然后按还原糖测定并折算成淀粉含量
生化实验七 淀粉中还原糖含量的测定
实验七淀粉中还原糖含量的测定一、目的掌握还原糖含量的测定方法，学习用比色法测定还原糖的方法；二、原理单糖和某些寡糖含有游离的醛基或酮基，有还原性，属于还原糖；而多糖和蔗糖等属于非还原性糖。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其他产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在过量的NaOH 碱性溶液中此化合物在540nm处有最大吸收，在一定浓度范围内还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中还原糖的含量三、器材1、吸管1.0mL（×2）、5.0mL（×1）、0.1mL（×1）、0.2mL（×1）、0.5mL（×3）2、试管1.5cm×15cm（×10）3、分光光度计 ,水浴锅、电子分析天平,电炉、容量瓶（100mL×1）、玻璃漏斗、量筒、研钵和三角烧瓶。
四、试剂与材料1、标准葡萄糖溶液（1.0mg/mL）：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，溶于蒸馏水并定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
2、3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂：将6.3g DNS和262mL 2mol/L NaOH溶液，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，存储于棕色瓶中备用。
3、食用面粉五、操作1、1. 葡萄糖标准曲线的制作：取8支15mm×180mm试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。
吸光度为纵坐标，葡萄糖含量（mg ）为横坐标做图得标准曲线。
2、样品中还原糖的提取和测定称取1.5g 食用面粉加水约5mL ，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约20mL 蒸馏水冲洗研钵2～3次，洗出液也转入三角烧瓶中。
于50℃水浴中保温约0.5h （使还原糖浸出），取出，冷却后定容至50mL 。
过滤，取1.0mL 滤液进行还原糖的测定。
食品中一般成分分析—碳水化合物的测定
.
提取液的澄清
常用澄清剂：
1.中性醋酸铅：这是最常用的一种澄清剂。铅离子能与很多离子结
合，生成难溶沉淀物，同时吸附除去部分杂质，它能除去蛋白质、果
胶、有机酸、单宁等杂质。它的作用可靠，不会沉淀样液中的还原糖。
在室温下也不会形成铅糖化合物，因此适用于测定还原糖的样液的澄
还原糖的测定方法很多，其中最
常用的有直接滴定法、高锰酸钾滴
定法、铁氰化钾法、碘量法、比色
法及酶法等。
我们以常用的直接滴定法为例来
介绍。
.
Part 01
原理
滴定原理
各步反应方程式如下：
滴定原理
各步反应方程式如下：
Part 02
试剂
滴定试剂
碱性酒石酸铜甲液：称取15.00g硫酸铜及0.05g次甲基蓝，
在提取液中，除含有单糖和低聚糖等可溶性糖类外，还不同程
度的含有一些影响测定的杂质，如色素、蛋白质、可溶性果胶、
可溶性淀粉、有机酸、氨基酸、单宁等。澄清剂的作用是除去一
些影响糖类测定的干扰物质。
.
提取液的澄清
糖类澄清剂的要求：
1.能较完全的除去干扰物质；
2.不吸附或沉淀被测糖分，也不改变被测糖分的理化性质；
试纸测试使其pH约为7。
操作方法
然后加入20mL 200g/L中性乙酸铅溶液，摇匀，静置10min，以沉淀蛋
白质、果胶等杂质。再加入20mL 100g/L的硫酸钠溶液，以除去过多的铅
离子。摇匀后用水转移到500mL容量瓶中，加水定容。过滤，弃去初滤液，
收集滤液备用。
另取100mL水和30mL6mol/LHCL于250mL锥形瓶中，按上述方法操作，
还原糖含量的测定
2、测定样品中还原糖和总糖含量。 （1）提取样品中的还原糖： 立即用流动冷水冷却至室温 乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
立即用流动冷水冷却至室温
以1、2号管的吸光值，分别在标准曲线上查出相应的还原糖毫克数。 通过本次实验，掌握还原糖定量测定的基本原理，学习比色定糖法的基本操作，熟悉分光光度计的使用方法。
准确称取0.1g食用面粉放置于100ml三角 然后以葡萄糖浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制出标准曲线。
准确称取1g食用面粉放置于100ml三角瓶中，加少量蒸馏水调成糊状，再加入50ml蒸馏水，摇匀，置于50℃水浴条件下20分钟，使还 原糖浸出；
瓶中，加入10ml 6mol/L HCl及15ml蒸馏 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法，其基本原理是用比色法对还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（
还原糖
总糖
2.0
1.0
0
1.0
1.5
1.5
同时一起在沸水浴中加热5min*
冷却
立即用流动冷水冷却至室温
蒸馏水(ml)
21.5
21.5
吸光值(A540)
结果处理
以1、2号管的吸光值，分别在标准曲线 上查出相应的还原糖毫克数。按下列公式 计算出样品中还原糖和总糖的百分含量：
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法，其基本原理是用比色法对还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（
可 适 当 延 长 沸 水 浴 时 间 ； 若 不 显 蓝 色 ， 则 还原糖以葡萄糖含量计）。
立即用流动冷水冷却至室温
待水解液冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，用6mol/L NaOH中和至微红色，在4000rpm、5分钟条件下离心，得到的上清液转移到
马铃薯中淀粉含量的测定-精选.
ANYANG INSTITUTE OF TECHNOLOGY马铃薯中淀粉含量的测定Determination of starch content in potato系（院）名称：生物与食品工程学院专业班级：07食品质量与安全1班学生姓名：马天顺马帅指导教师姓名：田萍指导教师职称：副教授2010年6月录…………………………………………………………………… 英文摘要、关键词…………………………………………………………………… 引言………………………………………………………………………………………第1章 ×××××××××××××…………………………………………1.1 ×××××××××××××………………………………………………1.1.1 ××××××××××××× ……………………………………………1.1.2 ××××××××××××× ……………………………………………1.2 ××××××××××××× ………………………………………………1.3 ××××××××××××× ………………………………………………第2章 ××××××××××××××× …………………………………2.1 ×××××××××××××………………………………………………2.1.1×××××××××××××………………………………………………2.1.2×××××××××××××………………………………………………2.2 ××××××××××××× ………………………………………………2.3 ××××××××××××× ………………………………………………第3章××××××××××××………………………………………………3.1 ××××××××××××× ……………………………………………… 3.2 ××××××××××××× ………………………………………………第4章××××××××××××× ………………………………………… 结论 …………………………………………………………………………………… 致谢 …………………………………………………………………………………… 参考文献 ………………………………………………………………………………马铃薯中淀粉含量的测定摘要：××××××××××××××××××××××××××××××××关键词：××××××××××××英文题目Key words：×××;×××;×××;×××引言马铃薯为茄科块茎作物,总产量和栽培面积仅次于小麦、水稻和玉米,是世界第四大粮食作物。
食品中还原糖的测定(精)
食品安全检验技术（理化部分） 食品中还原糖的测定
(5) 结果计算： ①根据滴定时所消耗的高锰酸钾标准溶液的量，计算相当于 样品中还原糖质量的氧化亚铜的质量：
X c (V V0 ) 71.54
式中 X----相当于样品中还原糖质量的氧化亚铜的质量，mg； C----1/5KMnO4标准溶液的浓度，mol/L; V----测定用样液消耗高锰酸钾标准溶液体积，mL; V0----试剂空白消耗高锰酸钾标准溶液体积，mL; 71.54----1mL0.1000mol/L(KMnO4)溶液相当于氧化亚铜的质量，mg/mmol
ⅳ、汽水等含二氧化碳的饮料：吸取样品100.0mL于蒸 发皿中，在水浴上除去二氧化碳后，转移入250mL容量 瓶中，并用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶中，再加水 至刻度，混匀备用。
食品安全检验技术（理化部分） 食品中还原糖的测定
② 测定 吸取50.00mL处理后的样品溶液于400mL烧杯中，加碱
性酒石酸铜甲、乙液各25mL，盖上表面皿，置电炉上加热， 使其在4分钟内沸腾，再准确沸腾2分钟，趁热用铺好石棉 的古氏坩埚或G4垂融坩埚抽滤，并用60℃热水洗涤烧杯及 沉淀，至洗液不呈碱性为止。将坩埚放回原400mL烧杯中， 加25mL硫酸铁溶液及25mL水，用玻璃棒搅拌使氧化亚铜 完全溶解，以高锰酸钾标准溶液滴定至微红色为终点。记 录高锰酸钾标准溶液消耗量。
③mL乙冰酸醋锌酸溶，液加：水称溶取解21并.9稀g乙释酸10锌00[ZmnL(C。H3COO)2·2H2O]，加3
④ 106g/L 亚 铁 氰 化 钾 溶 液 ： 称 取 106.g 亚 铁 氰 化 钾 [K4Fe(CN)6·3H2O]，溶于水中，稀释至100mL。
项目4-7食品中淀粉的测定
不同来源的淀粉所含这两种淀粉的比例是不同的。
如：粳米：直链淀粉的含量约为16%～24 %
糯米：支链淀粉的含量高达98 % ～100 %
直链淀粉可与碘生成深蓝色络合物，
支链淀粉加入碘后呈现的紫红色。
淀粉性质
水溶性：直链淀粉不溶于冷水，可溶于热水； 支链淀粉常压下不溶于水，只有在加热并加压时才能溶解于水。
任务1、仪器设备及试剂的准备
仪器设备：
水浴锅 电炉 酸式滴定管 锥形瓶（3个） 碘量瓶（磨口锥形瓶） 冷凝管 50mL量筒 250mL量筒 漏斗 500mL容量瓶
试剂：
乙醚、 乙醇（85%）、 6mol/L盐酸、 10％及40%氢氧化钠溶液、 乙酸铅溶液、 硫酸钠溶液、 甲基红指示剂、 费林试剂甲液、乙液 葡萄糖标准溶液
对富含半纤维素及果胶质的样品，因为淀粉水解的时候，他 们也水解为木糖、阿拉伯糖等还原糖，使测定结果偏高
特点：操作简单、应用广泛，但是选择性及准确性不及酶法。
具体工作任务分解
任务1：仪器设备及试剂的准备 任务2：样品预处理 任务3：样品淀粉含量测定 任务4：结果结果数据处理 任务5：填写检验报告单
如：1、在雪糕、棒冰等冷饮食品中作为稳定剂 2、火腿肠中常使用淀粉做增稠剂，增加肉制品的持水性和组织形态。
淀粉含量是某些食品中主要的质量指标，是食品生产管理中常做的 分析项目。
子项目二：火腿肠中淀粉的测定
引言
GB 20712-2006《火腿肠》规定： 火腿肠（高温蒸煮肠）以鲜或冻畜、禽、鱼肉为主
合
寡糖
包括：异麦芽糖低聚糖、低聚果糖、
物
低聚半乳糖、低聚木糖
多糖
淀粉的国标测定方法
淀粉的国标测定方法X1= ??????????（A1-A2）×0.9???????????????×100?? (1)m1×?V1?×?V3?×1000V2 100X 2=??????????（A3-A4）×0.9???????????????×?100?……………（?1?）m2×?50? ×?V2?×1000250 100式中： X2--样品中淀粉的含量，%；A3--测定用样品中还原糖的含量。
mg；A4--试剂空白中还原糖的含量，mg；m2--称取样品质量，g；V2--测定用样品处理液的体积，ml。
500--样品液总体积，ml；0.9--还原糖（以葡萄糖计）换算成淀粉的换算系数；（注：酸水解能分解部分半纤维素，形成具有还原力的单糖，如木糖、阿拉伯糖等，可影响分析结果。
为了比较正确地测定食物中淀粉含量，建议采用淀粉酶糖化淀粉，除去不可溶性的残渣后，再用酸水解使之成为葡萄糖，然后测定其含量，最后换算成淀粉。
三、可消化淀粉和抗性淀粉的测定方法（酶-直接法）1.原理样品先在37℃下经α-淀粉酶水解，使可消化淀粉转化成葡萄糖，用80%乙醇提取，未水解的抗性淀粉部分经沸水浴凝胶化后，在淀粉葡萄糖苷酶转化成葡萄糖，用葡萄糖氧化酶法分别测定葡萄糖含量，再换算成可消化淀粉和抗性淀粉含量。
2.适用范围参考Englyst和Champ的方法。
适用于所有含淀粉食物的测定。
3.仪器（1）恒温水浴箱（2）温箱（3）分光光度计4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1） 0.1mol/L乙酸缓冲液（pH 5.0）：称取14.28 g 乙酸钠（CH3COONa·3H2O）溶于水中，加入2.7ml 冰乙酸，并调节pH 5.0，用水定容至1 L。
（2）酶溶液：分别称取4gα-淀粉酶溶液（α-amylase，Sigma公司）、1g淀粉葡萄糖苷酶溶液（amyloglucosidase，Sigma 公司）和0.3g转换酶（invertase，Sigma公司）溶液于研钵中，用 0.1mol/L 乙酸缓冲液研磨制成匀浆，并调节体积为100ml。
总糖和还原糖的测定
总糖和还原糖的测定──3,5－二硝基水杨酸法目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。
实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
黄色桔红色试剂和器材一、试剂3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000ml容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液325ml，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000ml。
葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖200mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为2.0mg/ml。
6mol/L HCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。
碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。
0.1% 酚酞指示剂。
二、材料藕粉，小麦淀粉或玉米淀粉。
三、器材723PC、S22型分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。
一、葡萄糖标准曲线制作取5支15mm×180mm试管，按下表加入2.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。
管号葡萄糖标准液蒸馏水葡萄糖含量OD540 /ml /ml /mg0 1 00.210.80.42 0.4 0.6 0.83 0.6 0.4 1.24 0.8 0.2 1.65 1 0 2操作方法在上述试管中分别加入DNS试剂2.0ml，于沸水浴中加热2min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9.0ml，摇匀，在540nm波长处测定光吸收值。
以1.0ml蒸馏水代替葡萄糖标准液按同样显色操作为空白调零点。
以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
火腿肠(高温蒸煮肠)中淀粉含量测定酸水解法
实验七火腿肠（高温蒸煮肠）中淀粉含量的测定—酸水解法大体知识点1、把握酸水解法测定淀粉的原理、大体进程和操作关键。
2、熟练称量、过滤、定容、滴定等大体操技术。
3、淀粉水解、可溶性糖去除的方式和关键环节。
重点：1、熟练称量、过滤、定容、滴定等大体操技术二、酸水解法测定淀粉的原理及注意事项。
难点：酸水解法测定淀粉的原理和操纵要点温习与提问：1、检查实验预备情形，（1）实验内容；（2）实验仪器与试剂有哪些？（3）酸水解法测定淀粉的程序。
2、酸水解法测定淀粉的原理和操纵要点【引入新课】淀粉在食物工业顶用途普遍经常使用于食物原料或辅料。
淀粉是以葡萄糖为大体单位通过糖苷键而组成的多糖类化合物。
淀粉是白色、无气味、无味道的粉末状物质，在热水里淀粉颗粒会膨胀破裂，有一部份淀粉溶解在水里，另一部份悬浮在水里，形成胶状淀粉糊，这一进程称为糊化作用。
糊化是淀粉食物加热烹制时的大体转变，也确实是常说的食物由生变熟。
淀粉不溶于冷水，也不溶于乙醇、乙醚或石油醚等有机溶剂，故可用这些溶剂淋洗、浸泡除去淀粉的水溶性糖或脂肪等杂质。
淀粉不显还原性，但它在酶（或酸）存在和加热条件下能够慢慢水解，生成一系列比淀粉分子小的化合物，最后生成还原性单糖——葡萄糖。
淀粉酶的专一性高，但只能将淀粉慢慢水解至麦芽糖时期；盐酸溶液对淀粉的专一性较差，但它能将淀粉水解至最终产物葡萄糖。
故在测定淀粉时，使酶——稀盐酸分解法。
GB 20712-2006《火腿肠（Ham sausage）》规定：火腿肠（高温蒸煮肠）Ham sausage(Autoclaved ham sauasge)以鲜或冻畜、禽、鱼肉为要紧原料，经腌制、搅拌、斩拌（或乳化）、罐入塑料肠衣，经高温杀菌，制成的肉类灌肠制品。
感官要求应符合表1的规定。
表1.理化要求应符合表2的规定。
表2.熏煮火腿（Cooked cured ham）:以畜、禽肉为要紧原料，经精选、切块、盐水注射（或盐水浸渍）腌制后，加入辅料，再经滚揉、充填（或不充填）、蒸煮、烟熏（或不烟熏）、冷却、包装等工艺制作的火腿类熟肉制品。
实验六 淀粉含量测定
实验六（红薯/马玲薯/黄地瓜等淀粉块茎类植物）中淀粉含量测定（酸水解法）综合设计（4学时）一、实验原理1、淀粉提取，也称为浆渣分离或分离，是淀粉加工中的关键环节，直接影响到淀粉提取率和淀粉质量。
粉碎后的物料是细小的纤维，体积大于淀粉颗粒，膨胀系数也大于淀粉颗粒，比重又轻于淀粉颗粒, 将粉碎后的物料，以水为介质，使淀粉和纤维分离开来。
2、淀粉是食品中主要的组成部分，也是植物种子中重要的贮藏性多糖。
淀粉跟稀硫酸在加热的条件下能够完全水解成葡萄糖、麦芽糖等还原糖。
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖在碱性条件下被氧化成糖酸及其他产物，3，5-二硝基水杨酸则被还原成棕红色的3-氨基-5硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm 波长下测定光密度值，查对标准曲线。
由于淀粉完全水解成还原糖的量是成正比的，所以，也与棕红色物质的深浅成正比关系。
二、材料、仪器与试剂（一）材料：五指山红薯。
（二）仪器：分光光度计722、小台秤、分析天平、烧杯（100mL）、研钵、容量瓶（100mL）、洗瓶、漏斗、滤纸、具塞刻度试管（15mL）、恒温水浴、移液管（1mL, 2mL）。
（三）试剂1 2mol/L NaOH 溶液准确称取4g NaOH固体，溶于15 mL蒸馏水中，并倒入50ml容量瓶中，用蒸馏水分几次清洗烧杯并将清洗的溶液倒入容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线。
2 3，5-二硝基水杨酸试剂准确称取3，5-二硝基水杨酸1g，溶于2mol/L NaOH 溶液20mL，加入50mL蒸馏水，再加入30g酒石酸钾钠，待溶解后用蒸馏水定容至100mL。
盖紧瓶塞，勿让CO2进入。
若溶液浑浊，可过滤后使用。
3 0.1mol/L柠檬酸缓冲液（pH5.6）A液（0.1mol/L柠檬酸）：称取C6H8O7٠H2O 21.01g，用蒸馏水溶解并定容至1000mL。
B液（0.1mol/L柠檬酸钠）：称取Na3C6H5O7٠2H2O 29.41g，用蒸馏水溶解并定容至1000mLA液110 mL与B液290 mL 混匀，即为0.1mol/L柠檬酸缓冲液（pH5.6）。