喹乙醇在大鼠肝微粒体中代谢产物的分离和鉴定
79喹乙醇在大鼠肝微粒体中代谢产物的分离和鉴定 刘兆颖，陈冬梅，袁宗辉 华中农业大学国家兽药残留基准实验室 喹乙醇（olaquindox），又名倍育诺、喹酰胺醇，属于喹噁啉类药物，能促进动物生长，提高饲料转化率，具有广谱抗菌作用，可以预防猪的大肠杆菌和痢疾。但由喹乙醇具有生殖毒性、致突变性和光毒性，因被禁止或限制使用。 目前国内外对喹乙醇的代谢研究很少，Spierenbur等（1988）用HPLC检出了猪胃肠道中喹乙醇的三种还原代谢物，即N1-还原喹乙醇、N4-还原喹乙醇、脱二氧喹乙醇。JECFA报道猪口服喹乙醇(2mg/kg b.w)后，24h内就消除了药量的90%，其中70%是以原形从尿液中排出，血浆最大浓度出现时间是1-2h，表明喹乙醇吸收快，消除也快。给药2天后，检测组织中的放射性，发现肝脏和肾脏分别残留52和110μg/kg，肌肉为9μg/kg，。尿液中存在N1-还原喹乙醇、N4-还原喹乙醇、脱二氧喹乙醇和三种羧酸衍生物，其中3-甲基-喹噁啉-2-羧酸（MQCA）在体内消除缓慢，因而被规定为肝肾组织的残留标识物。因此为了更好地了解喹乙醇的代谢特征，本文先用体外代谢方法对其代谢进行研究。 肝微粒体法是由制备的肝微粒体辅以氧化还原型辅酶，在模拟生理温度及生理环境条件下进行生化反应的体系。制备肝微粒体一般用差速离心法。肝微粒体体外温孵法与其他的体外肝代谢方法相比，其酶制备技术简单，代谢过程快，结果重现性好，易大量操作，便于积累代谢样品供结构研究；同时，该方法可用于对药酶的抑制及体外代谢清除等方面的研究，因而在实际工作中应用较为普及。本文就用大鼠肝微粒体来研究喹乙醇的体外代谢，对其代谢产物的鉴定就用高灵敏度、高质量精度和多级质谱的LCMS-IT-TOF联用技术，首次发现了一些没报道的新代谢产物，完善了喹乙醇的代谢途径，为喹乙醇的毒性研究和残留监控提供了重要的指导意义；同时，为喹噁啉类其它药物的代谢研究提供了重要的参考价值。 1. 实验材料 1.1 标准品及标准溶液配制 喹乙醇，含量99.8%，中国兽医药品检查所，批号H050204； 喹乙醇储备液：准确称取26.3mg喹乙醇于10mL容量瓶中，用少量超纯水溶解，再用甲醇定容使之成为10mmol/L的储备液，4℃冰箱避光保存； 脱二氧喹乙醇，含量98%以上，华中农业大学兽药研究所合成，批号20050831； 脱二氧喹乙醇标准储备液：准确称取23.2mg喹乙醇于10mL容量瓶中，用甲醇定容使之成为10mmol/L的储备液，4℃冰箱避光保存。 1.2 试验动物 7周龄Whister雄性大鼠，体重167g-185g，购自湖北疾病预防控制中心实验动物房。实验前禁食12h，期间自由饮水。 1.3 试验仪器和设备 电子天平，感量0.000001g，日本SHIMADZU公司； 隔水式电热恒温培养箱，303AS-3型，上海浦东荣丰科学仪器有限公司； 80日立CS120GLS超速冷冻离心机； HITACHI HIMAC CR 21G高速冷冻离心机； Agilent 8453E 紫外可见光谱仪； 意大利Angelantoxi Polar 530超低温冰箱； 美国Millipore-Q超纯水仪； 日本LCMS-IT-TOF，配SPD-M20A二极管阵列检测器、LC-20AD 泵、DGU-20A3自动脱气装置、SIL-20AC自动进样器和CTO-20AC柱温箱，LCMS solution Chemstation 工作站。 1.4 试剂及溶液配制 乙腈，色谱纯，Fisher，批号 064510； 甲酸，分析纯，上海试剂一厂，批号20060403； 氯化镁，分析纯，中国医药集团上海化学试剂公司，批号F20060714； 蔗糖，Amresco，批号，3073B95； 低亚硫酸钠，化学纯，国药集团化学试剂有限公司，批号F20060815； 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸钠（NADP+）Roche，批号2006828； 6-磷酸葡萄糖（glucose 6-phosphate G-6-P），含量98-100%，批号G7250； 6-磷酸葡萄糖脱氢酶（glucose 6-phosphate dehydrogenase G-6-PD），Sigma，含量2000国际单位（U），批号，G8404； 三羟甲基氨基甲烷（Tris Base），Amresco，批号2005616； 乙二胺四乙酸（EDTA），分析纯，中国医药集团上海化学试剂公司，批号W20051216； 氯化钾，中国医药集团上海化学试剂公司，批号，F041015； 三氯乙酸，含量99%，上海宏瑞化工有限公司，批号20061102； BCA蛋白测定试剂盒，美国Pierce公司，货号，23225； Tris-HCl溶液：准确称取30.285mg Tris于500mL容量瓶中，用超纯水溶解并定容，盐酸调pH值，使成为0.5mmol/L的pH7.4 Tris-HCl缓冲液； Tris-HCl匀浆缓冲溶液：准确称取30.285mg Tris、146.125mg EDTA和42.75mg蔗糖，于500mL容量瓶中，用超纯水溶解并定容至500mL，盐酸调pH值，使成为0.5mmol/L的pH7.4 Tris-HCl（含1mmol/L EDTA、0.25mmol/L蔗糖）匀浆缓冲液，置于4℃保存。 注：以上溶液试验时均在有效期内 2. 实验方法 2.1 肝微粒体的制备 用差速离心法制备大鼠肝微粒体。大鼠（n＝3） 禁食过夜，脱臼处死后迅速剖开其胸腔和腹腔，取出肝，用Tris-HCl缓冲液（0.05mol/L，pH7.4）反复冲洗除掉组织中的血液成份，称重，按1:4（W/V）加入0.05mol/L pH 7.4 Tris-HCl缓冲溶液（含0.15mol/L KCl、1mmol/L EDTA、0.25mol/L蔗糖），用玻璃匀浆器制成肝匀浆。将制备好的肝匀浆在Hitachi micro 120GX超速冷冻离心机上10000g离心20min。取上清液100000g离心60min，上清液即为胞液，淡红色沉淀即肝微粒体。取部分微粒体蛋白以pH7.4 0.1mol/L Tris-HCl稀释，用于测定蛋白含量，其余用Tris-HCl缓冲溶液分装，放入-80℃冰箱中储存备用。以上所有操作均在冰浴中进行。 812.1.1微粒体蛋白浓度测定 用BCA法（Smith et al, 1985）测定蛋白浓度，具体操作如下：1）标准曲线绘制：按表1配成不同浓度的牛血清蛋白（BSA）溶液。取9只干净的试管，以英文字母A-I编号，分别在每管里加2mLBCA工作液，分别加入不同浓度的BSA溶液0.1mL混匀，放到37℃水浴锅里反应30min，冷却到室温，用Agilent 8453紫外分光光度计在562nm处进行比色测定光密度值（OD），以I号为空白，所有样品在10min内测完，每一样品重复一次，取平均值。以减去空白的OD值为纵坐标（y），BSA浓度为横坐标（x）绘标准曲线图。算出回归方程和相关系数。2）肝微粒体蛋白含量的测定：取2支试管，各加入微粒体悬液0.1mL，再加BCA工作液2mL，以后操作同上。将微粒体悬液样品的OD值减出空白管I的OD值，代入回归方程，求出相应蛋白溶液的浓度。 表1 BSA的标准溶液 Table1 Standard solution of BSA 编号 稀释液的体积a（μL） 2mg/mL的BSA体积（μL）最终的BSA浓度（μg/mL） A 0 取标准蛋白300 2000 B 125 取标准蛋白375 1500 C 325 取标准蛋白325 1000 D 175 从B号中取175 750 E 325 从C号中取325 500 F 325 从E号中取325 250 G 325 从F号中取325 125 H 400 从G号中取100 25 I 400 0 0＝空白 a） 稀释液与样品的稀释液相同，都为0.05mol/L Tris-HCl（pH7.4）缓冲液（含0.001mol/L EDTA） 2.1.2细胞色素P450差示光谱及含量测定 取10mg/mL的肝微粒体悬液0.3mL，加0.10mol/L pH7.4的PBS 5.7mL混合，取3mL装于比色杯内，向比色杯内加4~5mg连二亚硫酸钠，用小玻棒小心混匀，待稳定后，置于Agilent8453紫外分光光度计，扫描400~500nm间的基线。然后向样品杯中轻轻充入CO，约60秒后再扫描400~500nm的差示光谱，根据450nm和490nm处吸光度OD值，计算细胞色素P450含量。计算公式如下： ()()()mL/mg911000nm490nm450ODmg/nmol450P反应体系中的蛋白浓度××−= 2.2 喹乙醇与NADPH生成系统孵育 微粒体1mg和NADPH-生成系统（5mM MgCl2，10mM 6-磷酸葡萄糖，2mM NADP，2μ/mL 6-磷酸葡萄糖脱氢酶）在0.05M Tris-HCl缓冲液中预反应2min，加50μM喹乙醇开始反应120min，反应总体积0.5mL。反应后用100μL的15% 三氯乙酸（TCA）终止，12000rpm离心10min，取50μL上清液进样。为了研究喹乙醇的代谢物是否能进一步代谢成别的化合物，用50μM脱二氧喹乙醇与微粒体孵育，其孵育条件与喹乙醇一样，终止的处理方法同喹乙醇。 822.3 LCMS-IT-TOF条件 仪器用Shimadzu LCMS-IT-TOF，LC包括SPD-M20A二极管阵列检测器、LC-20AD 泵、DGU-20A3自动脱气装置、SIL-20AC自动进样器和CTO-20AC柱温箱。分析柱为VP-ODS (5μm，150×2.0mm)。扫描范围200-400nm，柱温40℃，流速为0.2mL/min，流动相A，乙腈：水：甲酸 5：95：0.1 (v/v)；流动相B，乙腈：水：甲酸 80：20：0.1 (v/v)：。采用梯度洗脱：0-5min，2-5%B；5-15min，5-30%B；15-18min，30-100%B；18min-23min，100%B；23.1min，2%；23.1-30min，2%。 质谱条件：离子化用ESI ，正离子模式，扫描范围m/z 50- 500，接口电压4.5KV，检测电压1.6KV，液氮为雾化气，流速1.5L/min，液氮也作为冷却气，压力170KPa，CDL和加热模块的温度都为200℃，高纯Ar作为碰撞气，相对碰撞能量和压力都为50%，离子累积时间为20msec。仪器控制、数据采集和处理用LCMSsolution3.1软件操作。 所有离子的分子量都采用单同位素荷质比计算，LCMSsolution配有分子预测软件，一个荷质比能计算出很多的分子式，由于时间飞行质谱具有很高的质量精度，因此，在计算可能的分子式时，把质量误差的范围设置在±5mDa以内。把碎片之间的断裂的值也设置在±5mDa以内，这样就能准确的找到其代谢物和推倒每个化合物的裂解途径。 3. 结果 3.1肝微粒体组成特点 3.1.1肝微粒体的蛋白浓度测定 用BCA法测定蛋白浓度，按表2数据绘制标准曲线。以蛋白浓度C为横坐标（X），吸光度OD值为纵坐标（Y），所得标准曲线为：Y=0.0011X+0.0646，r=0.9954。根据上述方程及公式计算出：大鼠肝微粒体的蛋白浓度为24mg/mL。 表2 BCA法测定的标准蛋白浓度的吸光值 Table2 Determination the absorbance of standard protein concentrations by BCA Kit 标准BSA蛋白浓度（μ/mL） 562nm BSA的吸光值（OD） 25 0.02 125 0.18 250 0.37 500 0.65 750 0.99 1000 1.24 1500 1.76 2000 2.14 3.1.2微粒体细胞色素P450酶CO差示光谱 图1为细胞细胞色素P450通入CO后的差示光谱，由图中可以看出大鼠肝微粒体P450经连二亚硫酸钠还原与CO结合后在450nm处有最大吸收，并且420nm处无吸收，说明微粒体P450酶活性很高，没有失活，可以用于代谢研究。
UPLC-LTQ-Orbitrap MS法鉴定棉酚在肝微粒体的代谢产物
UPLC-LTQ-Orbitrap MS法鉴定棉酚在肝微粒体的代谢产物
刘良红;关英;周洋;郑斌婕;王李婷;王雨薇;蔡伟;张加余
【摘 要】本文主要研究棉酚在大鼠肝微粒体中的代谢产物.首先以大鼠肝微粒体温孵棉酚,采集大鼠肝微粒体孵育样品并制备样品,然后采UPLC-LTQ-Orbitrap MS法对温孵体系中的代谢产物进行分析.结果发现在大鼠肝微粒体温孵体系中共检测除原型在外的2个代谢产物,主要为羟基化的代谢产物.本文通过研究棉酚的代谢转化,发现易于发生代谢的位点和结构特征,为进一步研究棉酚在体内的代谢和代谢酶奠定基础.
【期刊名称】《广州化工》
【年(卷),期】2017(045)015
【总页数】3页(P125-127)
【关键词】棉酚;UPLC-LTQ-OrbitrapMS;肝微粒体;代谢产物
【作 者】刘良红;关英;周洋;郑斌婕;王李婷;王雨薇;蔡伟;张加余
【作者单位】湖南医药学院药学院,湖南 怀化 418000;湖南医药学院药学院,湖南
怀化 418000;湖南医药学院药学院,湖南 怀化 418000;湖南医药学院药学院,湖南
怀化 418000;湖南医药学院药学院,湖南 怀化 418000;湖南医药学院药学院,湖南
怀化 418000;湖南医药学院药学院,湖南 怀化 418000;北京中医药大学中医药研究院,北京 朝阳 100029
【正文语种】中 文
【中图分类】R917 棉酚是从锦葵科植物陆地棉、树棉或草棉成熟种子、根皮以及茎干中提取分离得到的双羟基双萘醌类化合物，是一种黄色的多酚类物质。棉酚具有显著的抗生育作用，一度成为男性避孕药的研究热点，但由于其具有不可逆的无精症和低血钾症，使得研究陷入低迷[1-4]。棉酚的研究主要集中在其药效和毒性机制方面[5-9]，其在药物代谢方面研究较少[10-11]，因此本研究采用UPLC-LTQ-Orbitrap MS技术，研究了棉酚在大鼠肝微粒体中的代谢产物，为进一步研究棉酚在体内的代谢和代谢酶奠定基础。
喹乙醇代谢物免疫亲和柱 -回复
喹乙醇代谢物免疫亲和柱 -回复
喹乙醇是一种广泛使用的药物，被广泛用于治疗多种炎症和自身免疫性疾病。作为一种强效的免疫抑制剂，喹乙醇在体内代谢产生一系列代谢物。其中一种重要的代谢物是喹乙醇代谢物（QEM）。为了研究喹乙醇代谢物在机体中的功能和作用机制，研究人员开发了喹乙醇代谢物免疫亲和柱。本文将详细介绍这一研究工具的原理、应用和未来发展。
首先，我们来介绍喹乙醇代谢物免疫亲和柱的原理。免疫亲和柱是一种基于抗体-抗原相互作用的层析柱。研究人员利用抗喹乙醇代谢物的抗体将其固定在柱子上。当样品通过柱子时，喹乙醇代谢物会与固定在柱子上的抗体结合，从而被捕获下来。通过洗脱步骤，可以获得纯净的喹乙醇代谢物。这种免疫亲和柱具有高度的特异性和灵敏性，可以大大提高喹乙醇代谢物的纯度和产量。
喹乙醇代谢物免疫亲和柱的应用非常广泛。首先，它可以用于研究喹乙醇代谢物的生物学活性和作用机制。通过获得纯净的喹乙醇代谢物，研究人员可以进行进一步的生化和细胞实验，以揭示其在机体中的功能和作用机制。这对于深入理解喹乙醇的免疫抑制机制以及改善其疗效至关重要。
其次，喹乙醇代谢物免疫亲和柱也可以用于治疗监测和药物代谢研究。通常，在使用喹乙醇治疗患者时，需要进行药物浓度监测，以确保恰当的剂量和治疗效果。通过免疫亲和柱，可以从患者体内获取喹乙醇代谢物，并通过测定其浓度来确定喹乙醇的代谢情况。这有助于医生调整药物剂量，以实现最佳治疗效果。
此外，喹乙醇代谢物免疫亲和柱还可以用于疾病诊断和预后评估。在某些疾病状态下，例如自身免疫性疾病，喹乙醇代谢物的代谢模式可能会发生变化。通过检测喹乙醇代谢物，可以诊断和评估疾病的严重程度和预后。这为开发个体化治疗策略和评估治疗效果提供了重要的依据。
尽管喹乙醇代谢物免疫亲和柱在研究和临床应用中具有重要意义，但它仍然存在一些挑战和改进的空间。首先，目前可用的抗喹乙醇代谢物抗体仍然有限，需要进一步开发和改进。其次，免疫亲和柱的效率和回收率还有待提高，以获得更高纯度和产量的喹乙醇代谢物。此外，还需要考虑更多样的疾病状态和临床样本类型，以扩展免疫亲和柱的应用范围。
大鼠肝微粒体孵育体系中2种成分的测定及其代谢
大鼠肝微粒体孵育体系中2种成分的测定及其代谢
邓少东;王颖;赵文昌;肖凤霞;林靖然;段倩倩
【期刊名称】《中成药》
【年(卷),期】2017(039)005
【摘 要】目的 测定大鼠肝微粒体孵育体系中2种成分的含有量,并考察其在不同时间点(0、20、40、60、80、100、120 min)的代谢情况.方法 UPLC分析采用Waters BEH C1s色谱柱(3.0 mm×100 mm,1.7 μm);流动相甲醇-0.1％醋酸,梯度洗脱;体积流量0.5 mL/min;柱温30℃;检测波长338 nm.结果 野漆树苷和芹菜素分别在3.714 ～37.143μg/mL(r=0.999 0)和3.729～37.286 μg/mL(r=0.999 6)范围内线性关系良好,方法回收率(RSD)分别为89.44％ ～ 93.75％ (0.78％ ～
1.59％)和88.06％ ～93.98％ (0.91％ ～2.14％).两者在体外肝微粒体孵育体系的Ⅰ相代谢均呈线性消除,其中芹菜素更为显著.结论 该方法简单、快速、可靠,可用于测定大鼠肝微粒体孵育体系中野漆树苷和芹菜素的含有量和代谢情况.
【总页数】4页(P1002-1005)
【作 者】邓少东;王颖;赵文昌;肖凤霞;林靖然;段倩倩
【作者单位】广东医科大学第二临床医学院科研平台,广东东莞523808;广东医科大学第二临床医学院科研平台,广东东莞523808;广东医科大学药学院,广东东莞523808;广州中医药大学中药学院,广东广州510006;广州中医药大学中药学院,广东广州510006;广州中医药大学中药学院,广东广州510006
【正文语种】中 文 【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.三物黄芩汤组分(群)配伍在大鼠肝微粒体孵育模型中的相互作用 [J], 周杰;商雪莹;杜慧琴;卢丽萍;张蕾
2.LC-MS/MS定量测定大鼠和人肝微粒体孵育液中丁苯酞浓度方法的建立 [J], 赵芊;李燕;江骥;胡蓓
鱼虾中喹乙醇及其代谢标示物的同步检测
鱼虾中喹乙醇及其代谢标示物的同步检测
喹乙醇，又称为氢醌，是一种有机合成的杀菌剂和杀虫剂，广泛用于农业生产中。在使用过程中，喹乙醇会残留在水体中，通过食物链进入鱼虾等水产品中，对人体健康造成潜在风险。对水产品中喹乙醇残留的监测工作至关重要。
喹乙醇在水产品中的残留情况需要进行快速准确的检测。目前，常用的检测方法包括高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS）、气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）等。这些方法在检测喹乙醇方面具有较高的灵敏度和准确性，可以有效地对水产品中的喹乙醇残留进行检测和分析。
针对喹乙醇代谢标示物的同步检测也是必不可少的。喹乙醇在生物体内会转化为一些代谢产物，这些代谢产物同样具有一定的毒性，并且可能在水产品中残留。对这些代谢产物的同步检测也是十分重要的。目前，常用的方法包括液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）等，可以对喹乙醇及其代谢标示物进行高效准确的检测。
针对鱼虾等水产品中喹乙醇残留的监测工作，还需要加强对样品的前处理和样品制备工作。水产品样品的复杂性和多样性给样品前处理工作带来了一定的挑战，需要针对不同的样品类型和不同的检测要求开展相应的前处理工作，以保证检测结果的准确性和可靠性。
还需要加强对检测方法的验证工作。检测方法的准确性和可靠性是保障水产品安全的重要保障，而验证工作可以有效地评估检测方法的准确性和可靠性，确保检测结果符合相关的质量要求。
综合以上所述，对鱼虾中喹乙醇及其代谢标示物的同步检测是保障水产品质量和保护消费者健康的重要工作。通过加强对喹乙醇残留的监测工作，保证水产品的质量安全，同时可以为相关法规法规和标准制定提供科学依据，保障消费者权益。希望相关部门和科研人员能够加强对这一领域的研究工作，为我国水产品质量和安全保驾护航。
喹乙醇代谢物残留ELISA试剂盒检测方法的建立
现代农业科技２０１２年第ｌ２期 动物科学
喹乙醇代谢物残留ＥＬＩＳＡ试剂盒检测方法的建立
万宇平吴鹏罗晓琴靳开颜韩京朋
（北京勤邦生物技术有限公司，北京１０２２０６）
摘要 通过间接竞争ＥＬＩＳＡ反应检测鸡肉、猪肉、鱼肉、虾肉、鸡肝以及猪肝中ＭＱＣＡ的残留量，标准曲线ＩＣ５ｏ值为３．８ ｉ￣ｇ／Ｌ，线性范围 为１．０～８１．０ ｇ／Ｌ，对鸡肉、猪肉、鱼肉、虾肉、鸡肝、猪肝样本的检测限在１．６１５－１．８９Ｉ￣ｇ／ｋｇ，样品添加回收率均在７９．０％～９３．７％，批内变异系数 小于１５％。该方法的建立，为快速检验试剂盒的研究奠定了基础。 关键词喹乙醇；酶联免疫法；残留；检测 中图分类号￥８１６．７ 文献标识码Ａ 文章编号１００７－５７３９（２０１２）１２—０２４７—０３
喹乙醇（Ｏｌａｑｕｉｎｄｏｘ），又名快育灵、倍育诺、奥拉金、喹
酸胺醇、Ｆｅｄａｎｔ １，分子式为：Ｃｌ２Ｈｌ３Ｎ３Ｏ４，是１９６５年由德国
Ｂａｙｅｒ公司由２一甲基喹嗯啉一１、４一二氧化物与乙醇胺缩合
而成的淡黄色结晶性粉末，微溶于水１２１。因其具有良好的广
谱抗菌效果尤其是对大肠杆菌、沙门氏杆菌等革兰氏阴性
致病菌所致的消化道疾病具有良好的治疗效果，并且有促 进畜禽对饲料的消化利用，提高生长速度等作用而被广泛
应用于饲料及饲料添加剂中翻。近年来，在水产饲料中喹乙
醇曾一度被称为“水产瘦肉精”，经历了从被忽略毒副作用
到被客观评价的过程嗍。喹乙醇的毒性随动物种属不同存在
较大差异，特别对禽和鱼类，有中度至明显蓄积毒性和一定
遗传毒性．对部分鱼类有明显致畸作用［５１。
由于动物在摄食喹乙醇后，３一甲基一喹噫啉一２一羧酸（３一
Ｍｅｔｈｙｌ—ｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ一２一ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃａｃｉｄ．ＭＱＣＡ）是最后离开动
物机体的代谢物，也是喹乙醇的标示残留物，所以在监控喹
乙醇残留时通常要分析其代谢产物ＭＱＣＡ的含量［６１。 １材料与方法
高效液相色谱_串联质谱测定水产品中残留的喹乙醇代谢物
高效液相色谱串联质谱测定水产品中残留的喹乙醇代谢物赵东豪,黎智广,杨金兰,黄珂,陈培基,林钦*(中国水产科学研究院南海水产研究所,广州510300)摘要:建立了高效液相色谱质谱(LCMS/MS)检测水产品中喹乙醇代谢物3甲基喹恶啉2羧酸(MQCA)的残留分析方法。样品先用Protease蛋白酶酶解,然后用乙酸乙酯萃取目标物,氮气吹干后用流动相溶解残渣,以甲醇、乙腈和01%甲酸溶液作为流动相,液相色谱串联电喷雾质谱在正离子模式下测定。MQCA在1~100g/kg范围内线性关系良好(r>0999)。在2、4、8g/kg3个添加水平上,回收率在825%~875%,相对标准偏差为45%~51%(n=6),定量限为1g/kg。方法已用于水产品中喹乙醇代谢物的残留分析。关键词:高效液相色谱串联质谱;喹乙醇代谢物;3甲基喹恶啉2羧酸;残留;水产品中图分类号:O65763文献标识码:A文章编号:10000720(2010)0901904喹乙醇(olaquindox)又名奥喹多司,是一种合成的喹恶啉类药物,在动物生产上常作为抗菌促生长剂使用,能提高饲料转化率[1]。其在动物体内吸收迅速,生物利用度高,原药排除速度快,但代谢产物3甲基喹恶啉2羧酸(MQCA)在组织内残留时间比较长[2],被人食用后具有潜在的危害性。农业部规定了喹乙醇在猪肉和肝脏的最高残留限量[3],标志残留物即为MQCA,但其它畜禽类及水产品暂时没有明确的规定。研究MQCA的检测方法,可以有效地监控喹乙醇在动物生产中的应用,对保障食品安全具有重要意义。当前检测喹乙醇的方法主要有酶联免疫法[4]、高效液相色谱法[5-9]、液相色谱串联质谱法等[10,11],但直接检测喹乙醇标志残留物MQCA的方法比较少,难以对喹乙醇在动物生产方面的使用做到比较全面的监控。该研究在参考前人研究工作的基础上,主要改进和优化了前处理方法,建立了水产品中喹乙醇代谢物的HPLCMS/MS检测方法。1实验部分11试剂与材料3甲基喹恶啉2羧酸和喹恶啉2羧酸d4(QCAd4)标准品(美国Sigma公司);Protease蛋白酶及Tris碱均购自美国Sigma公司;甲醇、乙腈、甲酸、乙酸乙酯等均为色谱纯或分析纯;水为超纯水;罗非鱼、对虾等从农贸市场或超市购买。分别用甲醇溶解MQCA和QCAd4的对照品制成浓度为1mg/mL的标准储备液,储存于-20冰箱中。使用时配成不成浓度的标准工作溶液。12仪器与设备液质联用仪由Agilent1200液相系统(配备自动进样器)和API3000三重四极杆质谱串联组成,氮气吹干仪、离心机、MilliQ器(美国Millipore公司)等。13色谱质谱条件131色谱条件WatersC18色谱柱(100mm 21mm,5m)。流动相为甲醇乙腈01%甲酸水溶液(体积比为20!10!70),等度洗脱;流速:∀19∀第29卷第9期2010年9月分析试验室ChineseJournalofAnalysisLaboratoryVol29No92010-9
饲料中喹乙醇的是与非
综合
版
网址：（河南畜牧兽医信息网）饲草料饲SICAOSILIAO2019年（第40卷）第2期
饲料中喹乙醇的是与非
张文鑫
（开封市畜产品质量监测检验中心，河南开封475000）
2018年1月11号，农业部发布了第2638号公告。经农
业部评定，认为喹乙醇、氨苯胂酸、洛克沙胂等3种兽药的
原料药及各种制剂可能对畜产品的质量安全、公共卫生安
全和生态安全存在风险隐患。公告显示，自2018年5月1
日起，停止生产喹乙醇、氨苯胂酸、洛克沙胂等3种兽药的
原料药及各种制剂，相关企业的兽药产品批准文号同时注
销。2018年4月30日前生产的产品，可在2019年4月30日
前流通使用。自2019年5月1日起，停止经营、使用喹乙
醇、氨苯胂酸、洛克沙胂等3种兽药的原料药及各种制剂。
1喹乙醇进入中国
我国在20世纪八十年代初就已经成功研制出喹乙
醇，自此喹乙醇作为饲料添加剂和兽药在我国开始推广使
用，并广泛被用作畜禽类动物的生长促进剂，在这个方面，
喹乙醇确实起到了良好的效果，对生产也起到了良好的促
进作用。
喹乙醇又称喹酰胺醇、倍育诺等，是一种化学合成的
生长促进剂而不是抗生素药物，具有良好的广谱抗菌作
用，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有明显抗菌效
果，特别是对大肠杆菌、沙门氏杆菌以及巴氏杆菌等致病
菌所引起的消化道或者呼吸道疾病具有显著的预防和治
疗效果，同时又不影响有益的肠道微生物菌落，因此对预
防和控制猪腹泻病作用显著，且还有促进机体蛋白质合成
代谢、提高个体瘦肉率、提高饲料利用率和促进畜禽生长
等作用而被广泛用于饲料添加剂中。
然而，随着时间的推移，人们使用喹乙醇的频率越来
越高，添加量也越来越大，有些养殖户已经达到了滥用的
地步，给养殖业和人类的健康也带来了不少的负面影响。
2喹乙醇的吸收、排泄与残留
喹乙醇在动物体内吸收迅速，生物利用度高。当禽类
被饲喂含喹乙醇的饲料后，其中有一半以上的药物直接进
入禽类的血液循环系统。喹乙醇一般在消化道内被吸收，
新型降糖化合物LSM-13在大鼠肝微粒体中的稳定性研究及代谢产物分析
新型降糖化合物LSM-13在大鼠肝微粒体中的稳定性研究及代谢产物分析
作者：杜瑶 陈瑞 朱高峰 张吉泉 汤磊
来源：《中国药房》2021年第17期
中图分类号 R917;R969.1 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2021）17-2059-07
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.17.03
摘 要 目的：考察新型降糖化合物LSM-13在大鼠肝微粒体中的代谢稳定性，并分析其可能的代谢产物。方法：将LSM-13溶解于由还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸启动的大鼠肝微粒体孵育体系中，置于37 ℃水浴中进行孵育，分别于孵育0、5、10、15、20、30、45、60
min时用乙腈终止反应。以吲哚美辛为内标，采用高效液相色谱法测定孵育体系中LSM-13的质量浓度。以孵育0 min时LSM-13的质量浓度为参照，计算其在不同孵育时间下的剩余百分比和酶动力学参数。采用超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱法检测并定性分析LSM-13在大鼠肝微粒体中的代谢产物。结果：孵育60 min时，LSM-13在大鼠肝微粒体中的剩余百分比为（56.07±0.95）%，半衰期为42.78 min，固有清除率为0.032 4 mL/（min·mg）。与大鼠肝微粒体空白样品的总离子流图比较，孵育60 min样品中新增了3个色谱峰，对应的准分子离子峰分别为m/z 505.133 8、417.102 4、293.111 7[M+H]+，可能是LSM-13脱氢、O-脱苄基、水解的产物。结论：化合物LSM-13在大鼠肝微粒体中的稳定性为中等，并可能发生了脱氢、O-脱苄基和水解反应。
关键词 降糖化合物;LSM-13;大鼠肝微粒体;稳定性;代谢产物
Stability Study of Novel Hypoglycemic Compound LSM-13 in Rat Liver Microsomes and Its
肝微粒体代谢产物鉴定
肝微粒体代谢产物鉴定
肝微粒体代谢产物鉴定
肝微粒体是细胞内的一种重要细胞器，它参与了多种代谢过程，包括脂肪酸代谢、胆固醇代谢、药物代谢等。肝微粒体代谢产物鉴定是一种通过检测肝微粒体代谢产物来评估肝脏功能的方法。
肝微粒体代谢产物鉴定的原理是利用高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS/MS）检测肝微粒体代谢产物的含量。这些代谢产物包括脂肪酸代谢产物、胆固醇代谢产物、药物代谢产物等。通过检测这些代谢产物的含量，可以评估肝脏功能的状态。
肝微粒体代谢产物鉴定可以用于评估肝脏疾病的严重程度和预后。例如，在肝炎、肝硬化等疾病中，肝微粒体代谢产物的含量会发生变化。通过检测这些代谢产物的含量，可以评估肝脏疾病的严重程度和预后，为治疗提供参考。
此外，肝微粒体代谢产物鉴定还可以用于评估药物代谢的差异性。不同个体的肝脏代谢能力存在差异，有些人可能会因为代谢能力差异而出现药物不良反应。通过检测肝微粒体代谢产物的含量，可以评估药物代谢的差异性，为个体化用药提供参考。
总之，肝微粒体代谢产物鉴定是一种重要的评估肝脏功能的方法。通过检测肝微粒体代谢产物的含量，可以评估肝脏疾病的严重程度和预后，评估药物代谢的差异性，为治疗和个体化用药提供参考。
喹乙醇残留检测研究进展_李道稳_邬良贤_李斌_肖希龙_汤树生
中国饲料2016年第22期
检测分析
DOI：10.15906/11-2975/s.20162208
基金项目：国家自然科学基金（31372486）*通讯作者喹乙醇残留检测研究进展
李道稳1，邬良贤2，李斌1，肖希龙1，汤树生1*
（1.中国农业大学动物医学院，北京海淀100193；2.龙岩市农产品质量安全检验检测中心，福建龙岩364000）喹乙醇是一类化学合成的啉类药物，其对
革兰氏阴性菌有抑制作用，能提高饲料转化率，促
进动物生长，但喹乙醇具有蓄积毒性的特性，并且
其在动物体内代谢途径尚不明确，滥用或非法使
用喹乙醇不仅会危害动物健康，而且对人体健康
乃至畜牧业发展也具有潜在的威胁。本文就喹乙
醇理化性质、抗菌作用、毒性和代谢情况及其残留
检测方法进行了综述。1喹乙醇的理化性质喹乙醇属于喹啉类药物，又被称为酰胺
醇或倍育诺，其化学名称为2-（N-2-羟乙基-氨
基甲酰）-3-甲基啉-14-二氧化物，分子式为C12H13N3O4。喹乙醇又名奥喹多司，为浅黄色结晶
性粉末，味苦无臭，溶于热水，微溶于冷水，在甲
醇、乙醇和氯仿中几乎不溶，熔点为207～213℃
（左文霞等，2011）。2抗菌作用
喹乙醇是一种化学合成的抗菌促生长剂（李
俊辉等，2013），对革兰氏阴性菌中的禽巴氏杆菌、
大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌、变形杆菌的最小抑制
浓度分别为4、3.16、16及16μg/mL，对大肠杆菌、沙门氏菌等革兰氏阴性菌所致的消化道疾病具有
良好的疗效（徐传涛等，2010）。喹乙醇还能促进蛋
白质的同化作用，提高饲料转化率，促进动物生长
发育（薄永恒等，2014）。3毒性和危害
喹乙醇对动物体产生的毒性主要包括急性毒
性和蓄积毒性。急性毒性一般是通过测定半数致
死量（LD50）初步估计其毒害。孙雷等（2008）进行了
喹乙醇急性毒性试验，表明毒性敏感程度有明显
种属差异，禽类对口服喹乙醇的敏感性最高，LD50为288.4～304.9mg/kg，鱼类腹腔注射敏感性较禽