乙肝病毒基因型研究现状
乙肝病毒基因型研究现状
摘要】 本文通过国内外文献的阅读分析，对乙肝病毒基因型发现及发展，基因型分型测试主要方法，病毒基因的分布区域，变异与临床表现，做了简要综述。
【关键词】乙肝病毒 病毒基因 分型 基因分布
【中图分类号】R512.6+2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）17-0112-02
1、乙肝病毒基因型的发现及发展
1965年Blumberg等在澳大利亚土著人血清中首次发现乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B virus surface antigen，HBsAg)，简称“澳抗”。由于乙肝病毒基因变异，导致其编码抗原的改变，形成了不同的血清型。
根据HBV的S蛋白可确定HBsAg含有5种不同的抗原表位，分别是a、d、y、w、r，其中a属特异性的共同抗原决定簇。依次分为不同的血清型，血清亚型。但血清型研究对乙肝病毒的致病性、毒力、病毒复制无明显关系，遂人们开始从HBV基因本身开始寻找病毒的分类。
1988年，Okamoto等[1]通过对18株不同血清型的HBVDNA全序列分析，发现血清型的分类并不能真正反映基因组的差异，他们认为全基因序列差异大于或等于8%则可定为不同的基因型，而同一基因型的HBV的序列的≤5.6％，并将这18株分为4种基因型：A型、B基因型、C基因型、D型。后分别在1992、2000、2002年，Norder、Stuyver 、Arauz-Ruiz根据以上标准发现了新的基因型：E、F G、H型，进一步完善了HBV基因分型。
2、乙肝病毒基因型分型主要方法
2.1全基因测序法
通过HBV全基因测序，根据基因型之间的核苷酸序列的差异≥8%为界限分析。此法操作复杂、费用高，不适合大规模的临床和流行病学研究。
2.2HBV基因型特异性线型探针检测法
Swenson[2]等依A-F基因型的保守序列设计了18种型特异性探针与HBV S基因的PCR产物进行杂交实现分型。操作简单，应用方便，特异性与探针设计有很大关系。
2.3HBV基因型特异性引物PCR
Naito等[3]依A-F基因型中特异性保守序列设计引物并进行套式PCR。首先用共用引物扩增S开放读码区，再加入型特异性引物的混合物进行第二PCR，这样扩增出不同长度的核苷酸片段，从而达到分型的目的。操作简单，易于大规模检测。
2.4微板核酸分子微板核酸分子杂交一ELlSA
该方法通过各型探针包被微孔板，与待测核酸PCR扩增产物杂交，然后通过酶联免疫显色判定结果从而确定基因型。该方法分型准确可靠、操作简单、可大规模进行HBV基因分型
3、乙肝病毒基因型地理分布
经过世界各地乙肝病毒基因型分析提示：A型主要在西、北欧及北美洲和非洲中部流行；B基因型则主要发现于中国、印度尼西亚及越南，它是变异最多的一种基因型；C基因型则主要流行于东亚，如中国、韩国、日本、玻里尼西亚和越南、泰国；D型在全世界都有发现，但主要在地中海地区和中东地区流行，并延伸到印度；E型至今则只在非洲有报道；F型发现在美国及玻里尼西亚、委内瑞拉等地；G型见于美国、法国等地；H型发现于尼加拉瓜和美国洛杉矶等地[5]。我国部分省市慢性乙肝患者的HBV基因型检测表明，约60％为B基因型，30％为C基因型，另有少数为D基因型和BC基因型混合型感染。
4、乙肝病毒基因型与病毒复制和变异的关系
Kobayashi[6]研究报道，C基因型HBV的HBeAg阳性率高于B基因型和A型，而B基因型的HBeAg阴性率高于C基因型，提示C基因型HBV复制较活跃，易形成持续病毒血症，不易发生e系统血清转换。日本学者Orito等和我国台湾学者Kao等在研究B、C两型HBV时，发现C基因型HBV血清DNA水平显著高于B基因型。
可见HBV基因型与病毒复制变异存在相关性。A、F型HBV毒株nt1858位为碱基C，能与nt1896位碱基G形成稳定的茎袢结构，能阻止nt1896位G→A的突变，而B、C、D、E型的HBVDNA的nt1858位为T，易发生nt1896位终止密码，从而导致e抗原不表达。
5、乙肝病毒基因型和变异与临床的关系
在感染HBV途径方面中西方有所不同。西方以性传播和经静脉注射毒品为主；东方以母婴传播为主。Michielsen et al[7]认为，母婴传播的危险性取决于HBV复制水平。HBsAg和HBeAg均阳性的母亲有80-90%的母婴传播危险性，约有85％的婴儿日后成为慢性HBV携带者；HBsAg阳性和HBeAg阴性的母亲仅有2-15%的母婴传播危险性，且后代很少成为慢HBV携带者。
在研究HBV基因型与肝病关系方面国内外学者作了大量的研究。2003年，日本长崎国立医学中心的Lind[8]通过分析19例急性乙肝患者的基因型，发现其中18例为C基因型，仅1例为B基因型，认为日本长崎地区急性乙肝患者的HBV基因型主要为C基因型。2002年，王永忠[9]等人用巢式PCR加测序法检测了常州地区146例不同乙肝患者的HBV基因型，结果只发现B基因型(34.9%)和C基因型（65.1％），B、C两型的ALT、HBV-DNA和HBeAg阳性率均无显著性差异，肝硬化和肝癌患者的C基因型比例（24/28）明显高于慢性乙肝患者（61/104）（P<0.01），接受拉米呋啶治疗48周后。C基因型的反跳率（14/45）显著低于B基因型（18/23）（P<0.001），认为C基因型与肝硬化和肝癌关系密切，拉米呋啶对C基因型患者的疗效强于B基因型。
参考文献
[1] Okamoto H, Tsuda F, Tanaka T et al. Typing hepatitis B virus by homology in nucleotide
sequence comparison of surface subtype. Gen Virol, 1988, 69.
[2] Swenson PD, Van Geyt C, Alexander ER, et al. Hepatitis B Virus Genotypes and HBsAg Subtypes
in Refugees and Injection Drug Users in the United States Determined by LiPA and Monoclonal EIA.
J Med Virol 2001; 64(3).
[3] Naito H, Ha yahi S, Abe K. Rapid and specific genotyping system for hepatitis B virus
corresponding to six major genotypes by PCR using type-specific primers J. J Clin Microbiol,
2001,39(1).
[4] 王虹，王省良，万成松，等. 采用微板核酸杂交-ELISA 技术进 行 HBV DNA 基因型的研究.
中华微生物和免疫学杂志.2001，21（2).
[5] Kao JH, Chen PJ, and Lai MY, et al. Hepatitis B genotypes correlate with clinical outcomes in
patients with chronic hepatitis B. Gastroenterology, 2000, 118.
[6] Kobayashi M, Arase Y, Ikeda K, et al. Viral genotypes and response to interferon in patients with
acute prolonged hepatitis B virus infection of adulthood in Japan J Med Virol 2002; 68(4).
[7] De Groote K, Van Damme P, Deprettere A, Michielsen P. Prevention of vertical transmission of
hepatitis B virus infection. Is there a standard policy in Flanders (Belgium) Acta Gastroenterol Belg 1997; 60.
[8] Lin ZM, Yatsuhashi H, Daikoku M, et al. Hepatitis B virus of genotype C persistence after
recovery from acute hepatitis B virus infection in Japan. Hepatol Res 2003; 25(3).
[9] 王永忠，周国平，李夏亭，等. 乙型肝炎病毒基因分型及临床应用研究. 中华实验和临床病毒学杂志. 2002; 16(4).
乙型肝炎病毒基因型及其临床意义
公共卫生与临床医学 ２０１０ ｆ ６ １ ｊＬＪ］Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｖｏｌｕｍｅ ６，Ｎｕｍｂｅｒ １．Ｆｅｂ ２０１０ ．６５． 乙型肝炎病毒基因型及其临床意义 郁国强 摘要：乙型肝炎是全球性传染病，严重危害人类的健康，乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）基因型是影响ＨＢＶ感 染者预后的重要原因之一，因此作者就ＨＢＶ基因型研究概况及其临床意义的相关性进行扼要的综述。 关键词：乙型肝炎；乙型肝炎病毒；基因型；疾病预后 中图分类号：Ｒ ５１２．６ ２ 文献标识码：Ａ Ｖｉｒａｌ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ ＹＵ Ｇｕｏ—ｑｉａｎｇ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｄｉｓｅａｓｅ，Ｇｕａｎｇｘｉ Ｌｉｕｚｈｏｕ Ｌｉｕｔｉｅ ｃｅｎｔｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｌｉｕｚｈｏｕ ５４５００７，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ ｉｓ ｔｈｅ ｇｌｏｂａｌ ｃｏｎｔａｇｉｏｕｓ ｄｉｓｅａｓｅ，ａｎｄ ｓｅｒｉｏｕｓｌｙ ｈａｚａｒｄ ｔｈｅ ｐｅｏｐｌｅ’Ｓ ｈｅａｌｔｈ．Ｔｈｅ ｖｉｒａｌ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ ｉｓ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｆａｃｔｏｒｓ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ＨＢＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ． Ｓｏ ｔｈｅ ａｕｔｈｏｒ ｂｒｉｅｆｌｙ ｒｅｖｉｅｗｅｄ ｔｈｅ ｓｔａｔｕｓ ｏｆ ＨＢＶ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｔｙｐｅ Ｂ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ；ＨＢＶ；ｇｅｎｏｔｙｐｅ；ｄｉｓｅａｓｅ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ 乙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ，ＨＢＶ）感染是 全球性传染病，严重危害人类的健康，是重要的公 共卫生问题。有研究认为…，ＨＢＶ基因型是影响 ＨＢＶ感染者预后的熏要原因之一。目前，全世界大 约３．５亿ＨＢＶ携带者中有１亿人是中国人…，其中 ７％～３０％被认为有ＨＢＶ变异体感染所致 Ｊ，因此可 以说ＨＢＶ感染是危害国人健康和造成国民经济损 失最严重的一类疾病。ＨＢＶ的不同基因型，甚至同 一基因型的不同亚型在毒力和临床表现上也有区 别，是影响病情进展、预后及对治疗反应的重要因 素。ＨＢＶ基因型的差异是病毒变异的结果，目前发 现的８种ＨＢＶ基因型（即Ａ、Ｂ、ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、 Ｇ、Ｈ）可以呈现一 定的地理区域性分布特征 Ｊ，我 国北方以Ｃ‘型为主，南方以Ｂ型为主，Ｄ型一般见 于西藏、新疆、宁夏等少数民族地区 Ｊ。ＨＢＶ基因 型与其自然病史、病毒复制、肝病的严重程度，抗 病毒药物耐药性的发生及病毒变异等已为大家所关 注。本文就ＨＢＶ基因型研究概况及临床意义的相 关性研究作～综述。 收稿日期：２００９—０８—１０；修回日期：２００９ ０９—２５ 作者单位：广西柳州市柳州铁路中心医院感染科，』一西柳州５４５００７ 作者简介：郁国强（１９６４．），男（汉族），江苏省无锡市人；大学本科 学历，学士学位，副主任医师，科主任；右江民族医学院和南方医科 大学兼职教授，柳州Ｉ市医疗事故鉴定 家组成员；兼广西医学会感染病 学会委员、Ｊ一西柳州市感染病学会副主任委员；受聘《世界感染杂志》 第三届编辑委员会委员：发表论文２７篇，先后主持『订级科研项目２项， 获柳州Ｉ市科技进步 ｉ等奖１项；先后获铁道部抗击非典优秀共产党员、 柳州市卫生系统优秀共产党员；被列为柳州市ｌ’１一百千”优秀人才侯选 人．主要研究方向：感染 陛疾病的诊治。 １ ＨＢＶ基因型及临床意义 冰专 稿：＃
四川部分地区乙型肝炎病毒基因分型分析
院临床杂志２００８年１１月第５卷第６期
四川部分地区乙型肝炎病毒基因分型分析
邹立新 ，杜 琼 ，黄桂香 ，刘小琦 ，郭 勇 ，杨 洋。
（１．四川省达州市中心医院检验科，四川达９’１＂１ ６３５０００；２．四川省人民医院检验科，四川成都６１００７２； ３．川北医学院医学检验系，四川南充６４１０００；４．四川省乐山市人民医院检验科，四川乐山６１４０００） ６３
【摘要】 目的 了解四川部分地区乙肝病毒（ＨＢＶ）基因型分布情况。方法选择３９０例经荧光ＰＣＲ法定量ＨＢＶ— ＤＮＡ含量＞１０４ ｃ－ｏｐｉｅｓ／ｍｌ的感染者血清，采用聚合酶链反应一酶联免疫吸附试验（ＰＣＲ—ＥＬＩＳＡ）法检测ＨＢＶ基因型。结 果３９０例患者中Ｂ型ｌ８６例（４７．７％），ｃ型１４２例（３６．４％），ＢＣ混合型５４例（１３．８％），Ａ型３例（０．７ｃＡ），５倒测序待
定一ｃ型ＩｔＢ￣一ＤＮＡ水平和ＨＢｅＡｇ阳性率分另１】为（７．５９±１．１８）ｌｏｇ值和７５．５８％，明显高于Ｂ型的（５．３６±１．１Ｏ）ｌｏｇ值和 ４５．９０％（Ｐ＜０．０１）；ｃ型Ａ１．ｒｒ、ＡＳＴ、ＴＢＩＩ 的水平均高于Ｂ型（Ｐ＜０．０５）？结论 四川部分地区乙肝病毒基因型以Ｂ、
ｃ型为主，Ｂ型占优势，Ｃ型次之 【关键词】 肝炎病毒；乙型；基因型；分布；临床意义 【中图分类号】Ｒ４４６．１；Ｒ５ｌ２．６ ２ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１６７２￣１７０（２００８）０６－００６３－０２
Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｉｎ ｓｏｍｅ ａｒｅａｓ ｏｆ Ｓｉ・
ｃｈｕａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ＺＯＵ Ｌｉ． ｉ，ｊ ，ＤＵ Ｑｉｏｎｇ。ＨＵＡＮＧ Ｇｕｉ—ｘｉａｎｇ，ｅｔ ａ１． （￣￣Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｄａｚｈｏｕ
乙型肝炎病毒研究进展
国际医药卫生导报２００７年第１３卷第０７期（半月刊）
乙型肝炎病毒研究进展
丁海明庄俊华
广东省中医院检验科 广东广州 ５１０１０５
关键词 乙型肝炎病毒 基因变异 流行病学分析
中图分类号：Ｒ５１ ２．６ 文献标识码：Ａ 文章编号：１ ００７－１ ２４ ５（２ ００７）０７－０１１ Ｏ一０５
乙型肝炎病毒（ＨＢＹ）属嗜肝ＤＮＡ病毒，感染乙 型肝炎病毒不仅可引起急性肝炎，而且还可导致慢性肝
炎、肝硬化、肝癌。在世界各国均有流行，我国属高流行 区［ 。椐统计，全球现有２０多亿人感染过ＨＢＶ，其中
有３．５亿人为慢性ＨＢＶ携带者，我国有１．２亿［２，３ｌ。ＨＢＶ
是目前发现最小的ＤＮＡ病毒，其基因组结构独特而精密，
由不完全的环状双链ＤＮＡ组成。它的负链约有３２００个碱
基，包括４个开放读码框架（ＯＲＦ），即ｓ区、Ｃ区、Ｐ区和
ｘ区。ＨＢＶ复制的特点是：肝细胞核内有稳定的共价闭合
环状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）存在；有一个逆转录步骤。自１９７９年
Ｇａｌｉｂｅｒｔ等第１次测定出ＨＢＶ全基因组序列以来，对ＨＢＶ 的认识愈加深入，在已发表并收录入基因库的１６０余分离
株全序列中，还未发现两个是完全相同的。１ ９８８年 Ｏｋａｍｏｔｏ等基于ＨＢＶ基因组的差异程度提出了基因型的概
念。近年的国内外众多学者对ＨＢＶ进行了深入研究，ＨＢＶ 基因型与ＨＢＶ流行病学特点、乙型肝炎的治疗及预后关系
密切，本文就近年来ＨＢＶ的最新研究作一综述。
１ ＨＢ￣的结构与变异的关系
ＩＩＢＶ是目前人类感染的最小的双链ＤＮＡ病毒，有不同
的变异株，但每个病毒株的Ｌ（一）链均含有４个开放读码
框，分别是Ｓ、Ｃ、Ｐ、Ｘ区。不同的ＨＢＶ基因型可能代表
着ＨＢＶ变异及复制能力的不同。ＨＢＶ的复制要以ｍＲＮＡ为
模板合成负链ＤＮＡ，参与此反应的ＤＮＡ聚合酶缺乏校对活
性，所以ＨＢＶ的变异很常见。此外，ＨＢＶ在体内受到机体 免疫和抗病毒治疗的双重压力，基因突变也是适应性的结
山西省乙型肝炎病毒基因型分布及临床相关性研究
医学研究生学报２０１３年１０月第２６卷第１０期ＪＭｅｄ Ｐｏｓｔｇｒａ Ｙｏ１． ． Ｑ：Ｑ ｅｒ Ｑ ・ｌｌ１７・
论著摘要
山西省乙型肝炎病毒基因型分布及临床相关性研究
郭晓霞，叶永安，王效红，郭静，梁瑞敏
【关键词】 乙型肝炎病毒；基因型；分布
【中图分类号】Ｒ５１２．６ ［文献标志码】Ａ ［文章编号】１００８－８１９９（２０１３）１０－１１１７－０２
乙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ，ＨＢＶ）感染后，
机体对病毒的清除能力以及感染后疾病的转归在很
大程度上取决于个体间基因组的差异和病毒基因型
的差异…。根据ＨＢＶ全基因组序列的差异，ＨＢＶ分
为８种主要基因型（Ａ～Ｈ），在全世界呈地域性分
布 －３１。ＨＢＶ基因型与ＨＢＶ传播方式、疾病进展、预
后及抗病毒治疗效果有关 。不同ＨＢＶ基因型的临
床特点受到关注。本研究对山西省６８０例ＨＢＶ感染
者的ＨＢＶ基因型与临床特点进行初步分析。
１资料与方法
１．１ 研究对象６８０例血清标本均采自２０１０年９
月至２０１１年７月山西省中医院门诊及住院的ＨＢＶ
感染患者，病史均超过６个月。其荧光定量ＰＣＲ检
测ＨＢＶ．ＤＮＡ均为阳性。所有患者均符合２００５年
１２月中华医学会肝病学分会、中华医学会感染病分
会《慢性乙型肝炎防治指南》的诊断标准，均排除
甲、丙、丁、戊型肝炎病毒感染，排除酒精性肝病患
者。所有标本为新鲜分离血清，一７０ ｃ【＝保存待测。
１．２丙氨酸氨基转移酶（ａｌａｎｉｎｅ ａｍｉｎｏｆｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）检
测采用美国Ｂｅｃｋｍａｎ ＤｘＣ８００全自动生化仪检测。
１．３ Ｉ－ＩＢＶ标志物检测 采用Ｃｈｅｍｃｌｉｎ６００全自动
化学发光仪检测，乙型肝炎病毒表面抗原、ｅ抗原试
剂盒购自北京科美东雅生物技术有限公司。
１．４ ＨＢＶＤＮＡ定量检测 采用ＡＢＩ７３００荧光定量
ＰＣＲ仪检测，乙肝病毒核酸扩增荧光检测试剂盒购
乙肝疫苗的研究现状
乙肝疫苗的研究现状
1.乙型肝炎的感染流行和预防
我国是乙型肝炎病毒感染的高流行区,几次大规模的血清流行病学调查显示,我国乙肝表面抗原携带率平均约为10%,全国约有1 亿以上人口为无症状乙肝病毒携带者;每年报告的急性肝炎病例约270 万,其中10%~ 30%为急性乙肝病例;估计现有慢性肝炎约1200万例；每年死于肝病者不下30万例,其中半数为原发性肝癌,其中约有80%是由乙肝病毒感染引起的;我国育龄妇女HBsAg
阳性率为7%,按其HBV围产传播发生率为40%推算,每年约有60万新生儿成为HBV携带者,其中1/4最终可能发展成慢性肝病, 包括肝硬化和肝癌;乙型肝炎病毒感染已成为我国最严重的公共卫生问题之一;
目前尚无针对乙型肝炎的有效药品,疫苗接种是预防乙型肝炎最有效、最经济的方法,也是降低继发性肝硬化和肝癌的有效策略;早在1991 年我国就颁布了5全国实施乙肝疫苗免疫接种规程,决定从1992年1月1日起在全国推行乙型肝炎疫苗免疫接种工作,将乙肝疫苗免疫接种纳入计划免疫管理;自90 年代以来,实施乙肝疫苗免疫接种已成为中国控制乙肝的主要对策;实施以全体新生儿免疫为主,先城市,后农村,逐步纳入计划免疫,以达到在中国经过两代人的努力,使人群乙型肝炎表面抗原携带率降至1%以下;
2．乙型肝炎疫苗的种类
血原性乙肝疫苗
用高度纯化的乙肝表面抗原颗粒,以1∶2 000福尔马林灭活或以60℃10 h加热灭活的疫苗,是第一代乙肝疫苗;
20 世纪初开始使用乙肝患者表面抗原阳性血清制备乙肝疫苗来预防乙肝病毒感染,1981年美国Merck公司研制成功了第一代乙肝疫苗,开创了病毒尚不能在实验室繁殖的情况下制备疫苗的先例;1983年中国血源乙肝疫苗也通过研究于1985年正式批准进行大量生产;血源乙肝疫苗安全有效,十几年里,为预防乙肝病毒的传播做出了积极贡献;但这种血原性疫苗存在一些问题,如血源有限,带有一定的潜在性危险等;特别是近年来艾滋病流行,血液制品易受HIV 污染,致使乙肝血原性疫苗的使用在一些国家受到限制;然而乙肝血原性疫苗的生产使用说明,乙肝表面抗原的主要蛋白可以诱生良好的保护性抗体,使人免疫乙肝病毒的侵袭, 这一事实为研制乙肝第二代疫苗奠定了良好的基础;
核苷类药物抗乙肝病毒耐药性研究现状
垄堡 垄塑曼 ｃＨＩＮＦＳＦ ＣｏＭＭ【ＪＮｆｎ ０ｏＣＴ０ ｓ 武文慧 李晓军 曾峥 １ １６０３１大连市妇产医院 １ １６６２０珍奥集团股份有限公司 核苷类药物抗乙肝病毒耐药性研究现状 摘要核苷类药物如拉米夫定、阿德福 韦、恩替卡韦等临床用于抗ＨＢＶ。从临 床中耐药性出现的现状、核苷类药物与 ＨＢＶ相互作用机制以及抗ＨＢＶ药物联 合治疗等方面，对研究现状进行综述。 关键词核苷类药物 慢性乙型肝炎 耐药性联合用药 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７—６１４ｘ ２０１０．２７．００４ 核苷类药物临床耐药现状 抗乙肝病毒核苷类药物分为三类，即 Ｌ一核苷（拉米夫定、替比夫定、克拉夫定 和恩曲卡滨等）、无环磷酸盐化合物（阿 德福韦酯和替诺福韦）和环戊 烯（恩 替卡韦）。 拉米夫定（ＬＶＤ）：长期服用ＬＶＤ会 导致耐药性产生，且随着用药时问的延 长，耐药比例也会随之增加。ＬＶＤ耐药 相关性变异主要发生在ＨＢＶ—ＤＮＡ聚合 酶ｌｉｔ区的ＹＭＤＤ基序，最常见的类型为 Ｍ２０４Ｖ或Ｍ２０４Ｉ，并经常伴随上游Ｂ区的 Ｌ１８０Ｍ变异。 阿德福韦酯（ＡＤＶ）：ＡＤＶ的耐药主 要出现在Ｂ和Ｄ基因型，主要是ＤＮＡ聚 合酶基因的点突变（分别是Ａ１８１Ｖ和 Ｎ２３６Ｔ），治疗ＨＢｅＡｇ阴性慢性乙型肝炎 耐药率分别为０．３％、３％、６％、１８％和 ２９％。ＡＤＶ具有肾毒性，有肾功能不全 的患者应酌情减量。 恩替卡韦（ＥＴＶ）：ＥＴＶ长期治疗的不 良反应有待进一步监测。 替比夫定：是Ｌ一核苷类似物，耐药 突变位点主要是Ｍ２０４Ｉ，治疗ＨＢｅＡｇ阳 性慢性乙型肝炎１～２年耐药率４．４％和 ２１．６％，ＨＢｅＡｇ阴性为２．７％和８．６％。 耐药与拉米夫定有重复耐药位点，和拉米 夫定用药引起的不良反应相类似。 替诺福韦（ＴＤＦ）：替诺福韦是核苷酸 逆转录酶抑制剂替诺福韦的酯类前药，具 有抑制ＨＢＶ和ＨＩＶ的双重功能的作用。 近两年用于ＨＩＶ和ＨＢＶ共同感染和对 ＬＶＤ耐药的慢性乙型肝炎患者中，收到 优良的治疗效果。临床资料显示，当 ＬＶＤ耐药后应用ＴＤＦ出现更早的病毒抑 制。 核苷类药物和ＨＢＶ相互的作用机制 核苷类药物抗ＨＢＶ的作用机制：根 据ＨＢＶ在体内复制过程，可以寻找有效 抗病毒治疗的靶位，ＨＢＶ感染的第１步 为病毒核肝细胞的特殊受体结合，脱壳后 病毒穿入细胞质，其穿透和脱壳的机制尚 不清楚，可能和细胞膜融合无关，或许为 受体介导的内吞引作用。第１个关键步 骤为病毒基因松弛环状ＤＮＡ转变为 ｃｃｃＤＮＡ及转录为病毒的微型染色体，主 要依靠宿主的酶，并以此为模版转录为所 有的病毒ｍＲＮＡ。第２个关键步骤为通 过前基因组ＲＮＡ和逆转录酶包装入核心 蛋白内，成为复制复合体，病毒多聚酶Ｎ 端蛋白和ｐｇＲＮＡ的５端独特的ＲＮＡ附加 体结合，酶活化后启动ＨＢＶ—ＤＮＡ合成， 先合成负链，继而合成部分正链。在胞质 中装配成完整的病毒释出，部分病毒基因 进入细胞核内形成ｃｃｃＤＮＡ。 ＨＢＶ对核苷类药物的耐药机制：① ＨＢＶ对拉米夫定的耐药机制：在对拉米 夫定的耐药机制的研究中，Ｍ２０４Ｖ／Ｉ和 Ｌ１８０Ｍ是最主要的耐药突变。逆转录酶 Ｃ结构域ＹＭＤＤ基序的突变Ｍ２０４Ｖ／Ｉ可 给ＨＢＶ带来超过１０００倍的高水平耐药。 这两种突变会引起聚合酶复制能力的下 降。Ｂ域Ｖ１７３Ｌ和Ｌ１８０Ｍ突变可对ＹＭ— ＤＤ突变造成的复制能力下降起到一定 的补偿作用。临床中Ｍ２０４Ｖ常与Ｌ１８０Ｍ 和／或Ｖ１７３Ｌ共同存在，Ｍ２０４Ｉ一般单独 存在。此外，其他一些已发现的不太常见 的耐药突变，如Ｆ１６６Ｉ 、Ｐ１７７Ｌ、Ｌ１８０Ｃ、 Ａ１８１Ｔ／Ｖ、Ｔ１８４Ｓ、Ｍ２０４Ｓ和Ｖ２０７Ｉ等。② ＨＢＶ对阿德福韦的耐药机制：逆转录酶 Ｄ结构域Ｎ２３６Ｔ突变赋予ＨＢＶ对无环核 苷酸类似物阿德福韦、替诺福韦４～８倍 的低水平耐药性，而对有环的核苷类似物 敏感。分子模型显示Ｎ２３６并不直接靠 近酶的活性位点，但接近￥８５，并可能与 之形成氢键，￥８５直接与ＡＤＶＤＰ的磷酸 基作用。发生Ｎ２３６Ｔ突变后，２３６位与８５ 位之间的氢键会发生变化，这可能间接影 响￥８５与ＡＤＶＤＰ的作用。该突变也会导 致ＨＢＶ复制能力的下降。目前还发现 Ａ１８１Ｔ／Ｖ突变与阿德福韦耐药性有关。 ③ＨＢＶ对恩替卡韦的耐药机制：恩替卡 ６中国社区医师－医学专业２０１０年第２７期（第１２卷总第２５２期 韦于２００５年成为第３个获ＦＤＡ批准的 抗ＨＢＶ药物。目前已经发现的耐药突变 有ＴＩ８４Ｇ、￥２０２Ｉ和Ｍ２５０Ｖ。但是这些突 变都来自接受拉米夫定治疗并产生严重 耐药性后转为恩替卡韦治疗的患者。更 长期的耐药性监测仍在进行中。 核苷类药物抗ＨＢＶ联合应用 拉米夫定抗ＨＢＶ的联合应用：２００５ 年《亚太指南》指出，ＬＶＤ发生耐药后，可 改为ＡＤＶ单药治疗。但目前一般多主张 序贯治疗，即ＡＤＶ应先联合ＬＶＤ治疗１ ～３个月，待ＨＢＶ—ＤＮＡ载量下降后再 以ＡＤＶ单药治疗。ＬＶＤ出现基因型耐药 改为ＡＤＶ单药治疗不是最佳的方案。 阿德福韦酯抗ＨＢＶ的联合应用： ＡＤＶ治疗５年的基因型耐药、表型耐药 和临床耐药分别为２９％、１６％、１ｌ％。出 现ＡＤＶ耐药临床一般可改用ＬＶＤ或 ＥＴＶ治疗。但Ａ１８１Ｖ突变的ＡＤＶ耐药 病毒株由于和ＬＶＤ及Ｅ ＩＴｖ有部分交叉耐 药，使其敏感性下降。ＡＤＶ和ＴＤＦ耐药 后联合用药的临床资料尚未见报告。 恩替卡韦抗ＨＢＶ的联合应用：资料 显示，慢性乙型肝炎应用ＥＴＶ初治的患 者，出现耐药几乎为０。但在ＬＶＤ耐药后 经ＥＮＴ治疗５２周的患者中，发现７％出 现基因型耐药、病毒突变甚至临床耐药。 ＥＮＴ耐药后改用何种药物，或是与何种药 物联合治疗相关报道鲜见。根据核苷类 药物的类型和各药物的耐药特征，加用或 换用阿德福韦或替诺福韦可能是最佳选 择。 替比夫定抗ＨＢＶ的联合应用：２００７ 年亚太地区肝病学会（ＡＰＡＳＬ）指出，替比 夫定与ＬＶＤ相比，具有更低的耐药率。 ２４周时ＨＢＶ ＤＮＡ检测不到的ＨＢｅＡｇ阳 性或阴性患者，１０４周时病毒耐药率分别 仅为４％和２％。初步的临床证据已经证 实，替比夫定耐药患者联合或换用ＡＤＶ 是一种成功的补救治疗策略。 结语 必须高度重视预防ＨＢＶ多重耐药毒 株的出现，尽快建立研究ＨＢＶ耐药的一 系列技术平台。联合治疗将是未来治疗 慢性乙型肝炎的重要趋势，特别是对于病 情较重的患者，如果将有协同作用的药物 联合起来，那么不仅可以增强疗效，还可 以减少耐药的发生。
乙肝研究报告
乙肝研究报告
乙肝研究报告
摘要：
乙型肝炎（乙肝）是一种由乙型肝炎病毒（HBV）引起的慢性肝炎疾病，全球范围内乙肝感染率较高，且可引发严重的健康问题，包括肝硬化和肝癌。本研究旨在研究乙肝流行病学、病毒特性、诊断方法、治疗策略和预防措施，以更新和加深对乙肝的了解。
方法：
本研究采用文献综述的方法，收集并分析相关的乙肝研究文献。重点关注乙肝的流行病学数据、病毒的遗传特性、潜伏期和传播途径、乙肝的诊断方法包括血清学标志物和分子生物学检测技术、乙肝的治疗策略包括干扰素和核苷酸类药物治疗以及预防措施包括疫苗接种和卫生教育等。
结果：
乙肝在全球范围内广泛传播，尤以亚洲和非洲地区疫情最为严重。病毒遗传多样性较高，不同基因型在不同地区的分布存在差异。乙肝潜伏期可长达数十年，患者可以成为病毒的潜在传播源。乙肝的诊断主要依靠血清学标志物和分子生物学检测技术，如HBsAg、HBeAg和HBV DNA。治疗策略包括干扰素和核苷酸类药物，如伊立替康和阿德福韦。乙肝的预防措施主要是通过疫苗接种和卫生教育来减少病毒传播。
结论： 乙肝是一种全球性的健康问题，具有高传染性和严重的健康后果。了解乙肝的流行病学特点、病毒的遗传特性、诊断和治疗方法以及预防措施对于控制乙肝的传播和减少疾病负担至关重要。在未来的研究中，应加强乙肝病毒的遗传分析和疫苗研发，以提高乙肝的预防和治疗效果。
北京地区乙型肝炎病毒基因型的分布
１１０４ 医学理论与实践２００７年第２Ｏ卷第９期 Ｊ Ｍｅｄ Ｔｈｅｏｒ ８Ｌ Ｐｒａｃ Ｖｏ１．２０，Ｎｏ．９，Ｓｅｐ ２００７ ｔ
北京地区乙型肝炎病毒基因型的分布
郭拥军 文江平周学红张劲秀北京同仁医院检验科１００７３０
摘要 目的：了解北京地区乙肝病毒基因分型情况。方法：从前ｓ１基因到ｓ基因巾的保守序列设计出１Ｏ条内外引
物，将其中８条内引物分成Ａ、Ｂ组，分别扩增Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ型ＨＢＶ，根据ＰＣＲ产物片断判定ＨＢＶ基因型。结
果：对ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性的２１５例患者乙肝病毒基因分型，检测结果显示以Ｃ型为主，共１５９例占７４．Ｏ ，Ｂ型５１例
占２３．７ ，及Ｂ＋Ｃ型５例占２．３ ，未检出Ａ；Ｄ、Ｅ、Ｆ型；同时发现ＨＢＶ基因型Ｃ组ＨＢｅＡｇ阳性率显著高于基因 型Ｂ组（Ｐ＜０．０５），提示ＨＢＶ基因型Ｃ比基因型Ｂ的危害要大。结论：北京地区感染ＨＢＶ基因型为Ｂ型和Ｃ型，
以Ｃ型为主，并且Ｃ型对肝脏损害较Ｂ型严重。
关键词乙型肝炎病毒基因型基因特异性引物ＰＣＲ
中图分类号：Ｒ５１２．６文献标识码：Ｂ文章编号：１００１ ７５８５（２∞７）ｏ９—１１０４－０２
ＨＢＶ－ＤＮＡ为环状部分双股ＤＮＡ，由正（Ｓ）链和负（Ｌ） 明显的空间分布特征。本研究对北京同仁医院２１５例ＨＢＶ
链构成。负链有４个开放读码区（０ＲＦ）Ｓ、Ｃ、Ｐ、ＸⅨ。ＨＢＪ ＤＮＡ阳性的乙肝感染者进行了病毒基因型测定，并进行了
ｓＡｇ血清型分为９型，主要为ａｄｒ、ａｄｗ、ａｙｒ、ａｙｗ等四种亚 对比分析。
型＿１］。随着现代分子生物学技术的应用，人们逐步认识到血 １ 材料和方法
清型分析并不能真正反映ＨＢＶ基因组的差异，不能确切反 １．１病例选择血清标本采自２００３年９月￣２００６年１月
映病毒的异质性。１９８８年Ｏｋａｍｏｔｏ等ｒ１］对ＨＢＶ全基因序 北京同仁医院住院及门诊患者，共２１５份血清标本，分别是：
列比较后认为血清型不能反映ＨＢＶ基因组的差异，根据 （１）慢性ＨＢＶ无症状携带者血清８９份；（２）慢性乙型肝炎患 ＨＢＶ全基因核苷酸序列异源性≥８ ，将ＨＢＶ－ＤＮＡ序列分 者血清１０８份；（３）自限性感染者血清１８份。以上各类乙型
乙型肝炎病毒基因型与耐药病毒株的相关性研究
国际检验医学杂志２０１１年９月第３２卷第１４期 Ｉｎｔ Ｊ ＬａｂＭｅｄ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１１，ＶｏＬ ３２，Ｎｏ．１４
・论 著・
乙型肝炎病毒基因型与耐药病毒株的相关性研究
张书楠 ，余文辉 ，周大桥。，张春雷 ，冯玉丽 ，贺劲松。，周小梅 ，李伟雄 ，陈雪红 ，林卓玲
（广东省深圳市中医院：１．检验科；２．国家级肝病重点专科 ５１８０３３） ・ １５４３ ・
摘 要：目的 研究乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）基因型与耐药病毒株产生的相关性。方法 征集３４０例接受拉米夫定治疗１年以
上的慢性乙型肝炎（ＣＨＢ）患者为研究对象。采集血样经离心分离血浆，进行ＨＢＶ ＤＮＡ定量检测，再进行基因测序和基因分型。
结果 基因测序和基因型分析结果为：Ａ型１６例（４．７ ），Ｂ型ｌ１２例（３２．９ ），Ｃ型１４８例（４３．５ ），Ｄ型４４例（１２．９ ），Ｂ／Ｃ
混合型２Ｏ例（５．９％）。其ｑ－发生ＹＭＤＤ耐药突变的基因型分别是：Ａ型４例（２５．０ ），Ｂ型２０例（１８．５ ），Ｃ型６４例（４２．１ ），
Ｄ型８例（１８．２ ），Ｂ／Ｃ混合型４例（２０．０ ）。结论ＨＢＶ基因型ｃ发生ＹＭＤＤ耐药突变的频率较高，ＨＢＶ基因型与ＹＭＤＤ
突变可能存在相关性。
关键词：肝炎病毒，乙型； 基因； 突变 ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—４１３０．２０１１．１４．００６ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３—４１３０（２０１１）１４ １５４３—０３
Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ＨＢＶ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｉａｍｉｖｕｄｉｎｅ Ｚｈａｎｇ Ｓｈｕｎａｎ ，Ｙｕ Ｗｅｎｈｕｉ ，Ｚｈｏｕ Ｄａｑｉａｏ ，Ｚｈａｎｇ Ｃｈｕｎｌｅｉ ，Ｆｅｎｇ Ｙｕｌｉ ，
Ｈｅ Ｊｉｎｓｏｎｇ ，Ｚｈｏｕ Ｘｉａｏｍｅｉ ，Ｌｉ Ｗｅｉｘｉｏｎｇ ，Ｃｈｅｎ Ｘｕｅｈｏｎｇ ，Ｌｉｎ Ｚｈｕｏｌｉｎｇ
乙肝病毒基因型的研究进展
乙肝病毒基因型的研究进展
杨军
【摘 要】@@ 乙肝病毒(HBV)感染是长期困扰全球医学界的难题,我国是乙型肝炎的高发地区.目前,在全世界大约3.5亿HBV携带者中,有1亿是中国人[1],严重危害国人健康,影响生活质量.近年来,随着HBV基因型研究的深入,对HBV有了新的认识.国内外多个研究认为,HBV基因型影响病程的进展、预后和抗病毒的疗效,笔者就HBV基因型研究概况作一综述如下.
【期刊名称】《西南国防医药》
【年(卷),期】2011(021)003
【总页数】3页(P338-340)
【关键词】乙型肝炎病毒;基因型;进展
【作 者】杨军
【作者单位】400016,重庆,重庆医科大学第一附属医院感染科
【正文语种】中 文
【中图分类】R512.6
乙肝病毒(HBV)感染是长期困扰全球医学界的难题，我国是乙型肝炎的高发地区。目前，在全世界大约3.5亿HBV携带者中，有1亿是中国人〔1〕，严重危害国人健康，影响生活质量。近年来，随着HBV基因型研究的深入，对HBV有了新的认识。国内外多个研究认为，HBV基因型影响病程的进展、预后和抗病毒的疗效，笔者就HBV基因型研究概况作一综述如下。
1 HBV基因分型的提出和基因型的分布特点
HBV是高度变异的DNA病毒，基因突变频繁发生，形成了病毒DNA序列的差异，表现为不同的基因型。1988年Okamoto等〔2〕首次通过对HBV全基因序列测定，将18株HBV DNA序列分为A、B、C、D 4种基因型，从而提出了HBV基因型这一概念。目前根据HBV核苷酸全序列异质性≥8%(同基因型之间的同源性>
92%)或S基因序列核苷酸异质性≥4%，将HBV分为A～H共8个基因型〔3 -
4〕。最近有报道在越南发现新的HBV基因型I〔5〕，使得HBV基因型增至9个。随着调查的进一步深入，发现同一种基因型，病毒的序列特点及临床表现也存在一定的差异，根据全基因组序列异质性>4%而<8%的原则，HBV 基因型进一步可分为不同的基因亚型，如：A基因型可分为A1(Aa)、A2(Ae)、A3(Ac)亚型；B基因型可分为B1(Bj)、B2(Ba)、B3、B4亚型；C基因型可分为C1、C2、C3、C4亚型等。