马豆素内生真菌的分离及鉴定
张蕾蕾;何生虎;余永涛;赵清梅
【摘 要】对宁夏黄花棘豆中产苦马豆素内生真菌进行分离和鉴定,为进一步研究疯草内生真菌合成苦马豆素的分子调控机理提供菌种和奠定基础.分离并纯化黄花棘豆植物组织中的真菌,采用气相色谱质谱联用法对各菌株菌丝中的苦马豆素进行分析,筛选能产生苦马豆素的内生真菌;紫外线照射和黑暗交替培养诱导内生真菌产孢;提取真菌DNA,扩增和测定真菌甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GPD)、内部转录间隔区(internal transcribed
space,ITS)和线粒体核糖体小亚基(mitochondrialsmall subunit,mt SSU)基因序列,进行同源性比对和遗传进化分析,对其进行种属分类和命名.本研究从宁夏黄花棘豆中共分离到5株真菌,其中菌株NX-FEL001菌丝中含有苦马豆素,经诱导培养,该菌株能产生分生孢子及分生孢子梗等结构;序列同源性和系统发育分析结果表明,该菌株与Undifilum真菌的亲缘关系最近,根据形态结构和分子进化分析结果将菌株NX-FEL001鉴定为Undifilum oxytropis.
【期刊名称】《中国畜牧兽医》
【年(卷),期】2013(040)012
【总页数】8页(P165-172)
【关键词】黄花棘豆;内生真菌;苦马豆素;Undifilum oxytropis
【作 者】张蕾蕾;何生虎;余永涛;赵清梅 【作者单位】宁夏大学农学院,宁夏银川750021;宁夏大学农学院,宁夏银川750021;宁夏大学农学院,宁夏银川750021;北方民族大学生物科学与工程学院,宁夏银川750021;国家民委发酵酿造工程生物技术重点实验室,宁夏银川 750021
【正文语种】中 文
【中图分类】S816.79
黄花棘豆（Oxytropis ochrocephala Bunge）是一种疯草（豆科棘豆属和黄芪属有毒植物），广泛分布于中国宁夏、甘肃、青海、西藏等西部省区（史志诚，1997），动物长期或过量采食黄花棘豆会发生以神经系统机能紊乱为特征的慢性中毒病，表现为共济失调、四肢麻痹、瘫痪、流产、不孕不育等症状，严重的会发生大批死亡（陶定章等，1986；李建科等，1987；王凯等，1990）。苦马豆素（swainsonine，SW）是黄花棘豆的主要毒性成分（曹光荣等，1989），它是一种吲哚里西啶生物碱，该生物碱能抑制细胞内溶酶体α-甘露糖苷酶和高尔基体糖苷酶Ⅱ的活性，导致低聚糖代谢和功能性糖蛋白合成障碍，细胞发生空泡变性和组织器官功能紊乱（Dorling等，1980；Tulsiani等，1982）。除黄花棘豆外，在中国西部地区还广泛分布着甘肃棘豆、小花棘豆、冰川棘豆、毛瓣棘豆、茎直黄芪、变异黄芪、宽苞棘豆、镰形棘豆等10余种疯草，每年给西部地区草原畜牧业带来重大的经济损失（史志诚，1997）。目前，SW在动物机体内的毒理作用机制和在疯草中的合成机制尚未被阐明，因此，动物疯草中毒问题仍未能从根本上得到解决。
植物黄芪根内生真菌的分离
第４ｏ卷第４期 ２０１２年４月 东北林业大学学报 ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＮＯＲＴＨＥＡＳＴ ＦＯＲＥＳＴＲＹ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ Ｖｏ１．４０ Ｎｏ．４ Ａｐｒ．２０１２
植物黄芪根内生真菌的分离
马 伟 贾艳姝 李 娜 龚 贺 张艳贺
（黑龙江中医药大学，哈尔滨，１５００４０）
摘要以蒙古黄芪健康植株上的块根为材料，经过表面消毒、培养基选择，在不同培养条件下分离获得内生 真茵，并对其进行形态学鉴定。结果显示：表面消毒方法有效，４种培养基上分别获得不同数目的内生真茵株，显 微镜下获得了内生真茵形态特征。分离获得黄芪内生真菌２８株，分列在７个茵属中。 关键词黄芪；内生真茵；形态鉴定 分类号￥５６７．２ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆＥｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ＦＩＩｎｇｉ ｆｒｏｍ Ｒｏｏｔ ｏｆＡｓｔｒａｇａｌｕｓ ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ ｖａｒ．ｍｏｎｇｈｏｌｉｃｕｓ／Ｍａ Ｗｅｉ，Ｊｉａ Ｙａｎｓｈｕ，Ｌｉ Ｎａ，Ｇｏｎｇ Ｈｅ，Ｚｈａｎｇ Ｙａｎｈｅ（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈｅｉｌｏｎｇｉｉａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｈａｒｂｉｎ １５００４０．Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ）／／Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．一２０１２，４０（４）．－６２－６３，１ １６ Ａｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｔｏ ｉｓｏｌａｔｅ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｆｒｏｍ ｈｅａｌｔｈｙ ｒｏｏｔ ｏｆ Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕａ ｖａｒ．ｍｏｎｇｈｏｌｉ－ ＣＩ１．８ ｕｎｄｅｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｂｙ ｍｅａｎｓ ｏｆ ｓｕｒｆａｃｅ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ．Ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｄｅｎｔｉｆｉ－ ｃａｔｉｏｎ ｏｆｔｈｅ ｆｕｎｇｉ ｗａｓ ｍａｄｅ．Ｒｅｓｕｈ ｓｈｏｗｅｄ ｔｌｌａｔ ｔｈｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｄｌｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ．Ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｎｕｍｂｅｒｓ ｏｆｅｎｄｏ－ ｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇａｌ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｏｎ ｆｏｕｒ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｃｕｈｕｒｅ ｍｅｄｉａ．Ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎ－ ｇｉ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ．Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ２８ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｈｅａｌｔｈｙ ｒｏｏｔ ｏｆＡ．ｍｅｒｒ￣ｒａｒｍｃｅｕ．ｓ ｖａｒ．ｍｏｎｇｈｏｌｉｃｕｓ，ｗｈｉｃｈ ｂｅｌｏｎｇ ｔｏ ｓｅｖｅｎ ｇｅｎｅｒａ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｍｅｒｒ￣ｒａｎａｃｅｕ，ｓ ｖａｒ．ｍｏｎｇｈｏｌｉｃｕｓ；Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ；Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
兴安杜鹃菌根真菌分离与鉴定
兴安杜鹃菌根真菌分离与鉴定
杨秀丽;闫伟
【摘 要】为了了解大兴安岭北部地区兴安杜鹃（Rhododendron dauricum L.）的菌根真菌多样性特征。采用形态学和r DNA ITS序列分析相结合的方法。结果表明从兴安杜鹃根样中分离得到的真菌分属于7个属：Phialocephala、粒毛盘菌属（Lachnum）、膜盘菌属（Hymenoscyphus）、Meliniomyces、丝核菌属（Rhizoctonia）、被孢霉属（Mortierella）和软盘菌属（Mollisia）。其中Phialocephala、粒毛盘菌属（Lachnum）和膜盘菌属（Hymenoscyphus）为兴安杜鹃菌根真菌优势类群,在分离的菌株中所占比率超过了20%。研究表明与兴安杜鹃根共生的真菌类群较丰富。
【期刊名称】《北方农业学报》
【年(卷),期】2016(044)005
【总页数】5页(P54-58)
【关键词】兴安杜鹃 菌根真菌 rDNA ITS
【作 者】杨秀丽;闫伟
【作者单位】[1]呼和浩特职业学院生物化学工程学院,内蒙古呼和浩特010051;[2]内蒙古农业大学林学院,内蒙古呼和浩特010018;
【正文语种】中 文
【中图分类】S685.21
兴安杜鹃（Rhododendron dauricum），杜鹃花科（Ericaceae），杜鹃花属半常绿灌木，又名满山红、达子香、金达来等。在大兴安岭地区常与兴安落叶松、樟子松等乔木形成稳定的群落，并对此群落生态稳定性发挥着重要的作用[1-2]。
杜鹃花科几个属的植物根系常与一些土壤真菌形成一种特殊类型的内生菌根共生体，即欧石南类菌根（Ericoid mycorrhiza，ERM）（Read，1996），也称为杜鹃花类菌根。目前已知形成杜鹃花类菌根的真菌主要是子囊菌，包括石楠柔膜菌Hymenoscyphus ericae及树粉孢属真菌Oidiodendron sp.和砖隔腔菌Capronia sp.等一些真菌类型[3]。
珊瑚菜内生真菌的分离鉴定与抑菌活性
珊瑚菜内生真菌的分离鉴定与抑菌活性
侯晓强;明月梅;乔洁;付亚娟;刘平;贾敏
【摘 要】为探明珊瑚菜内生真菌的抑菌活性,采用植物组织分离法和分子鉴定法对珊瑚菜内生真菌进行分离和鉴定,以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色假丝酵母为指示菌株,研究其抑菌活性.结果表明:分离得到珊瑚菜内生真菌68株,其中,22个菌株具有抑菌活性,占内生真菌总数的32.35％,分别对金黄色葡萄球菌(17株)、大肠杆菌(6株)和白色假丝酵母菌(3株)具有抑制作用.经分子鉴定,此22株真菌分属5目7科8属11种.珊瑚菜植物中存在多种抑菌活性内生真菌,为新型抑菌活性物质的发现奠定了基础.
【期刊名称】《贵州农业科学》
【年(卷),期】2015(043)009
【总页数】4页(P157-160)
【关键词】珊瑚菜;内生真菌;抑菌活性;真菌鉴定
【作 者】侯晓强;明月梅;乔洁;付亚娟;刘平;贾敏
【作者单位】廊坊师范学院,河北廊坊065000;河北省高校食药用菌应用技术研发中心,河北廊坊065000;廊坊师范学院,河北廊坊065000;廊坊师范学院,河北廊坊065000;河北省高校食药用菌应用技术研发中心,河北廊坊065000;廊坊师范学院,河北廊坊065000;河北省高校食药用菌应用技术研发中心,河北廊坊065000;廊坊师范学院,河北廊坊065000;廊坊师范学院,河北廊坊065000
【正文语种】中 文 【中图分类】S567.23
珊瑚菜(Glehnia littoralis Fr. Schmidt ex Miq.)为伞形科植物，主要分布于山东、辽宁、河北、江苏等地，生长于沿海沙地。其干燥根为传统中药材北沙参，主要用于治疗肺热燥咳，劳嗽痰血，胃阴不足，热病津伤，咽干口渴等病症[1]。由于珊瑚菜的生境遭受破坏，野生资源十分稀少。1999年，珊瑚菜被列为国家Ⅱ级重点保护野生植物[2]。近年来，珊瑚菜引种、栽培技术日趋成熟，河北省安国市、山东省莱阳市已成为北沙参药材的主产地。
产紫杉醇内生真菌06081的分离及鉴定
产紫杉醇内生真菌06081的分离及鉴定
作者：张鹏，刘博，徐曼，等
来源：《湖北农业科学》 2012年第23期
张 鹏１，２，刘 博２，徐 曼２，敖明章２，付春华２，余龙江２，顾玉成１
（１．湖北省农业科学院经济作物研究所，武汉 ４３００６４；
２．华中科技大学生命科学与技术学院资源生物与生物技术研究所，武汉 ４３００７４）
摘要：从曼地亚红豆杉（Ｔａｘｕｓ ｘ ｍｅｄｉａ）树皮内表皮中分离得到１株产紫杉醇的内生真菌Ｏ６０Ｂ１，并通过高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）和质谱法（ＭＳ）分析其发酵产物，其紫杉醇产量为２．５～３．０ μｇ／ｇ（紫杉醇／菌丝干重），并通过形态学特征和１８ Ｓ ｒＤＮＡ序列分析，将其初步鉴定为毛霉属（Ｍｕｃｏｒ ｓｐ．）真菌。
关键词：红豆杉（Ｔａｘｕｓ ｘ ｍｅｄｉａ）；紫杉醇；内生真菌；１８ Ｓ ｒＤＮＡ；毛霉（Ｍｕｃｏｒ ｓｐ．）
中图分类号：Ｓ４５９
文献标识码：Ａ
文章编号：0439－８114（２０12）23－5315-03
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ａ Ｔａｘｏｌ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ Ｆｕｎｇｕｓ Ｏ６０Ｂ１
ＺＨＡＮＧ Ｐｅｎｇ１，２，ＬＩＵ Ｂｏ２，ＸＵ Ｍａｎ２，ＡＯ Ｍｉｎｇ－ｚｈａｎｇ２，ＦＵ Ｃｈｕｎ－ｈｕａ２，ＹＵ Ｌｏｎｇ－ｊｉａｎｇ２，ＧＵ Ｙｕ－ｃｈｅｎｇ１
（１． Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｃｒｏｐｓ， Ｈｕｂｅｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｗｕｈａｎ ４３００６４，Ｃｈｉｎａ； ２． Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ
抗水稻白叶枯病菌植物内生真菌的筛选、鉴定
抗水稻白叶枯病菌植物内生真菌的筛选、鉴定
刘琴英;谢祥聪;齐育平;陈璨;蒋冬花
【摘 要】从多种植物叶片内分离、纯化出31株植物内生真菌,活性筛选表明分离自健康水稻叶片内生真菌Bo-1菌的乙酸乙酯粗提物对水稻白叶枯病菌具有较强的抑菌活性.当供试浓度为100 μg/mL时,Bo-1菌乙酸乙酯粗提物对水稻白叶枯病菌抑菌圈为22.4 mm,与同浓度的氯霉素对水稻白叶枯病菌的抑菌效果相当.通过形态学特征观察和ITS rDNA测序分析,Bo-1菌被鉴定为淡色生赤壳菌(Bionectria
ochroleuca).抗菌谱实验表明,Bo-1菌对多种细菌类病原体具有较强的拮抗能力.
【期刊名称】《微生物学杂志》
【年(卷),期】2013(033)004
【总页数】5页(P4-8)
【关键词】水稻白叶枯病菌;内生真菌;生赤壳菌;抑菌活性
【作 者】刘琴英;谢祥聪;齐育平;陈璨;蒋冬花
【作者单位】浙江师范大学化学与生命科学学院,浙江金华321004;浙江师范大学化学与生命科学学院,浙江金华321004;浙江师范大学化学与生命科学学院,浙江金华321004;浙江师范大学化学与生命科学学院,浙江金华321004;浙江师范大学化学与生命科学学院,浙江金华321004
【正文语种】中 文
【中图分类】Q939.5
水稻白叶枯病是由水稻黄单胞杆菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae，Xoo)引起的，在我国各稻区均有发生，为水稻的主要病害［1-2］。现阶段的主要防治途径是化学防治，但过量施用杀枯净、噻枯唑等药剂会导致病原菌抗性增强和生态环境的严重破坏［3-4］。近几年，植物内生真菌在农业中的应用备受关注。研究发现，寄生在植物体内的内生真菌可以产生多种活性物质，如吡咯烷类生物碱、麦角碱、吲哚二萜等活性物质可以提高植物的抗病菌、抗线虫的能力，如Shu等［5］从栓皮栎内生镰刀菌(Fusarium spp.)中分离到2种具有拮抗细菌活性和抑制黄嘌呤氧化酶活性的脑苷脂类化合物。张集慧等［6］研究还发现，植物内生真菌不但可以分泌植物激素如赤霉素、吲哚乙酸等活性物质促进植物的生长，而且还可以提高植物的抗逆性。此外，植物内生真菌产生的次生代谢物丰富、化学结构特殊、生物活性多样以及结构类型新颖，为寻找新生物活性物质及天然药物开发和应用开辟新的途径，同时也将成为发展绿色农业、开发绿色农产品的有效手段［7］。因此，植物内生真菌具有作为新型抗菌药物筛选源的巨大潜力［8-9］。生赤壳属(Bionectria)是1999年 Rossman等［10］根据形态学及分子生物学特征将一部分丛赤壳科(Nectriaceae)菌种独立出来建立的一个属，被归类为生赤壳科(Bionectriaceae)，肉座菌目(Hypocreales)，子囊菌纲(Ascomycetes)，子囊菌门(Ascomycota)。据相关研究报道，某些生赤壳菌(Bionectria spp.)所产生的抗生素类物质可对某些病原菌起特异性拮抗作用，如曹晋忠［11］从黄芩内分离出的淡色生赤壳菌N.SBA35对枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)、大肠埃希菌(Escherichia coli)、镰孢霉(Fusarium)等具有较好的抑菌效果。目前，已见报道的对白叶枯病菌具有拮抗作用的微生物主要是细菌类如大肠埃希菌、放线菌类如链霉菌(Streptomyces)等［12］，而关于植物内生真菌-生赤壳属菌拮抗白叶枯病菌的研究鲜见报道。 1 材料与方法
菠菜内生拮抗细菌的分离、筛选与鉴定-09.08
第 1 页 共 12 页 菠菜内生拮抗细菌的分离、筛选与鉴定
摘要：从菠菜叶片上和菜园土壤中分离细菌，筛选出对菠菜霜霉病菌或菠菜炭疽病菌拮抗作用强的菌株，并挑选出生活力强、适应性好、防病效果好的作为目标菌株，并其鉴定到种。
技术路线：
菠菜内生细菌的分离
拮抗菌株的筛选
目标菌株的鉴定
拮抗菌株的生物学测定
第 2 页 共 12 页 1 实验材料
1.1 样品来源
菠菜菜园内土壤和菠菜植株。
1.2 供试病原菌
菠菜霜霉病菌（Peronospora effusa）和菠菜炭疽病菌（Colletotrichum spinaciae），由本实验室分离和鉴定。
1.3 培养基
细菌的分离用NA、KB和TSA。细菌的培养用NA或LB。细菌的菌种保存用NA或YPA。真菌的培养与拮抗测定用PDA。细菌的生理生化测定用基础培养基。
1.4 标准菌株
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）标准菌株。西瓜细菌性果斑病病菌（Acidovorax
avenae subsp.citrulli Willems et al.1992）标准菌株Aac7500。
1.5 溶液与试剂
草酸铵结晶紫染剂，鲁戈尔碘液，番红复染剂，西萨—基尔染媒剂，苯酚品红染剂，7.6%孔雀绿水溶液，1%溴百里酚蓝水溶液，甲基红试剂，0.3%肌酸水溶液，格里斯试剂，吲哚试剂，10%（W/V）FeCl3溶液，1%二甲基对苯撑二胺水溶液，3%（v/v）过氧化氢。 第 3 页 共 12 页 2 实验方法
2.1 菠菜内生细菌的分离
从菠菜的健叶和病叶上取样，各取1.0g，先用70%酒精浸泡5min，再用0.2%升汞表面消毒2-3min，无菌水冲洗3次。取0.5ml最后1次无菌水冲洗液涂布接种于各种培养基上。每个处理重复3次，培养48h，观察有无菌落产生。据此验证此消毒方法是否能全部杀死供试材料表面微生物。样品晾干后转入无菌研钵中研磨匀浆，加5ml无菌水碾碎，静止15min后，各取50l涂平板，每处理重复3次，30℃黑暗培养48-72h，计算菌落数。根据菌落形态、颜色等挑取单菌落，按常规方法纯化后保存，供测试鉴定。