PDF版 淋巴细胞亚群和流式细胞术
淋巴细胞计数减少，同时/或者： 淋巴细胞中某个亚群（绝对）计数减少，同时/或
者：
某活化淋巴细胞亚群%减少 有些患者临死前的B细胞计数会非常低！
比如对于感染性疾病患者可帮助了解 有没有感染的免疫反应？
哪群细胞反应强烈？细胞免疫反应为主还是体液免 疫为主？
是否存在免疫反应降低？
自身免疫病中某些亚群细胞活化增高增高，特别是 T细胞中的CD4细胞
CD8细胞又包括以下两群： 抑制性T细胞（Ts）具有抑制细胞免疫及体液免疫癿功能 细胞毒性T细胞（Tc）具有杀伤靶细胞癿功能
B细胞，最早在禽类中发现，称（法氏）囊依赖性淋 巴细胞，祖细胞存在于胎肝癿造血细胞岛中，此后B 淋巴细胞癿产生和分化场所逐渐被骨髓所代替
其分化成熟经历前B细胞、丌成熟B细胞、 成熟B细内加入植物凝集素（诱导T细胞），48小时观察 结果
传统测定T细胞癿方法 我们癿改进是用克脑迷（Antiradon ）处理绵羊红
细胞，4℃可保存1周 不小鼠红细胞形成花环癿为B淋巴细胞
系一种免疫组化技 术，通过复合物中 的碱性磷酸酶催化 底物显色来判断抗 原分子的存在
用于淋巴细胞分化 抗原、活化抗原、 MHC-I、II类抗原表 达的检测等
• 肾脏和心脏移植后接受预防排斥的免疫调节药物OKT-3的患 者
• 恶性肿瘤、自身免疫性疾病（SLE和RA等）、先天性免疫 缺陷病、艾滋病、接受放疗、化疗或者使用肾上腺皮质激 素等免疫抑制剂资料的患者
T细胞增多，常见于：见于慢性活动性肝炎、重症肌无力
等自身免疫病活动期
即辅助性T细胞无论对于细胞免疫还是体液免疫都非常重要，
报告绝对值能让临床医师能够一目了然地获知何种 淋巴细胞亚群发生了异常，所以很受欢迎
某一亚群活化百分比升高见于该亚群的淋巴细胞功 能亢进或活性被调动起来了
某一亚群活化百分比降低则为其功能低下，或被过 量消耗、或被严重“误伤”（因为许多抗癌药物和 免疫抑制剂都是针对处于增值状态的细胞的）
活化淋巴细胞亚群严重降低者应当关注全身化脓性 感染的危险！
迪安诊断在杭州就有三台的流式细胞仪，仅“TBNK淋巴 细胞亚群”现在每天超过200 （经常超过300）个标本
我一直有个心愿：用上可靠而先进的中国制造
1
免疫系统和淋巴细胞
2 淋巴细胞亚群分析演变
目 录
3 淋巴细胞亚群的应用
4
流式分析进展
4
1
免疫系统和淋巴细胞
2 淋巴细胞亚群分析演变
目 录
3 淋巴细胞亚群的应用
自身免疫病患者的免疫抑制治疗的监测：活动期患 者的淋巴细胞亚群绝对值和活化淋巴细胞百分比的 明显异常，用药中指导剂量的调整
器官移植患者术后监测中更具有不可或缺的作 用„„
流式细胞术测定淋巴细胞亚群已用于临床多年，但 以百分比（%）报告的结果缺乏确定性
比如，T细胞百分比增高既可能是其本身数目增加 造成，亦可能为B细胞或/和NK细胞数目减少所 致……，对临床的帮助有限，也是未能推广的原因
4
流式分析进展
5
T细胞，即胸腺依赖性淋巴细胞，主要担负细胞免疫功能，包括CD4细 胞和CD8细胞
CD4+细胞，主要是辅助性T细胞（Th），通过不MHCⅡ（主要组织相 容性复合体Ⅱ）递呈癿多肽抗原反应而激活。MHCⅡ在抗原递呈细胞 （APCs）表面表达。一旦激活，可以分泌细胞因子，调节戒者协助免 疫反应。
其减少（可与CD8细胞或B细胞的减少同时发生）常见于各种 严重的免疫缺陷，尤其是艾滋病（<200细胞/μl，HIV抗体阳性） 和急性微小病毒感染等
CD4细胞增加可能有过强的细胞免疫反应，常见于活动期的各 种自身免疫病、过敏反应或某些免疫增强药物的有效结果
2001年后，杭州市第一人民医院购买了BD FACSCalibur4色， 2003年又购买6色的，主要开展淋巴细胞亚群、白细胞免疫 分型、活化血小板、细胞因子CBA等
我和同事们在自己实验室一开始就建立了淋巴细胞亚群正 常人群参考范围，并向临床报告淋巴细胞亚群绝对值，为 我国东南地区人群淋巴细胞亚群正常值参考范围的建立做 了一些贡献；
汪子伟 主任技师 迪安诊断管理部
原 杭州市第一人民医院 中心实验室主任 曾 浙江省临检中心 实验室主任
浙江浙江省人民医院 中心实验室主任
1997年第一次使用流式细胞仪，浙江省人民医院中心实验 室购买了Coulter Epics，主要用于淋巴细胞亚群、活化血小 板、MRD、白血病免疫分型及临床科研等
其体积略大于T细胞，在受抗原刺激后，会增殖分化 出大量浆细胞。浆细胞可合成并分泌抗体于血液循 环中
担负体液免疫功能癿主要细胞
大部分淋巴细胞处于“休眠”状态(在细胞周期癿G0 期)
正常情况下人体只有一小部分淋巴细胞处于活化状 态，这些淋巴细胞是具有功能和活性癿
在自身免疫病（如风湿病）活动期，活化淋巴细胞 癿比例增高
当活化淋巴细胞严重减少时，应当注意继发全身性 化脓性感染
1
免疫系统和淋巴细胞
2 淋巴细胞亚群分析演变
目 录
3 淋巴细胞亚群的应用
4
流式分析进展
淋巴细胞转化试验 绵羊红细胞花环（玫瑰花结） 小鼠红细胞花环 空斑形成细胞(Plaque forming cell ) APAAP桥联酶标法测定淋巴细胞亚群（%) 流式细胞术测定淋巴细胞亚群(%和#)
可以追踪观察，监测治疗后的反应，调整维持剂量
及时发现免疫功能极度降低，避免发生严重的继发 性感染
T细胞计数异常 CD4细胞计数异常 CD8细胞计数异常 CD4/CD8比值异常 B细胞计数异常 NK细胞计数异常
T细胞减少常提示细胞免疫功能减低，见于：
• 先天性免疫缺陷病（例如DiGeorge综合症，胸腺发不发育）
仪器、试剂（多种混合荧光标记抗体）和分析软件是配套 癿（一个丌可分割癿测定系统）
全自动进样 报告淋巴细胞亚群%和绝对值
目 录
22
1
免疫系统和淋巴细胞
2 淋巴细胞亚群分析演变
3 淋巴细胞亚群的应用 4
流式分析进展
肿瘤病人化疗过程中的监测：抗癌药物对同样处于 增殖状态的、对肿瘤敏感的活化淋巴细胞也有杀伤 作用，由于个体差异，需要根据对药物的反应调整 用药，以避免因严重继发感染导致死亡
淋巴细胞亚群
淋巴细胞亚群是指在免疫系统中不同类型和功能的淋巴细胞种类。了解淋巴 细胞亚群的分类和功能，对于理解免疫系统以及免疫疾病的发生至关重要。
什么是淋巴细胞亚群？
淋巴细胞亚群是在免疫系统中不同类型和功能的淋巴细胞种类。它们扮演着 免疫系统中重要的角色，参与免疫应答和疾病清除。
淋巴细胞亚群的分类
免疫耐受
一些淋巴细胞亚群具 有免疫耐受的能力， 防止免疫系统对自身 组织产生过度反应。
免疫突变
淋巴细胞亚群可以通 过基因重组和突变来 产生多样的抗体和受 体。
免疫逃逸
一些病原体可以通过 改变自身的表面结构 或进入宿主细胞来逃 避淋巴细胞亚群的识 别和清除。
淋巴细胞亚群在免疫疾病中的 作用
淋巴细胞亚群的功能失调常常与免疫疾病的发生和发展密切相关，研究淋巴 细胞亚群对于免疫疾病的预防和治疗具有重要意义。
3 免疫清除
淋巴细胞亚群可以通过不 同的机制来清除感染和异 常细胞，维护身体健康。
4 免疫监视
淋巴细胞亚群可以监视身体中的各种细胞和 组织，及时发现和排除异常。
5 免疫刺激
淋巴细胞亚群可以增强免疫应答，激发免疫 系统产生更强的反应。
淋巴细胞亚群的生物学特性
组织特异性
不同的淋巴细胞亚群 可以富集在特定的组 织和器官中，发挥特 定的功能。
NK细胞是一种具有自然杀伤功能的淋巴细胞，可以直接杀伤病变细胞和受体 识别异常的细胞。
B细胞亚群
B细胞是一种产生抗体的淋巴细胞，具有抗原呈递和体液免疫功能。
淋巴细胞亚群的功能
1 免疫记忆
淋巴细胞亚群可以记住特 定病原体，使得免疫系统 在再次遭遇时更快、更有 效地应对。
2 免疫调节
淋巴细胞亚群可以调节免 疫应答的强度和方向，确 保免疫系统对各种病原体 做出合适的反应。
淋巴细胞亚群
B细胞
产生抗体，为体液免疫提 供重要保护。
自然杀伤细胞
针对病毒感染和肿瘤细胞 的杀伤作用。
淋巴细胞亚群的功能和作用
1 免疫调节
调节免疫系统的应答， 维持 疫应答。
3 免疫效应
产生免疫效应，杀伤被 感染的细胞。
淋巴细胞亚群在免疫应答中的作用
抗原递呈
T细胞接受抗原递呈细胞的信 号，触发免疫应答。
抗体产生
B细胞分化为浆细胞，产生抗 体。
肿瘤杀伤
自然杀伤细胞识别肿瘤细胞并 杀伤。
淋巴细胞亚群与疾病的关联
1
免疫缺陷病
淋巴细胞功能异常导致免疫系统缺陷性疾病。
2
自身免疫病
免疫系统对自身组织产生异常反应。
3
淋巴瘤
淋巴细胞的恶性肿瘤。
淋巴细胞亚群的检测方法
通过流式细胞术、细胞培养和免疫组化等方法检测和鉴定淋巴细胞亚群。
淋巴细胞亚群
淋巴细胞亚群是免疫系统中不同类型的淋巴细胞。它们在免疫应答中扮演着 重要角色，具有不同的功能和特点。
淋巴细胞亚群简介
淋巴细胞亚群是淋巴细胞的亚群，包括T细胞、B细胞和自然杀伤细胞等。它 们在免疫系统中起着至关重要的作用。
淋巴细胞亚群的分类与特点
T细胞
包括辅助T细胞和细胞毒性 T细胞，对调节和进攻性免 疫起关键作用。
淋巴细胞亚群应用的前景和挑战
1 免疫疗法
淋巴细胞亚群的研究为新的免疫疗法提供了机会。
2 个体化治疗
深入了解淋巴细胞亚群有助于个体化治疗的发展。
3 技术挑战
淋巴细胞亚群的准确检测和鉴定仍然面临技术挑战。
淋巴细胞亚群检测报告怎样看懂？
淋巴细胞亚群检测报告怎样看懂？淋巴细胞是一种包括T细胞、B细胞和自然杀伤细胞等多个亚群的白细胞，它们各自具备不同的免疫作用，协同工作来维护机体免疫平衡和抵御外部侵害。
淋巴细胞亚群检测可以帮助医生了解不同亚群的数量和比例，从而判断免疫系统是否受到影响，同时也能够为一些免疫相关疾病的诊断提供重要参考依据。
在本文中，我们将详细介绍淋巴细胞亚群检测报告中的各项指标含义及其正常值范围，希望能够帮助您更好地理解和解读检测结果。
1.淋巴细胞亚群是如何检测淋巴细胞亚群的检测通常采用流式细胞术、荧光素标记技术等方法。
流式细胞术是一种通过测量单个细胞的光学和物理特性来分析淋巴细胞亚群的数量和比例的技术。
通过将淋巴细胞标记上荧光素等物质，然后把标记的淋巴细胞注入流式细胞术仪中，利用激光束照射、散射、荧光及电导等特性检测并分析细胞的类型、数量、活性等参数，从而识别出各类淋巴细胞亚群。
而荧光素标记技术则是一种在淋巴细胞前处理过程中进行标记的技术，该技术可将淋巴细胞分类并标记在表面（例如用荧光标记）后，再使用流式细胞仪来测量并分析淋巴细胞亚群的数量、活性以及分布情况等。
这些检测方法都是无创的、准确度较高、操作简便、结果可靠，已经成为临床上常用的检测手段之一。
1.淋巴细胞亚群检测的临床意义2.1 评估机体免疫功能淋巴细胞是机体免疫系统中最重要的细胞类型之一，在免疫应答中发挥着重要作用。
淋巴细胞亚群检测可以对机体免疫功能进行全面评估，了解机体是否有免疫功能障碍或免疫力下降等问题。
2.2 辅助诊断病情淋巴细胞亚群检测可以帮助医生判断感染性疾病的类型及病情轻重，如通过测定CD4+ T细胞数目，可以确定HIV感染者的病情进展及治疗效果；通过测定CD8+ T细胞数目，可以推测病毒性肝炎等疾病的病情程度。
2.3 指导免疫治疗方案针对某些自身免疫性疾病例如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等，淋巴细胞亚群检测可以帮助医生选择合适的免疫调节治疗方案。
流式细胞术详解
流式细胞术详解一. 流式细胞术概述流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是七十年代发展起来的高科学技术,•它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体, 同时具有分析和分选细胞功能。
它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA 含量等,可对群体细胞在单细胞水平上进行分析, 在短时间内检测分析大量细胞,并收集、储存和处理数据,进行多参数定量分析; 能够分类收集(分选)某一亚群细胞,分选纯度＞95%。
在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。
国内使用的流式细胞仪主要由美国的两个厂家生产:BECKMAN- COULTER公司和Becton-Dickinson公司(简称B-D 公司)。
流式细胞仪主要有两型:临床型（又称小型机、台式机）和综合型（又称大型机、分析型）。
BECKMAN-COULTER公司最新产品为EPICS ALTRA和EPICS XL/XL-MCL, B-D•公司最新产品为FACS Vantage和FACS Calibur。
EPICS XL/XL-MCL和FACS Calibur是临床型;EPICS ALTRA和 FACS Vantage是综合型，除具备检测分析功能外,还具有细胞分选功能,•多用于科学研究。
二.流式细胞仪主要技术指标1．流式细胞仪的分析速度：一般流式细胞仪每秒检测1000～ 5000个细胞,大型机可达每秒上万个细胞。
2．流式细胞仪的荧光检测灵敏度：一般能测出单个细胞上<600个荧光分子,两个细胞间的荧光差＞5%即可区分。
3．前向角散射（FSC）光检测灵敏度：前向角散射（FSC）反映被测细胞的大小,一般流式细胞仪能够测量到0.2μm～０.5μm。
4．流式细胞仪的分辨率：通常用变异系数CV值来表示，,一般流式细胞仪能够达到<2.0%,这也是测量标本前用荧光微球调整仪器时要求必须达到的。
淋巴细胞亚群检测及临床应用
一、概述
二、淋巴细胞亚群检测
1、检测原理
• 把全血加入到试剂中时，荧光标记的抗体会和白细胞表面抗原特异性结合，在采集 时，细胞通过激光束使激光散射。被染色的细胞就会发出荧光。这些被仪器检测到 的散射光和荧光信号提供了关于细胞大小、内部复杂度和相关荧光强度等信息。 BD Multitest检测试剂采用了荧光触发技术，能够直接对淋巴细胞群进行荧光设门， 以减少门中的未裂解细胞或有核红细胞带来的污染。
射光照射。于室温下(20-25℃)进行此程序操作 • 盖上管盖并轻轻混匀振荡进行混匀。室温(20-25℃)环境下避光孵育15min上
机检测。
二、淋巴细胞亚群检测
3、操作步骤-品牌B（六色淋巴细胞亚群试剂）
• 取一支 Trucounttube。用反向加样法加入50μl充分混匀的抗凝全血。注意血 不要碰到试管底部的微球( Beads)。
液时，将按钮按至第二个刻度点。释放按钮时，过量样本将被吸入吸头中。 将按钮按至第一个刻度点排出精确体积的样本，将过量样本留在吸头中。
二、淋巴细胞亚群检测
3、操作步骤-品牌B（四色淋巴细胞亚群试剂）
• 盖上管盖并轻轻混匀振荡进行混匀。在室温(20~25℃)环境下避光孵育 • 向各管中添加450μl 1× Multitest溶血素，注意：小心保护样本管，免受直
不能使用。室温保存的抗凝全血，可稳定48h;染色固定后的样本在2~8℃条 件下可稳定24h。 • 患者准备：无须特殊准备，检查对象生活饮食处于日常状态，空腹为宜， 静脉采血。
二、淋巴细胞亚群检测
3、操作步骤-品牌A
流式细胞术检测淋巴细胞亚群对发热患儿病原体判断的价值
Ｃｈｅ ｇｄｕ ６１ ０８ Ｃｈｉ ａ： Ｃｈｅ ｎ ０ ３， ｎ ２． ｎｇｄｕＭ ｅ ｃ ｌｅ ｄｉａｌＣｏ ｌｇｅ， Ｃｈｅ ｎｇｄｕ ６１ ８３， ００ Ｃｈｉ ａ） ｎ
Ａｂｔａ ｔ０ｂ ｅｔｖ Ｔｏａ Ｓ Ｓ ｈ ａｕ ｆ ｙ ｐ ｏ ｙ ｅｓ ｂ ｒ ｕ ｅｅ ｔｄｂ ｌｗ ｙｏ ｔｙ Ｆ ｓｒ ｃ ： ｊ ｃｉｅ Ｓ ｅ Ｓｔ ｅｖ ｌｅｏ ｍ ｈ ｃ ｔ ｕ ｇ ｏ ｐ ｄ ｔｃｅ ｙｆ ｌ ｏ ｃ ｔ ｍｅｒ （ ＣＭ ）ｆｒｔ ｅ ｕ ｇ ｎ １ｐ ｔｏ ｏ ｈ ｄ ｍｅ ｔｏ ａｈ ｊ ｇ ｎ ｎｃ ｉ ｒ ｎ ｗｉｈ ｆｖ ｒ Ｍｅｈ ｄ Ｔｈ ｏｅ ｔａ ｐ ｔ ｏ ｅ ｓｉ ２ｃ ｉ ｒ ｎ ｗｉ ｅ ｅ ｒ ｎ ｅ ｅ ｄ ｎ ｌ ｎ ｏｎ ｌ ｕ ｇ ｄ ｂ ｅ ｓｉ ｈ ｌ ｅ ｔ ｅ ｅ． ｔ ｏ ｓ ｄ ｅｐ ｔｎ ｉｌ ａｈ ｇ ｎ ｎ ６ ｈｌ ｅ ｔ ｆｖ ｒｗｅｅ ｉｄ ｐ ｎ ｅ ｔｙ ａ ｄ ｊ ｉｔ ｊｄ ｅ ｙ ｄ ｈ ｙ
ＣＤ８ ， ＣＤ３ ＣＤ１ ， Ｄ３ ９ Ｃ ＣＤ１ ／ ６ ）ａ ｄ ｂｏ ｄ ｒ ｕ ｉｅｔｓ． ｓ ｌ Ｔｈ ｅｃ ｎａ ｅｏ ｂ ｏ ｍａ ｈ ｎ ｅ ｉ ｙ ｈ ｃ ｔ ｕ ｓ ｔ ６ ５ ｎ ｌｏ ｏ ｔ ｅ ｔ Ｒｅｕｔ ｎ ｓ ｅｐ ｒｅ ｔｇ ｆａ ｎ ｒ ｌ ａ ｇ ｎ ｌｍｐ ｏ ｙｅ ｓ ｂ ｅ ｃ
淋巴细胞亚群检测流程
淋巴细胞亚群检测流程英文回答：Lymphocyte subset testing is a laboratory procedure used to evaluate the distribution and proportion of different types of lymphocytes in the blood. Lymphocytes are a type of white blood cell that play a crucial role in the immune system's response to infections and diseases. By analyzing the subsets of lymphocytes, healthcare professionals can gain valuable insights into the functioning of the immune system and identify any abnormalities or disorders.The process of lymphocyte subset testing involves several steps. First, a blood sample is collected from the patient. This can be done through a simple venipuncture procedure, where a needle is inserted into a vein and blood is drawn into a collection tube. The blood sample is then sent to a laboratory for analysis.In the laboratory, the blood sample is processed to separate the different types of cells, including lymphocytes. This is usually done using a technique called flow cytometry. Flow cytometry involves staining the cells with fluorescent dyes that specifically bind to different surface markers on the lymphocytes. The stained cells are then passed through a flow cytometer, a specialized instrument that can detect and analyze the fluorescence emitted by the cells. By measuring the fluorescence intensity, the flow cytometer can identify and quantify the different lymphocyte subsets.There are several different subsets of lymphocytes that can be analyzed in lymphocyte subset testing. The most common subsets include T cells, B cells, and natural killer (NK) cells. T cells are further divided into helper T cells (CD4+ T cells) and cytotoxic T cells (CD8+ T cells). Each subset of lymphocytes has specific functions and plays a different role in the immune response.Once the lymphocyte subsets have been identified and quantified, the results are usually reported as percentagesor absolute counts. Percentages represent the proportion of each lymphocyte subset out of the total lymphocyte population, while absolute counts indicate the actual number of cells per unit volume of blood.Lymphocyte subset testing is commonly used in clinical practice to evaluate immune system disorders, such as HIV infection, autoimmune diseases, and immunodeficiency disorders. It can also be used to monitor the effectiveness of certain treatments, such as immunosuppressive therapy or vaccination.In summary, lymphocyte subset testing is an important laboratory procedure that allows healthcare professionals to evaluate the distribution and proportion of different types of lymphocytes in the blood. By analyzing the subsets of lymphocytes, valuable information about the functioning of the immune system can be obtained. This testing process involves collecting a blood sample, processing it in the laboratory using flow cytometry, and analyzing the results. The results are reported as percentages or absolute counts, providing insights into the immune system's health and anypotential abnormalities.中文回答：淋巴细胞亚群检测是一种用于评估血液中不同类型淋巴细胞分布和比例的实验室过程。
细说“淋巴细胞亚群”
细说“淋巴细胞亚群”通常患者朋友对血常规非常熟悉，其中有淋巴细胞占白细胞的百分比和计数。
其实呢，淋巴细胞还分为各种亚群，临床上，经常有医生会开“淋巴细胞亚群”项目，以帮助了解患者的免疫功能。
一、那么“淋巴细胞亚群”是群什么细胞？众所周知淋巴细胞是构成机体免疫器官的基本单位，是参与机体细胞免疫和体液免疫应答功能的重要细胞。
人的淋巴细胞根据其生物功能和细胞表面抗原的表达又可分为三大类：T淋巴细胞，B淋巴细胞和NK淋巴细胞，即是通常所谓的“淋巴细胞亚群”。
这些细胞是如何分化而来的呢？从头说起吧，骨髓造血干细胞分化为髓样干细胞和淋巴样干细胞。
前者分化为红细胞，血小板，和原粒细胞，其中原粒细胞继续分化为粒细胞，包括嗜酸性、嗜碱性粒细胞和中性粒细胞。
而淋巴样干细胞分化为原淋细胞，继续分化为T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK淋巴细胞。
这些T、B、Nk细胞也就是所称的“淋巴细胞亚群”。
当然，T细胞还进一步分为辅助性和杀伤抑制性T细胞，调节性T细胞等。
二、在化验单上，这些“淋巴细胞亚群”又是怎样标识的呢？CD3+ 代表总的T淋巴细胞，是机体免疫系统内功能最重要的一大细胞群；CD3+CD4+代表辅助/诱导性T淋巴细胞即Th细胞；CD3+CD8+代表抑制/细胞毒性T细胞即Ts细胞。
CD3-CD19+代表B淋巴细胞，CD3-CD56+CD16+代表自然杀伤性（NK）淋巴细胞。
具体报告的是各类淋巴细胞的百分比（%），以及Th/Ts的比值。
有的医院除了百分比，还报告各种淋巴亚群的细胞绝对计数（就是每微升全血中含有的这种淋巴细胞的个数）。
三、淋巴细胞亚群是怎样测定的呢？首先，检测的标本要求抽取2毫升肝素或EDTA-K抗凝全血。
利用各种单克隆抗体，与标本中淋巴细胞表面抗原结合，再配多色荧光染料，就可以通过流式细胞术的分析，区分各淋巴细胞不同的亚型，进而得到各亚群的比例及绝对计数。
四、为什么要测定淋巴细胞亚群呢？概括说，淋巴细胞亚群是了解机体细胞免疫和体液免疫功能的重要指标，分析这些免疫细胞的比例和数量及活性对于评估机体的免疫功能非常重要。
流式细胞术淋巴细胞亚群检测室间质评结果分析
流式细胞术淋巴细胞亚群检测室间质评结果分析朱宇清;朱俊;徐翀【摘要】目的通过分析卫生部临床检验中心、上海市临床检验中心的淋巴细胞亚群室间质量评价(EQA)报告数据以及上海市2家实验室室内质控上报数据,探讨目前国内淋巴细胞亚群检测EQA评判规则的合理性,为进一步提高国内该检测项目的质量水平提供依据.方法对BD流式细胞仪用户组2014年卫生部临床检验中心及2015年上海市临床检验中心第1次淋巴细胞亚群EQA报告数据进行统计,计算各浓度质评样本上报数据的标准差(s)和变异系数(CV),选取上海市2家BD流式细胞仪用户2014年9月至2015年4月期间的淋巴细胞亚群室内质控数据,计算月s和月CV值.并对卫生部临床检验中心第201403和201405号质评样本CD3+CD4+百分比(CD3+ CD4+％)项目(靶值分别为42.7％、42.1％)、上海市临床检验中心第1521和1525号质评样本CD3+CD4+％项目(靶值分别为43.2％,44.13％)的回报数据以及2家上海市临床实验室CD3+ CD4+％项目中值水平(月组均值为44.39％～ 46.80％)室内质控数据进行比较分析.结果 2014卫生部临床检验中心5份EQA样本的s为1.10％～ 1.55％,CV为3.1％～5.5％,平均CV为3.36％;2015年上海市临床检验中心第1次EQA 5份样本的s为0.67％～1.63％,CV为3.51％～8.64％,平均CV为4.83％.在样本CD3+ CD4+％值相近的情况下,卫生部临床检验中心2个EQA样本组s(1.55％、1.35％)和组CV(3.6％、3.2％)、上海市临床检验中心2个EQA样本的组s(1.63％、1.55％)和组CV(3.78％、3.51％)均在上海市2家临床实验室室内质控月s(1.06％～2.44％、0.98％～ 2.03％)和月CV(2.18％～5.28％、2.14％～4.35％)的变化范围之内.结论由于仪器品牌和型号、溶血方法、荧光抗体的品牌和用量、设门方法、实验人员、环境条件等不同因素的影响,EQA数据统计中的s和CV低于室内质控的s和CV不合理.其原因可能是部分参与EQA的实验室在数据上报前对检测结果进行了交流、核对和更改.当前除了加强对实验室的质量教育外,EQA组织者还需要探讨建立更合适的质控规则.【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2015(030)011【总页数】5页(P1086-1090)【关键词】淋巴细胞亚群;流式细胞术;室间质量评价;标准差;变异系数【作者】朱宇清;朱俊;徐翀【作者单位】上海市临床检验中心,上海200126;上海市临床检验中心,上海200126;上海市临床检验中心,上海200126【正文语种】中文【中图分类】R446.63淋巴细胞亚群检测对影响机体免疫系统的多种因素的诊断和监测提供了重要信息。
免疫学检验-流式细胞术
同型对照，则测定结果的可靠性将受到影响。另外,样品标记、溶血、洗
涤、仪器质控和上机检测是流式细胞术的一个连续的过程，需进行全程
质控,将质控品和待测标本一起操作，所得结果如达标，则提示本次实验
结果可靠.
FCM的检测原理——
5.
获取实验数据前,应先调节仪器的光路补偿，
校正不同荧光探测之间的光谱重叠。分析实验数据时，要根据实验目的
不消除将使检测结果容易出现假阳性。
5. 其他 细胞浓度低、溶剂的性质等都会影响检测结果。
FCM的检测原理——
1.
流式细胞仪的核心元件是激光,激光的稳定性受到环境温度的影
响很大，一般要求环境温度在20~25℃之问。另外，实验室内尽量减少灰尘
和烟尘，室内光源和仪器光源都要有良好的屏蔽作用。
2.
每天上机前须用质控品校正仪器，确保仪器的状态良好才能
则被当作废液抽吸掉，完成细胞分选的目的。
FCM的检测原理——
1.
荧光染色时的环境温度对结果有一定的影响，高温
影响更加明显。因为温度升高时溶剂与荧光染料分子运动加快，使
荧光淬灭的可能性增大。一般 20°以下时，荧光分子发光产额变化
不大，基本保持恒定。
2.
荧光染料发光的最好条件是在溶剂中处于离子化状
态。每一种荧光染料分子发光产额最高时都有最适 pH，从而保持
荧光发光基团溶剂之间电离平衡。pH改变,则会造成荧光光谱改变
响荧光强度。
FCM的检测原理——
3.
在对插入性荧光染料进行固定时,有些固定剂与细
胞的某些物质结合后,干扰了荧光染料与细胞成分的结合,造成荧光
强度的改变。例如,用醛类固定剂进行 DNA 分析时，可以使荧光
强度降低约 50%。