microRNA在结肠癌组织的表达及其临床意义

人微小RNA-200a的生物学功能及其在结肠癌中的意义

潘志刚;苏东星;肖晨;梁肖兰;郑捷

【期刊名称】《广西医学》

【年(卷),期】2018(040)018

【摘要】目的探讨人微小RNA(miR)-200a的生物学功能及其在结肠癌中的意义.方法采用miRWalk在线工具筛选miR-200a靶基因,使用DAVID、京都基因和基因组百科全书数据库和STRING分别进行靶基因功能分析、信号通路分析和蛋白互作网络分析.从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中下载结肠癌的临床数据和测序数据,包括453个癌组织样本和8个正常肠黏膜组织样本,对比癌组织和正常组织miR-200a表达水平,分析miR-200a与结肠癌患者临床病理参数、生存时间的关系.结果共筛选出200个靶基因,这些靶基因参与的主要生物过程为氧化应激反应,主要参与的细胞成分为细胞外泌体,分子功能为SH2域结合,主要参与的信号通路为miR在肿瘤中的信号通路.蛋白互作网络显示PH区域富含亮氨酸残基的蛋白磷酸酶1(PHLPP1)、富亮氨酸重复激酶2、沉默信息调节因子α相关酶1(SIRT1)、CT10调节酶(CRK)、E2F3为网络中的核心基因.结肠癌组织miR-200a表达水平高于正常组织(P<0.05);结肠癌临床分期Ⅲ+Ⅳ期者、远处转移者的miR-200a表达水平分别高于临床分期Ⅰ+Ⅱ期者、无远处转移者(P<0.05);miR-200a高表达的患者生存时间较低表达者短(P<0.05).结论人miR-200a通过靶基因发挥多种生物学作用,其在结肠癌组织中高表达,可能与肿瘤的发生和发展有关,或可用于评估患者预后.

【总页数】4页(P2173-2175,2186)

【作者】潘志刚;苏东星;肖晨;梁肖兰;郑捷【作者单位】广西南宁市第二人民医院消化内科,南宁市 530031;广西南宁市第二人民医院消化内科,南宁市 530031;广西南宁市第二人民医院消化内科,南宁市

miRNA在结肠癌中的潜在作用

作者：魏业东黄嬛李明娟蒋小红

来源：《新教育时代·教师版》2017年第38期

摘要：微小RNA（miRNA）是一段小型非编码RNA序列，它调控着某些编码细胞重要功能的基因的表达，比如细胞的增殖，分化和凋亡。某个特定的miRNA可能扮演着抑癌基因或者致癌基因的角色。这里，我们对miRNA在结肠癌中的潜在作用：作为结直肠癌早期诊断、预后和化疗敏感性预测标志物的影响作一综述。

关键词：结肠癌 miRNA 诊断预后化疗敏感性预测

在世界范围内，结直肠癌（colorectal cancer， CRC）在女性易发癌症中排名第三，在男性中排名第二。每年大约超过一百万人患结直肠癌并且超过五十万人死于结直肠癌。结直肠癌的发生率有很大差异，主要取决于生活习惯，环境和基因等方面[1]。流行病学的研究已经发现造成结直肠癌的危险因素，主要包括年龄，家族史，肠炎。同时，也发现了一些可预防的因素，例如肥胖，过度饮酒，过度食肉，高胆固醇的饮食，吸烟，较低的社会地位以及久坐的生活方式。

预后取决于诊断时的癌症分期。美国癌症联合会和国际抗癌联盟的肿瘤淋巴结转移（TNM）分期系统是目前首选的结直肠癌分期系统[2]。结直肠癌的早期发现会有90%的患者有5年生存期，相比于远端转移的发生，只有12%的患者有5年生存期。结直肠癌的早期症状并不明显，结直肠癌的诊断很大程度上依赖于筛查[1]。在过去的近20年里，筛选手段的引进包括内镜检查术，粪便潜血测试（fecal occult blood test， FOBT）和钡餐灌胃都改良了结直肠癌的早期诊断，在很多国家，结直肠癌的发生率和死亡率都呈现出了降低的趋势。不幸的是，只有不到40%的结直肠癌患者被及時诊断出了疾病。[3]另外，在接近50%的患者中，这种诊断是不够的。内镜检查术是有创伤的、昂贵的，而微创的、便宜的FOBT仅对47%-73%的患者敏感[1，2]，因此，开发准确的、微创的诊断和预后标志物是非常有必要的。

miR-544a在结直肠癌组织中的表达及其意义

124CARCINOGENESIS，TERATOGENESIS&MUTA

GENESIS论著癌变畸变突变Vol.36No.2Mar.2024

miR-544a

在结直肠癌组织中

的表达及其意义

童晶1，王丹2，*

(1．扬州市江都人民医院病理科，江苏扬州

225299；2．商丘市第一人民医院病理科，河南

商丘476005)Expressionandsignificanceof

miR-544ainpatientswith

colorectalcancer

TONGJing1,WANGDan2,*

(1.PathologyDepartmentofYangzhouJiangduPeople􀆳sHospital,Yangzhou

225299,Jiangsu;2.PathologyDepartmentofShangqiuFirstPeople􀆳s

Hospital,Shangqiu476005,Henan,

China)

收稿日期：2023-06-09；修订日期：2023-09-25作者信息：童晶，E-mail：***************。*通信作者，王丹，E-mail：*******************【摘要】目的：探讨结直肠癌患者组织中微小RNA-544a(miR-544a)的表达水平及其与患者预后的关系。方法：选取2016年1月—2019年2月住院并接受手术的150例结直肠癌患者，采用实时荧光定量PCR法检测癌组织中miR-544a的表达情况，免疫组织化学

法检测癌组织中Ki67、CD4、CD8表达情况。Mann-WhitneyU检验、卡方检验和Fisher精确检验分析癌组织中miR-544a表达水平

与患者临床病理指标的关系。单因素和多因素Cox回归分析影响结直肠癌预后的因素。Kaplan-Meier法分析结直肠癌组织中miR-544a表达水平与患者无病生存期(DFS)、总生存期(OS)的关系。结果：结直肠癌组织中miR-544a相对表达水平为1.85±0.15，

微小RNA在直肠癌组织中的表达及其临床意义

２０１２年２月第９卷第５期　・短篇论著・　

微小ＲＮＡ在直肠癌组织中的表达及其临床意义　

伍尚标　陈　戎　全天一　李志发　

广州医学院第三附属医院胃肠外科，广东，　州５１０１５０　

［摘要】目的研究微小ＲＮＡ（ＭｉｃｒｏＲＮＡ）在直肠癌组织与正常直肠组织中的表达差异。方法提取６０例直畅癌　癌　

旁正常组织中总ＲＮＡ，对标本中ＭｉｃｒｏＲＮＡ表达状况应用实时荧光定量ＰＣＲ方法进行检测。对其他２Ｏ俩直肠癌川　

织及其癌旁正常组织应用问题分析（ＰＡＭ）法进行定性判断。结果在直肠癌发生过程中有４１种ＭｉｃｆｏＲＮＡ表达量显　著下降（＜０．６６）。对２０例直肠癌组织应用ＰＡＭ法进行定性判断的结果与病理检查结果基本一致　结论ＭｉｃｒｏＲＮＡ　

与直肠癌联系密切，可以成为直肠癌早期预测和诊断的有效手段　

ｆ关键词】微小ＲＮＡ；直肠癌症；实时荧光定量ＰＣＲ　【中图分类号】Ｒ７３５．３７　【文献标识码１　Ａ　【文章编号】１６７３—７２１０（２０１２１０２（ｂ１—００２３—０３　

Ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　ａｎｄ　ｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｉｖｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏＲＮＡ　ｃｌｕｓｔｅｒ　ｉｎ　

ｈｕｍａｎ　ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ　ｃａｎｃｅｒ　

ＷＵ　Ｓｈａｎｇｂｉａｏ　ＣＨＥＮ　Ｒｕｎｇ　０ＵＡＮ　Ｔｉａｎｙｉ　ＬＩ　Ｚｈｉｆａ　

Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ　Ｓｕｒｇｅｒｙ，ｔｈｅ　Ｔｈｉｒｄ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ．　

Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５１０１５０，Ｃｈｉｎａ　［Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏＲＮＡ　ｉｎ　ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ａｎｄ　ａｄｊａｃｅｎｔ　ｏｕ［ｕｎｌｏｒｏｕｓ　

MicroRNA家族在结直肠癌发生发展过程中的作用

内蒙古医科大学学报２０１３年１Ｏ月　第３５卷第５期　

ＭｉｃｒｏＲＮＡ家族在结直肠癌发生发展过程中的作用　

彭志平　，　袁　飞　，　史学森　

（１．包头市中心医院检验科，内蒙古包头０１４０１０；２．包头市中心医院消化内科）　・４０３・　

摘要：结直肠癌（Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ　ｃａｎｃｅｒ，ＣＲＣ）是消化系统的常见恶性肿瘤之一。ＭｉｃｒｏＲＮＡ家族与ＣＲＣ的相关　基因和通路有着广泛的联系。ＭｉｃｒｏＲＮＡ家族中有些是促癌基因，有些作为抑癌基因发挥作用，与细胞的各种信　号传导通路组成一个复杂的调控网络，随着表达的异常，促进肿瘤的发展。本文综述了ＭｉｃｒｏＲＮＡ家族在结肠癌　发生发展过程中的作用。　关键词：结直肠癌；诊断；治疗　中图分类号：Ｒ７３５．３　５　文献标识码：Ａ　文章编号：２０９５—５１２Ｘ（２０１３）０５—０４０３—０４　

ＴＩⅢＲｏＬＥ　ＯＦ　ＣＲｏＲＮＡ　ＦＡＭ皿　唧ＤＥⅦＩ　

ＡＮＤ　ＰＲｏＧＲＥＳＳＩＯＮ　ＯＦ　ＣＯＬＯＲＥＣＴＡＬ　ＣＡＮＣＥＲ　

ＰＥＮＧ　Ｚｈｉ－ｐｉｎｇ，　ＹＵＡＮ　Ｆｅｉ，　ＳＨＩ　Ｘｕｅ－ｓｅｎ　

（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｏｔｏｕ　Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｂａｏｔｏｕ　０１４１４０　Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ　ｃａｎｃｅｒ　ｉｓ　ｏｎｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｍｍｏｎ　ｍａｌｉｇｎａｎｔ　ｔｕｍｏｒｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ　ｓｙｓｔｅｍ．Ｔｈｅｒｅ　

ａｒｅ　ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ　ｃｏｎｔａｃｔｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ＭｉｃｒｏＲＮＡ　ｆａｍｉｌｙ　ｗｉｔｈ　ＣＲＣ—ｒｅｌａｔｅｄ　ｇｅｎｅｓ　ａｎｄ　ｐａｔｈｗａｙｓ．Ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　

ｅｘｃｅｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｔｈｅｙ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｔｕｍｏｒ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｔｈｉｓ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｓｕｍｍａｒｉｚｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ＭｉｃｒｏＲＮＡ　

microRNA在结直肠癌的研究进展

８２　南昌大学学报（医学版）２０１３年第５３卷第５期Ｊ０ｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎａｎｃｈａｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）２０１３，Ｖｏ１．５３　Ｎｏ．５　

ｍｉｃｒｏＲＮＡ在结直肠癌的研究进展　

占一姗　（综述），陈幼祥　（审校）　（南昌大学ａ．研究生院医学部２０１１级；ｂ．第一附属医院消化科，南昌３３０００６）　

摘要：ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）是广泛存在于真核生物中的一组短小的，不编码蛋白质的ＲＮＡ家族，它在转录后水平　调控基因的翻译表达，在生物发育、脂肪代谢、细胞的分化、增殖和凋亡等过程中发挥着重要作用，近来有研究发　现，ｍｉｃｒｏＲＮＡ与结肠癌的发生发展密切相关，并且成为结肠癌的诊断、转移及预后研究热点，本文就ｍｉＲＮＡ与结　肠癌的发病、转移及预后做一综述。　关键词：ｍｉＲＮＡ；结肠癌；发病；转移；预后　中图分类号：Ｒ７３５．３　５　文献标志码：Ａ　文章编号：２０９５—４７２７（２０１３）０５－－Ｏ。８２一ｏ５　

ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）是一类高度保守的非编码　ＲＮＡ，长度一般长约１８～２５个核苷酸内源性单链　

ＲＮＡ，由高等真核生物基因组编码，通过调节基因　

的表达参与一系列生命过程。继１９９３年Ｌｅｅ等口　

在研究线虫发育过程中发现第１个ｍｉＲＮＡ—ｌｅｔ４以　来　Ｊ，现已有２１　２６４个ｍｉＲＮＡ相继在脊椎动物、果　

蝇、蠕虫、植物和病毒等物种中被发现，估计在人类　基因组中可能存在约１　０００多个ｍｉＲＮＡｓ［２］。ｍｉＲ—　ＮＡ参与调节细胞周期、凋亡、分化、发育、代谢、免　

疫调控以及肿瘤发生等许多重要生物学过程，其中　特别与肿瘤的发生密切相关。　

结直肠癌（ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ　ｃａｎｃｅｒ，ＣＲＣ）是最常见的　

恶性肿瘤之一，在过去二十年间，全球发病率呈上升　

趋势，在世界范围内其发病率处于恶性肿瘤的第３　位＿３］，而在我国随着生活水平的提高及饮食习惯的　

改变，排在恶性肿瘤和致死因素的第４位［４］，并且其　

结直肠癌中microRNA-625表达的临床意义

刘楠启;孟胜男;刘莹

【期刊名称】《世界华人消化杂志》

【年(卷),期】2013()29

【摘要】目的:了解microRNA-625(miR-625)在结直肠癌组织中的表达情况及其与肿瘤临床病理参数及生存率的相关性.方法:应用定量逆转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术检测78对结直肠癌及癌旁正常组织以及结直肠癌细胞系中miR-625的表达,统计学分析其表达水平与肿瘤临床病理参数及生存率的关系.结果:结直肠癌组织及癌旁正常黏膜组织中miR-625表达水平分别为0.769±0.372和2.748±0.923,癌组织中表达显著下调,P=0.021.结直肠癌细胞系HCT、SW480中miR-625表达水平分别为0.634和0.941,表达水平与低转移潜能细胞系Caco-2中表达水平具显著差异,P<0.05.miR-625的低表达与晚期淋巴结转移,肝转移密切相关,P值均<0.05.随访数据提示miR-625低表达结直肠癌患者5年生存率较低.结论:结直肠癌组织及肿瘤细胞系中miR-625低表达,其低表达与结直肠癌侵袭转移密切相关,且提示较差的预后.

【总页数】5页(P3158-3162)

【关键词】miR-625;结直肠癌;qRT—PCR

【作者】刘楠启;孟胜男;刘莹

【作者单位】中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室;中国医科大学药学院药剂教研室【正文语种】中文

【中图分类】R735.3

【相关文献】

1.瘦素及其受体在结直肠癌和转移性结直肠癌中的表达及临床意义 [J], 张生军;刘敏丽;常琦;刘勇峰

2.MicroRNA-625在食管鳞癌中的表达及临床意义 [J], 刘莎莎;岳冬丽;陈新峰;平玉;张毅

3.瘦素及其受体在结直肠癌和转移性结直肠癌中的表达及临床意义 [J], 邹辉;蒲志忠;唐彩益

结肠癌组织中miR-183-5p和THEM4的表达水平及临床意义

王前进;董久兴;武振明

【期刊名称】《中国现代普通外科进展》

【年(卷),期】2024(27)1

【摘要】目的:研究结肠癌组织中微小RNA-183-5p(miR-183-5p)和硫酯酶超家族成员4(THEM4)的表达水平及其临床意义。方法:收集河北中石油中心医院96例结肠癌患者为研究对象,在进行根治切除术过程中收集患者结肠癌组织及癌旁正常组织。检测结肠癌组织及癌旁正常组织中miR-183-5p和THEM4 m RNA的相对表达水平。分析两者的相关性及其与预后的关系。Cox回归分析影响结肠癌患者预后的危险因素。结果:与癌旁正常组织相比,结肠癌组织中miR-183-5p表达水平升高(P<0.05),THEM4 m RNA表达水平降低(P<0.05)。结肠癌组织中miR-183-5p与THEM4 m RNA表达呈负相关(r=-0.529,P<0.05)。miR-183-5p高表达组生存率低于低表达组(P<0.05),THEM4高表达组生存率显著高于低表达组(P<0.05)。TNM分期(Ⅲ~Ⅳ)、miR-183-5p高表达、THEM4低表达是结肠癌患者不良预后的危险因素(P<0.05)。结论:结肠癌织中miR-183-5p表达水平升高,THEM4表达水平降低,两者均与患者临床病理特征及预后密切相关。

【总页数】5页(P42-46)

【作者】王前进;董久兴;武振明

【作者单位】河北中石油中心医院肿瘤科【正文语种】中文

【中图分类】R735.35

【相关文献】

1.结肠癌组织中Mina53和H-钙黏蛋白的表达水平及临床意义2.结肠癌组织中SATB1、FN1和PDGFRB蛋白表达水平及临床意义3.结肠癌组织中miR-802和RAB23的表达水平及临床意义4.结肠癌组织中MMP-2、MMP-9、CEACAM-1的表达水平及其临床意义5.长链非编码RNA DNAJC3-AS1、微RNA-214-3p在结肠癌组织、结肠腺瘤性息肉中的表达水平及临床意义

结直肠癌中microRNA-214的表达及其与p53的关系

广东医学２０１３年４月第３４卷第８期　ＧｕａｎｇｄｏｎｇＭｅｄｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　Ａｐｒ．２０１３，Ｖｏ１．３４，Ｎｏ．８　

结直肠癌中ｍｉｃｒｏＲＮＡ一２１４的表达及其与　

ｐ５３的关系术　

赵增仁　，樊智彬　，张丽静　，吴晨鹏。，张学明　，刘博　

河北医科大学第一医院普外科（石家庄０５００３１）；河北医科大学　免疫学教研室，　病理学与病理生理学教研室，　

外科学教研室（石家庄０５００１７）；　河北省唐山市工人医院肛肠科（０６３０００）　

【摘要】　目的探讨结直肠癌中ｍｉｃｒｏＲＮＡ一２１４（ｍｉＲ一２１４）的表达及其与ｐ５３的关系。方法采用实时荧　

光定量聚合酶链反应的方法检测结直肠癌患者及结肠癌细胞株野生型ＨＣＴ一１１６　ｐ５３　和突变型ＨＣＴ—Ｉ１６　

ｐ５３　Ｉ／　中ｍｉＲ一２１４的表达情况，同时在结肠癌患者中检测ｐ５３的表达。结果ｍｉＲ一２１４在癌旁正常黏膜中的表　

达明显高于癌组织（Ｐ＝０．０２１），ｐ５３在癌旁正常黏膜中的表达明显低于癌组织；ｍｉＲ一２１４在ＨＣＴ一１１６　ｐ５３一细　

胞株中的表达显著高于ＨＣＴ一１１６　ｐ５３　（Ｐ＝０．０２８），与ｐ５３的表达情况相反；在结直肠癌组织中ｍｉＲ一２１４与　

ｐ５３无明显相关性（ｒ　＝一０．１５６，Ｐ＝０．４０９）。结论在结直肠癌的发生发展中ｍｉＲ一２１４可能通过调节ｐ５３发挥　

抑癌基因的功能，但尚未发现ｍｉＲ～２１４与ｐ５３存在明显相关性。　

【关键词】　结直肠癌；ｐ５３；ｍｉＲ一２１４　

结直肠癌是在全球范围内发病率和病死率均位居　

第三的人类主要的恶性肿瘤之一，平均每年新增病例　

１２余万，有７０余万患者死于此病…，可见结直肠癌严　

重威胁着人们的健康和生活。ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ是一类长约　

２２个核苷酸的小分子非编码ＲＮＡ，于１９９３年由ＬＥＥ　

等　首次发现。ｍｉＲＮＡｓ通过转录后水平调节ｍＲＮＡ　

的翻译或降解从而调节多种基因的表达。并且研究发　

现ｍｉＲＮＡｓ可参与调整多种细胞进程，如细胞扩增、凋　

miR—21在大肠癌中表达及临床意义

大肠癌是临床最常见的恶性肿瘤之一，在全世界范围内，大肠癌的发病率男女均处于恶性肿瘤的第3位，在我国，随着生活水平的不断提高，饮食习惯的改变，大肠癌的发病率呈上升态势，排在恶性肿瘤和致死因素的第4位，大肠癌是我国肿瘤患者死亡的主要原因之一。微小RNA是一种真核生物内源性小分子单链RNA，微小RNA分子通过翻译抑制或者其他形式的调节机制抑制靶基因的表达。目前，已发现多种微小RNA在大肠癌组织及大肠癌细胞系中异常表达，我们应用实时定量反转录聚合酶联反应技术，在大肠癌组织和对应正常大肠黏膜中进行miR-21的表达水平检测，并结合术后病理资料，分析miR-21与大肠癌临床病理因素的相关性，以其为大肠癌诊断和抗转移治疗提供新的线索。

资料与方法

2010年6月～2011年5月收治进展期大肠癌患者64例，手术切除的肿瘤组织，全部患者均经病理证实为进展期大肠癌，术前均未行放化疗，所以患者均取得知情同意，同时收集距癌灶>5cm正常肠黏膜组织作为正常对照。

试剂与仪器：微小RNA提取试剂盒及聚合RNA加尾试剂盒均为美国安边公司产品，逆转录试剂盒、实时荧光定量聚合酶联反应试剂盒为日本塔克拉公司产品，实时定量聚合酶联反应仪购自美国寇伯特公司。

方法：总RNA抽提取10mg大肠癌组织及对照正常黏膜组织，按照使用Ambion公司的微小RNA提取试剂说明书步骤提取总RNA。然后对RNA加尾，由于miRNAs是长约22核苷酸的短小片段RNA，常规聚合酶联反应无法设计出上下游引物。本实验中我们先对所有RNA的3’末端加聚苷腺酸尾巴，对其人为地增加长度。反转录过程中，所使用的引物3’端为一人为设计的序列，具体步骤参照Ambion公司的聚苷腺酸加尾试剂盒说明书。逆转录及荧光定量聚合酶联反应时，以u6管家基因做为内参，每个标本设3个复孔。取总RNA为模板，按照逆转录试剂盒说明书配反应体系，逆转录出互补DNA；然后按照实时荧光定量聚合酶联反应试剂盒说明书。对实时定量荧光聚合酶联反应的结果运用△△CT法进行分析。△CT=目的基因CT-内参照基因CT值。