一种可同时检测抗双链和单链DNA抗体的快速斑点免疫金渗滤试验
胶体金法的定义和分类
胶体金是一种常用的标记技术，是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术，有其独特的优点。
近年已在各种生物学研究中广泛使用。
在临床使用的免疫印迹技术几乎都使用其标记。
同时在流式、电镜、免疫、分子生物学以至生物芯片中都可能例用到。
1971年Faulk和Taytor将胶体金引入免疫化学，此后免疫胶体金技术作为一种新的免疫学方法，在生物医学各领域得到了日益广泛的应用。
目前在医学检验中的应用主要是免疫层析法(immunochromatogra-phy)和快速免疫金渗滤法(Do t-immuogold filtration assay DIGFA)，用于检测HBsAg、HCG和抗双链DNA抗体等，具有简单、快速、准确和无污染等优点。
免疫胶体金技术的基本原理：胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。
胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。
胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PHA、ConA 等。
根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。
胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。
吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷，与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。
用还原法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗粒。
这种球形的粒子对蛋白质有很强的吸附功能，可以与葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽缀合物等非共价结合，因而在基础研究和临床实验中成为非常有用的工具。
实验一 免疫层析快速诊断技术(医学免疫学)
人类医学 各 级 医 院 , 血 传染病（乙肝五项,HIV, SARS等）
站,CDC,防疫站,诊 标志物（AFP、肌钙蛋白、粪便血红蛋
断中心；家庭自检；白等）
商检系统；边检口 岸；公安系统.
女性妊娠
HCG(早孕)
毒品（吗啡,K粉,摇头丸,冰毒）
农牧业
畜牧兽医站, 商检 传染病（禽流感,链球菌等） 系统,边检口岸,农 病毒（烟草花叶病毒、犬细小病毒等） 牧类院系和研究所
阳性 阳性
阴性
临床意义：
1、孕妇妊娠1周后，尿中可出现较多HCG，均可 呈阳性（+）反应，达到妊娠早期诊断的目的
2、绒毛膜上皮癌、水泡状胎块和睾丸畸胎瘤患者 的尿中HCG可明显增高，故也可呈阳性（+）反应， 但结合临床可予以鉴别。
注意事项
1. 强阳性尿液中 HCG 含量较多 , 因此质控线可能不出现 或极浅淡 , 而仅在反应区显示淡紫色条带。 2. 应避免试纸条一端插入尿液过深或过浅 , 插入时间过长 或过短也会影响试验结果。
胶体金（Colloidal gold）是氯金酸（HAuCl4） 的水溶胶，氯金酸在还原剂的作用下，聚合
成特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为
一种稳定的胶体状态。
胶体金标记的原理：胶体金在碱性条件下带 负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电 吸引而形成牢固结合。
胶 体 金 标 记 技 术 （ Immunogold labeling technique） 是 以 胶 体 金 作 为 示 踪 标 记 物 应 用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。
实验一
胶体金试纸条检测技术
胶体金试纸条检测技术
【实验目的】
掌握双抗体夹心法测定尿 HCG 的原理、操作方法及结果判定方法。
HIV抗体筛查——斑点免疫胶体金快速试验
HIV抗体筛查——斑点免疫胶体金快速试验
【申请单】请完成申请单所要求项目
×××市人民医院检验申请单
姓名
性别年龄
门诊号住院号
诊断或症状
检验标本
检验目的
送检科室医师
送检日期年月日
【方法选择】
表12-1 HIV抗体筛查方法
方法ELISA法CLIA 快速检测（RT）
本次检查选择√（斑点免疫胶体金快速试验）
ELISA: enzyme linked immunosorbent assay 酶联免疫吸附实验
CLIA: chemiluminescent immunoassay 化学发光免疫分析法;
快速检测（RT）：①颗粒凝集试验（particle agglutination test ，PA）
②斑点EIA或称斑点ELISA（dot-EIA）；
③斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验；
④艾滋病唾液检测卡；
⑤其它快速筛查试验方法。
【材料准备】
1.人类免疫缺陷病毒（HIV 1/2）抗体检测试剂盒（胶体金法）
2.检测样品：全血/血清/血浆
【操作方法】
1.检测前仔细阅读说明书。
2.使用前将试剂盒、待测样本、质控品恢复室温后方可使用。
待一切准备后就绪之后再撕开试剂盒的包装铝箔袋。
3.加样：用加样吸管吸取血清或血浆样品，往试剂盒加样孔内垂直滴加一滴，然后立即。
斑点金免疫渗滤法检测血清抗精子抗体
斑点金免疫渗滤法检测血清抗精子抗体王虹玲;邵祝洪;胡建成;章新民【期刊名称】《免疫学杂志》【年(卷),期】2001(17)1【摘要】目的建立检测血清抗精子抗体的斑点金免疫渗滤法 (dot im munogold filtration assay,DIGFA)。
方法采用经 Sephadex G- 75 -抗人全血清柱亲和层析纯化的人精子抗原和胶体金标记的 SPA,根据免疫渗滤原理 ,建立抗精子抗体(ASAb)的斑点金免疫渗滤法检测法。
结果纯化的人精子抗原具有较好的特异性 ;斑点金免疫渗滤法与 EL ISA法比较 ,符合率为 97.7%。
特异性为 96 .2 % (TN/TN+ FP× 10 0 % ) ,敏感性为88.9% (TP/ TP+ FN× 10 0 % ) ,阳性预测值 84.2 % (TP/TP+ FP) ,阴性预测值 97.2 % (TN/ TN+ FN) .结论斑点金免疫渗滤法方法检测血清抗精子抗体有较好的特异性和敏感性 ,重复性好 ,试剂稳定 ,操作简便快速。
【总页数】2页(P64-65)【关键词】斑点金免疫渗滤法;人精子抗原;亲和层析;抗精子抗体【作者】王虹玲;邵祝洪;胡建成;章新民【作者单位】杭州医学高等专科学校病理学教研室;杭州市红十字会医院中心实验室【正文语种】中文【中图分类】R446.62;R446.61【相关文献】1.斑点金免疫渗滤试验检测不育者血清抗精子抗体 [J], 许国强;黄红莹;马远方;惠学志;白慧玲2.免疫胶体金渗滤斑点试验对抗精子抗体的检测 [J], 许国强;黄红莹;马远方;惠学志;白慧玲;赵粤萍;李秀敏;杜耀武3.斑点免疫金渗滤法检测血清抗结核分枝杆菌抗体 [J], 孙国忠;徐云4.斑点免疫胶体金渗滤法、免疫层析法联合酶联免疫法检测结核抗体诊断结核病的应用价值分析 [J], 杨小玉; 李青峰; 王冬梅5.斑点金免疫渗滤法检测MCTD患者血清中抗鸡卵核72000蛋白抗体的研究 [J], 颜丹;李燎;李雷激;陈德宇;赵家兰;卿晟;黄文才因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
邻位连接技术
Proximity Ligation Assayproximity ligation assay(邻位连接技术,PLA)：一种高灵敏度的蛋白质检测技术。
邻位连接技术(proximityligationassay,PLA)被建立。
该技术采用核酸适体(aptamer)或单/多克隆抗体-核酸复合物作为邻位连接探针(proximityprobes)。
当一对邻位探针同时识别同一个目标蛋白分子时，它们将在空间位置上相互临近，通过连接反应形成一段可扩增的DNA标签序列，该标签序列能够反映待测蛋白的种类及浓度。
该技术将对蛋白质的检测转变为对DNA核酸序列的检测，实现了特殊蛋白质的检测,定量及定位。
美国俄亥俄州立大学的研究人员近日开发出一种新技术，能同时观察细胞中的基因数量和蛋白表达。
此技术能够详细分析基因状态以及相应蛋白表达之间的关联，并更透彻地了解癌症及其他复杂疾病。
该成果发表在《神经肿瘤》（Neuro-Oncology）上。
这种新技术称为荧光原位基因蛋白分析（fluorescent in situ gene protein assay）。
它将传统的荧光原位杂交（FISH）与原位邻位连接分析（in situ proximity ligation assay，简称PLA）相结合。
PLA分析采用核酸适体（aptamer）或单/多克隆抗体-核酸复合物作为邻位连接探针。
当一对邻位探针同时识别同一个目标蛋白分子时，它们将在空间位置上相互临近，通过连接反应形成一段可扩增的DNA标签序列，该标签序列能够反映待测蛋白的种类及浓度。
文章的作者之一，俄亥俄州立大学的Arnab Chakravarti博士表示：“据我所知，这是目前第一个技术，能让我们了解同一细胞中的基因活性和相应蛋白表达。
了解肿瘤中的基因和蛋白表达变化，有助于我们了解是什么驱动了肿瘤行为。
”文章的通讯作者，亚拉巴马大学副教授Markus Bredel及其同事首先分析了固定的人胶质母细胞瘤细胞，然后分析了石蜡包埋的人胶质母细胞瘤组织。
风湿免疫科应知应会
风湿免疫科1.什么是风湿性疾病？*风湿性疾病(简称风湿病)是一组以内科治疗为主的肌肉骨骼系统疾病，包括弥漫性结缔组织病及各种原因引起的关节和关节周围软组织，包括肌肉、肌腱、韧带、滑囊等的疾病。
风湿(rheumatism)是指关节、关节周围组织、肌肉、骨出现的慢性疼痛。
3.弥漫性结缔组织病(简称结缔组织病，CTD)有哪些特点？**CTD除有风湿病的慢性病程、肌肉关节病变外，尚有下述特点:（1）属自身免疫病，自身免疫性是CTD的发病基础；（2）以血管和结缔组织慢性炎症为病理基础；（3）病变累及多个系统，临床个体差异甚大；（4）对糖皮质激素的治疗有一定反应。
4.CTD包括哪些疾病？**类风湿关节炎(RA)、系统性红斑狼疮(SLE)、原发性干燥综合征(pSS)、硬皮病(SD)、炎性肌病(多发性肌炎和皮肌炎)(PM-DM)、系统性坏死性血管炎等。
5.什么是自身抗体？*自身抗体是指抗自身组织、器官、细胞及细胞成分的抗体。
自身免疫性疾病中有许多自身抗体，其中最重要的是抗核抗体，另外有抗磷脂抗体、抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)、抗线粒体抗体(AMA)、抗内皮细胞抗体、类风湿因子等。
6.什么是抗核抗体(ANA)？**ANA传统定义(狭义定义)是指抗细胞核抗原成分的自身抗体的总称，这是一组针对细胞核内DNA、RNA、蛋白质、脂类、酶类或这些物质的分子复合物的抗体。
目前对ANA的理解已不局限于细胞核成分，而是指抗核酸和核蛋白抗体的总称。
故ANA的现代定义(广义定义)是指抗细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。
7.ANA的常规检测方法是什么？*间接免疫荧光法(IIF)是ANA检测首选方法，所用底物片是(核质丰富的)培养细胞片(如HEp-2细胞：人喉癌上皮细胞等)或动物器官组织(鼠肝、鼠肾)冷冻切片。
9.临床常规IIF检测ANA，常见的荧光染色模型有哪些？**（1）均质型(H)：又称弥散型，此型多与抗组蛋白抗体、抗ds-DNA抗体和抗核小体抗体有关；（2）斑点型(S)：又称核颗粒型、核斑块型，此型与抗可溶性核抗原(ENA)抗体有关；（3）核膜型(M)：又称周边型，此型与抗DNA抗体、抗核包膜蛋白抗体有关；（4）核仁型：在硬皮病中较为多见；（5）着丝点型：又称散在斑点型；（6）胞质型：与抗线粒体抗体、抗核糖体抗体及抗Jo-1抗体等有关。
筛查抗核抗体的斑点金免疫渗滤法
筛查抗核抗体的斑点金免疫渗滤法
钟本土;王虹玲;赵卫平
【期刊名称】《临床检验杂志》
【年(卷),期】2002(020)006
【摘要】@@ 根据免疫渗滤的原理,采用金标记SPA,建立了检测抗核抗体(antinuclear antibody,ANA)的斑点金免疫渗滤法(dot immunogold filtration assay,DIGFA),并与间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence,IIF)进行比较,以期建立一种简便、快速、可靠的、具有临床应用价值的检测血清ANA的方法.【总页数】2页(P332-332,336)
【作者】钟本土;王虹玲;赵卫平
【作者单位】杭州师范学院医学院病理解剖学教研室,杭州,310012;杭州师范学院医学院病理解剖学教研室,杭州,310012;杭州师范学院医学院病理解剖学教研室,杭州,310012
【正文语种】中文
【中图分类】R446.6
【相关文献】
1.斑点酶标法与斑点金标免疫渗滤法检测牛血吸虫病初探 [J], 朱贞友;陈世菊
2.金标免疫渗滤斑点试验在TORCH筛查中的应用 [J], 余凤珠; 成珍珍
3.斑点免疫胶体金渗滤法、免疫层析法联合酶联免疫法检测结核抗体诊断结核病的应用价值分析 [J], 杨小玉; 李青峰; 王冬梅
4.斑点免疫结合试验斑点免疫金渗滤试验和培养法用于解脲支原体检测的对比研究
[J], 何云志;郭秀军;张国威
5.金标抗rSjc26GST多克隆抗体斑点免疫金渗滤法检测血吸虫循环抗原的研究 [J], 张素娥;汤益;施晓华;蒋健敏;屠乐鸣;刘述先
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
3种方法对比检测抗双链DNA抗体
为 ９ ． 。结 论 ７９
Ｅ ＩＡ 法 与 金 标 准 方 法 相 比 ， 果 在 敏 感 性 、 异 性 及 准 确 度 方 面 经 统 计 学 处 理 ＬＳ 结 特
・
８８ ・ ２
国 பைடு நூலகம்
医学杂志２０ ９ ０８年 月第２ 卷第 ９期 Ｉ ＪＬｂＭｅ ，ｅｔ ｅ ０８Ｖ １ ９Ｎ ． ９ ｍ ａ ｄＳｐｅ ｒ ０ ，ｏ． ， ｏ９ ｍｂ ２ ２
・
经 验 交 流
・
３种 方 法对 比检 测抗双 链 Ｄ ＮＡ 抗体
张 卫 星 罗德 梅 薛黎
【 要】 目 的 比较 检 测 抗 双 链 Ｄ 摘 ＮＡ 抗 体 三 种 方 法 的 灵 敏 度 及 特 异 性 。 方 法 分 别 用 Ｅ ＩＡ、Ｉ ＬＳ Ｉ Ｆ及 Ｄ Ｇ Ａ 三 种 方 法 同 时 检 测 收 集 到 的 ３ ５例 血 清 样 品 。结 果 金 标 准 方 法 Ｉ ＩＦ ９ Ｉ Ｆ敏 感 性
告如下。
值 为 ９ ．４ （ １ ／ ２ ） ４ １ ７ １ ４ ，阴 性 预 测 值 ９ ．６ （ ７ ／ ７ ） ９ ２０２１ 。
Ｅ ＩＡ 法 与 Ｉ ＬＳ Ｉ 定 性 实验 结 果 比较 差 异 无 统 计 学 意 义 （ Ｆ法 Ｙ一
３ １ ５， ． ２ Ｐ＞ ０ ０ ） ．５ 。
性 为 ９ ． （ ７ ／ ７ ） 准 确 度 为 ９ ． （ ８ ／ ９ ） 阳 性 预 测 ７５ ２ ０ ２ ７ ， ７９ ３７３５ ，
度 强 等优 点 ； Ｉ Ｆ 法 敏 感 性 较 低 。 为 比较 Ｉ ＤＧ Ａ Ｉ Ｆ法 与 Ｄ ＧＦ Ｉ Ａ 法 、 Ｌ Ｓ 法 检 测 抗 ｄ— ＮＡ 抗 体 的 异 同 ， 组 对 本 院 ２ ０ Ｅ ＩＡ ｓ Ｄ 本 ０ ５年 ２ Ｏ月 ３ ５例 Ｓ Ｅ 患者 血 清 标 本 同时 进 行 ３种 方法 检测 ， —１ ９ Ｌ 报
快速斑点免疫渗滤法检测结核抗体
快速斑点免疫渗滤法检测结核抗体
王惠峰;顾其龙;胡忠义
【期刊名称】《临床肺科杂志》
【年(卷),期】1999(000)002
【摘要】快速斑点金渗滤法检测血清结核抗体对结核病的诊断及病情有较大意义。
经典的结核分支杆菌涂片及培养操作烦琐,阳性率偏低,且需时较久,为寻求早期、特异性诊断方法,我们应用快速斑点金渗滤法检测血清结核抗体,并与涂片和培养进行比较,结果如下。
1 材料和方法 1.1 试剂:快速斑点金渗滤法测定结核抗体试剂盒购自B.J.公司(批号970804、980102)。
1.2 血清:80份活动性肺结核病人血清取自
临床确
【总页数】1页(P146-146)
【作者】王惠峰;顾其龙;胡忠义
【作者单位】上海市奉贤县古华医院;上海结核病防治中心
201400;201400;200031
【正文语种】中文
【中图分类】R446.6
【相关文献】
1.金免疫斑点渗滤试验快速检测抗结核抗体对结核病诊断的价值 [J], 李晓明;庄玉辉
2.斑点免疫金渗滤法检测结核抗体在老年肺结核诊断中的应用价值 [J], 梁庆华
3.斑点金免疫渗滤法检测结核分枝杆菌抗体在肺结核诊断中的应用 [J], 张国庆;付玉军;田巧
4.快速斑点免疫金渗滤法检测结核杆菌特异性抗体 [J], 樊维;隋达伟;等
5.斑点免疫胶体金渗滤法、免疫层析法联合酶联免疫法检测结核抗体诊断结核病的应用价值分析 [J], 杨小玉; 李青峰; 王冬梅
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
斑点金免疫渗滤试验检测不育者血清抗精子抗体
斑点金免疫渗滤试验检测不育者血清抗精子抗体
许国强;黄红莹;马远方;惠学志;白慧玲
【期刊名称】《检验医学》
【年(卷),期】2001(016)004
【摘要】目的研究一种快速鉴定抗精子抗体的新方法的临床意义。
方法用化学试剂提纯精子抗原，将其结合于硝酸纤维素膜上；以胶体金颗粒结合的羊抗人lgG 作为标记抗体，以斑点金免疫渗滤试验(Dot-immunogold filtration
assay,DIGFA)检测人血清抗精子抗体。
结果抗原抗体通过渗滤在膜上进行反应，10 min内即可用肉眼观察结果，在289例临床血清标本的检测中，阳性率为21%，与酶联免疫吸附试验(ELISA)的结果基本相符。
结论斑点金免疫渗滤试验可快速测定抗精子抗体，具有推广使用的价值。
【总页数】2页(P239-240)
【作者】许国强;黄红莹;马远方;惠学志;白慧玲
【作者单位】河南大学医学院,;河南大学医学院,;河南大学医学院,;河南大学医学院,;河南大学医学院,
【正文语种】中文
【中图分类】R392.11
【相关文献】
1.斑点金免疫渗滤试验检测血清中抗-HAV抗体 [J], 刘瑛;高红丽;徐德忠;吴玮;闫永平;张景霞
2.斑点金免疫渗滤试验检测人沙门菌血清抗体 [J], 储迅涛;何盛人
3.生物素-亲合素斑点免疫金渗滤试验检测血清中登革病毒4型抗原 [J], 姚海军;段馥琴;曹虹;刘久来
4.斑点金免疫渗滤法检测血清抗精子抗体 [J], 王虹玲;邵祝洪;胡建成;章新民
5.斑点免疫金渗滤试验检测血清中抗登革病毒IgM抗体的研究 [J], 姚海军;段馥琴;曹虹
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
一种可同时检测抗双链和单链DNA抗体的快速斑点免疫金渗
滤试验
兰小鹏;涂向东;黄俏佳;冯修高;唐玉钗;朱忠勇;周明宣;陈学香
【期刊名称】《中国免疫学杂志》
【年(卷),期】1999(000)005
【摘要】目的:建立一种可同时检测抗双链DNA(ds-DNA)和单链DNA(ss-DNA)抗体的快速斑点免疫金渗滤试验(DIGFA).方法:将ds-DNA和ss-DNA抗原结合在同一检测盒内,采用胶体金标记和快速膜斑点渗滤技术,同时检测抗ds-DNA和ss-DNA抗体.结果:DIGFA既可同步又可区别检测两种DNA抗体,且检测ds-DNA抗体的敏感性优于酶联免疫吸附法(ELISA).结论:DIGFA简便、快速、可靠,是一种实用的DNA抗体检测方法.
【总页数】1页(P214)
【作者】兰小鹏;涂向东;黄俏佳;冯修高;唐玉钗;朱忠勇;周明宣;陈学香
【作者单位】南京军区福州总医院全军医学检验中心,福州350001;南京军区福州总医院全军医学检验中心,福州350001;南京军区福州总医院全军医学检验中心,福州350001;南京军区福州总医院全军医学检验中心,福州350001;南京军区福州总医院全军医学检验中心,福州350001;南京军区福州总医院全军医学检验中心,福州350001;福州总医院内科,福州350001;福州总医院内科,福州350001
【正文语种】中文
【中图分类】R446.62
【相关文献】
1.利用酵母重组SSB抗原建立快速斑点免疫金渗滤法检测抗SSB抗体 [J], 徐秀云;杨湘越;兰小鹏
2.用快速斑点免疫金渗滤法检测抗SSA抗体 [J], 吴文冰;兰小鹏;杨湘越;唐玉钗
3.斑点金免疫渗滤试验同步检测抗斯氏狸殖吸虫IgM和IgG抗体的研究 [J], 陈文碧;王光西;张锡林;佘俊萍;杨兴友;湛蜀燕;刘建军
4.斑点金免疫渗滤试验检测血清中抗-HAV抗体 [J], 刘瑛;高红丽;徐德忠;吴玮;闫永平;张景霞
5.斑点金免疫渗滤试验快速检测抗甲型肝炎病毒IgM抗体 [J], 肖乐义;阎小君
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。