山楂黄酮提取工艺的研究
山楂黄酮提取工艺的研究
【摘要】本文以芦丁标准液绘制标准曲线，利用比色法测定山楂提取液中黄酮的含量，从提取温度、提取时间、乙醇浓度、料液比四个方面出发，采用单因素试验分析了各因素对山楂黄酮提取率的影响，并通过正交试验对山楂黄酮的乙醇热回流提取工艺条件进行了优化，结果表明：用体积40倍于其重量的70%乙醇溶液浸泡，70℃作用2 h为较佳提取工艺参数，可得到较高产量的山楂黄酮。
【关键词】黄酮；乙醇回流提取；单因素试验；正交试验
山楂（fructus crataegi）是蔷薇科植物山里红（crataegus pannatifida bge. var. major n. e. bge）或山楂（crataegus pannatifida bge.）的干燥成熟果实[1]，全国各地均有分布，为药食同源植物。
化学成份和药理学研究均表明，山楂中主要含有机酸和黄酮类化合物[2]，多用于消食化积，心腹刺痛，高血脂症等[3-4]，临床试验证明其疗效显著且安全无毒副作用。
我国山楂资源丰富，将其做为天然的保健食品和治疗药品开发有着较为广阔的前景。
本文以山楂中总黄酮为指标，从提取温度、提取时间、乙醇浓度和料液比四个方面出发，分别采用单因素试验和正交试验，对山楂黄酮的乙醇热回流提取工艺条件进行了优化，以期为山楂的深入开发利用奠定一定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
山楂（市售，产自山东临沂）。
1.2 山楂的预处理
干山楂果于干燥箱中120℃烘干，粉碎后过20目筛，备用。
1.3 标准曲线制备
配制150 μg/ml的芦丁标准液作为对照液，准确量取0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml分别置于12.5 ml比色管中，加30%的乙醇补至5 ml，各加入5% nano2溶液0.3 ml，摇匀后放置5 min，加入10% al（no3）3溶液0.3 ml摇匀后放置6 min，加入1.0 mol/l naoh溶液2.0 ml，用30%乙醇定容至刻度，摇匀，放置15 min，以零管为空白。
摇匀后用1 cm的比色杯，在510 nm波长处测定吸光度，测3次取平均值，回归处理。
1.4 单因素试验
1.4.1 提取温度
准确称取山楂粉末1 g，料液比1：40，70 %乙醇溶液中提取，分别在50、60、70、80、90℃下提取2.0 h，用与提取剂等质量分数的乙醇反复洗涤圆底烧瓶、滤纸包后定容于100 ml容量瓶中，510 nm波长处测定吸光度。
1.4.2 提取时间
准确称取山楂粉末1 g，料液比1：40，70 %乙醇溶液，70℃下分别提取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h，用与提取剂等质量分数的乙醇反复洗涤圆底烧瓶、滤纸包后定容于100 ml容量瓶中，510 nm波长处测定吸光度。
1.4.3 乙醇浓度
准确称取山楂粉末1 g，料液比1：40，分别用40%、50%、60%、70%、80%的乙醇溶液在70℃下提取2.0 h，用与提取剂等质量分数的乙醇反复洗涤圆底烧瓶、滤纸包后定容于100 ml容量瓶中，510 nm波长处测定吸光度。
1.4.4 料液比
准确称取山楂粉末1 g，70%的乙醇溶液，分别用1：20、1：30、1：40、1：50、1：60的料液比在70℃下提取2.0 h，用与提取剂等质量分数的乙醇反复洗涤圆底烧瓶、滤纸包后定容于100 ml容量瓶中，510nm波长处测定吸光度。
1.5 提取条件优化
准确称取1 g山楂粉末，采用l9（34）正交设计从乙醇浓度、料液比、提取时间和提取温度四个方面优化山楂总黄酮提取条件（表1）。
表1 正交试验因素与水平
2 结果与分析
2.1 标准曲线
以芦丁的含量为横坐标，吸光度为纵坐标，作标准曲线如下图所示。
r2值为0.9970，标准曲线方程为：y=0.0003x+0.0020（x值表示芦丁的含量，y值表示吸光度）。
结果表明，芦丁含量在150-750 μg/ml范围内与吸收值线性关系良好。
图1 芦丁标准曲线
2.2 单因素试验
2.2.1 提取温度
通过提取温度对山楂黄酮含量的影响研究发现，在保持其他条件不变的情况下，在试验设定的温度范围内，随温度的升高，黄酮类化合物在乙醇溶液中的溶解度逐渐升高，提取率上升，当提取温度达以80℃时，提取率达到峰值，随后发生下降。
图2 提取温度对黄酮提取量的影响
2.2.2 提取时间
图3 提取时间对黄酮提取量的影响
在保持其他条件不变的情况下，通过提取时间对山楂黄酮含量的影响研究发现，在实验设定的提取时间范围内，随提取时间的延长，黄酮类化合物在乙醇溶液中的溶解度逐渐升高，提取率上升，当提取时间达以2 h时，提取率达到峰值，随后发生下降。
2.2.3 乙醇浓度
图4 乙醇浓度对黄酮提取量的影响
在保持其他条件不变的情况下，通过乙醇浓度对山楂黄酮含量的影响研究发现，在实验设定的乙醇浓度范围内，随乙醇浓度的增加，黄酮类化合物在乙醇溶液中的溶解度逐渐升高，提取率显现出先急后缓的上升趋势，浓度范围内从70%上升到80%时，提取率增加并不明显，综合考虑提取成本，乙醇浓度为70%时较佳。
2.2.4 料液比
在保持其他条件不变的情况下，通过料液比对山楂黄酮含量的影响研究发现，在实验设定的料液比范围内，随料液比的增加，黄酮
类化合物在乙醇溶液中的溶解度逐渐升高，提取率总体显现出先急后缓的上升趋势，料液比从1：40上升到1：60时，提取率增加并不明显，综合考虑提取成本，料液比以1：40较佳。
图5 料液比对黄酮提取量的影响
2.3 正交试验
表2 回流提取法的正交试验表
从表2正交试验分析结果来看，影响山楂黄酮的乙醇热回流提取效果的主次因素依次为：a（乙醇浓度）>d（提取温度）>b（料液比）>c（提取时间）。
所以，最终优化之后得到的山楂黄酮的乙醇热回流提取较佳条件为a2b2c3d2，即：用体积40倍于其重量的70%乙醇溶液浸泡，70℃作用2 h，可得到较高产量的山楂黄酮。
3 讨论
黄酮类化合物作为植物中非常重要的一类次生代谢产物，在植物中广泛存在，具有活血化淤、保肝抗炎、抗菌、抗病毒及泻下、解痉的多种药理作用。
因此，山楂黄酮的提取工艺优化研究为今后山楂中黄酮类成分的提取分离和生产提供了良好的前期准备，也为植物山楂的药用价值的深入开发提供了完备的实验基础。
经优化后得到山楂黄酮的乙醇热回流提取较佳条件为：用体积40倍于其重量的70%乙醇溶液浸泡，70℃作用2 h，其工艺流程为：山楂→干燥→粉碎→加乙醇溶液→热回流提取→过滤。
【参考文献】
[1]国家中医药管理局，中华本草编委会.中华本草[m].上海：上
海科技出版社， 1999，132.
[2]薛洁，夏昌隆.山楂药理研究进展[j].新疆中医药，2002，20（4）：69-71.
[3]李贵海，孙敬勇，张希林，等.山楂降血脂有效成份的实验研究[j].中草药，2002， 33（1）：50-52.
[4]高莹，肖颖.山楂及山楂黄酮提取物调节大鼠血脂的效果研究[j].中国食品卫生杂志，2002，14（3）：14-16.
[责任编辑：杨扬]。
黄酮的研究
1 提取工艺
1.1 热水提取法
由于黄酮苷类物质易溶于水，所以对黄酮苷类含量较高的原料可以采用热水提取法。例如，从荷叶中黄酮提取时，采用提取水量30倍，提取温度80℃，提取时间1.5h，可得较好结果。此工艺成本低、安全，适合工业化大生产。但由于水的极性大，易把蛋白质、糖类等溶于水的成分浸提出来，从而使提取液存放时，易腐败变质，为后续的分离带来困难，但如果直接用提取液作原料生产制剂或饮料等，因消耗溶剂的费用比其他方法低，仍为一种可取的提取方法。
1.7酶解法
对于一些黄酮类物质被细胞壁包围不易提取的原料可以采用酶法提取。例如山楂中，由于黄酮类物质部分被以纤维素为主的细胞壁所包围，并且这些细胞间尚有果胶粘结，因此采用酶法要比一般方法（醇提法）的提取率要高。先将预先干燥并粉碎的山楂用蒸镏水浸泡，恒温至45℃后，加入以果胶酶和纤维素酶为主的复合酶液，用lmol/LNaOH调节pH4.5~5，在45℃恒温酶解1.5~2.5h，然后将酶解溶液回流、提纯。采用这种方法，使提取率比目前常用的方法提高了2% -3％。此提取原理是复合酶充分破坏了以纤维素为主的细胞壁结构及其细胞间相连的果胶物质，将山楂中的果胶完全分解成小分子物质，使提取传质阻力减小，使果肉中的黄酮类物质充分地释放出来。
2结语
近年来随着研究方法和技术的不断提高，又发现了黄酮许多新的种类和生理作用，特别是抗自由基等方面的作用，所以，加快对黄酮类物质提取工艺的研究，进一步采用一些高新技术及先进的生产工艺，如热反应技术、生物技术、微胶囊包埋技术、干燥技术、膜分离技术、超临界萃取技术、超微粉碎技术、电磁技术以及多种技术的组合，从而得到黄酮类化合物最优的提取、分离、纯化方法，当然，在这方面要做的工作还很多。可以预见，通过高新技术提取黄酮类化合物，并应用到医药品、化妆品、食品等领域去，必将有广阔的前景。
山楂降血脂有效部位的纯化工艺研究
山楂降血脂有效部位的纯化工艺研究
缪亚东;欧阳臻;袁斌
【期刊名称】《食品研究与开发》
【年(卷),期】2008(029)011
【摘要】研究大孔吸附树脂纯化山楂降血脂有效部位的条件和参数.比较四种大孔吸附树脂对山楂总黄酮、山楂总三萜酸的吸附性能;以树脂吸附量为指标,对大孔吸附树脂纯化山楂降血脂有效部位的工艺进行筛选.AB-8大孔吸附树脂对山楂降血脂有效部位的吸附性能最好,其纯化的最佳条件为:原液浓度0.13 g生药/mL,流速为0.5mL/min,pH值为原液pH值(3.5左右).洗脱剂选择80%的乙醇溶液.洗脱流速为2 mL/min.AB-8大孔吸附树脂可用于山楂降血脂有效部位的纯化,纯化后有效部位的纯度达到85%以上.此工艺可行,树脂再生容易.
【总页数】5页(P104-108)
【作者】缪亚东;欧阳臻;袁斌
【作者单位】紫琅职业技术学院,江苏,南通,226002;江苏大学,药学院,江苏,镇江,212013;联亚药业,江苏,南通,226002
【正文语种】中文
【中图分类】TS2
【相关文献】
1.大孔吸附树脂分离纯化三七和山楂叶有效部位的工艺研究 [J], 韩奇;蔡仲钦
2.降脂宁有效部位提取纯化工艺研究 [J], 李丽华;杨瑞静;姜艳艳;刘斌
3.正交试验优选葛根、山楂降脂有效部位的纯化工艺 [J], 缪亚东;欧阳臻;江涛涛;袁斌
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复方降脂缓释片中山楂的提取工艺研究
（ 西 中医学 院 ，陕西 咸 阳 陕 ７２４ ） １０ ６
摘要： 目的 筛选复方降脂缓释片中山楂的最佳提取工艺。方法 采用正交实验法， 以出膏率和金丝桃苷含量两个指标
优选提取工 艺中的溶剂用量 、 提取 次数 、 取 时间等 因素。结果 优 化 的提 取 工 艺为提 取 两次 ， 次加 ６倍 量 ６ ％ 的 乙 提 每 ０ 醇， 提取 １ｈ 次 。结论 确 定的最佳提取 工艺稳定 ， ／ 具有 可行性 。
一
表 ２ 金 丝 桃 苷 的 含 量 及 出 膏 率分 析
时珍 国医 国药 ２０ ０ ９年第 ２ ０卷第 ４期
Ｌ ＨＺ Ｅ Ｅ ＩＩＥＡ ＤＭ Ｔ ＲＡＭ ＤＣ ＥＥ Ｒ Ｈ２０Ｖ Ｌ２ Ｏ ４ Ｉ ＩＨ ＮＭ ＤＣＮ Ｎ Ａ Ｅ Ｉ Ｅ ＩＡ Ｒ Ｓ Ａ Ｃ ０９ Ｏ ．０Ｎ ． Ｓ
复 方 降 脂 缓 释 片 中 山楂 的 提 取 工 艺 研 究
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关 键词 ： 复方降脂缓释片； 山楂； 正交实验； 出膏率； 金丝桃苷
中图分 类号 ： ２ ４ ２ Ｒ ８ ．
文献标 识码 ： Ｂ
文章编 号 ：０ ８０ ０ （ ０ ９ ０ －８ ８ １ １０ －８ ５ ２ ０ ）４ ３ － ０ ０
一
０ｍ 容 定 得 —９号样 品， 进 高脂血症 的发病率伴 随着人们 物质生 活水平 的提高而 有升 定体积后 转移到 ５ １ 量瓶 中 ， 容 ， 到 １ 行含量分析 。 高的趋势 ， 目前降血脂的西药 主要是他 汀类 和贝特类 ， 这类 药 品 长期服用均有一定副作用 ， 高血脂 的治疗则需 要长 期服药 ； ２ ２ １ 金 丝桃 苷 的含 量 测 定 而 其 ． ． 副作用表现也较为 突出 ， 主要表 现有肝 毒性 ， 患者 消化 系统 会 出 色谱条件 与系统适用性 ： 色谱柱 Ｋｏ ｓ Ｄ （ ｍ，． ｒ ｉＯ ＳＣ８ ５ ｍｏ ｌ ４６ ｍ×２０ｍ ， ５ ｍ） 以甲醇 一 ． ％磷 酸 （２ ８ 为 流动相 ， 测波 ０１ ４ ：５ ） 检 现恶 心 、 呕吐、 腹泻 、 消化不 良等不 良反 应 ， 且停 药后血脂 容易反 ｍ ５ ｍ， 不 弹， 部分 患者出现肌痛或 肌无力 ， 从而使部 分患者 中途 放弃 。复 长 为 ２ ５ｎ 柱 温 为 室 温 。理 论 板 数 以 金 丝 桃 苷 峰 计 ， 低 于 ３ 方 降脂 缓 释 片是 在 遵 循 安 全 有 效 原 则 基 础 上 ， 过 大 量 的文 献 研 ００ 通 ０ 。在此条件 下 ， 品得到 良好 分离 。缺 山楂阴性 样 品 （ 样 即溶 在金 丝桃 苷 峰 处无 吸 收 峰 出 现 ， 干 扰 本 品 的测 定 。 不 究和临床调研 、 分析大量降 血脂处方 ， 筛选 出临床 应用处 方使用 剂 ） 线性范 围 ： 精密吸取对照品溶液 （ 浓度 ０ ２ ｇ・ ｌ ） ， ， ． ３ｍ ｍ １３ 频次较高和在 降血脂方 面有 着 良好 表现 的何 首乌 、 山楂和丹参 ３ 测定 峰 面积 ， 以峰 味药材 ， 对其进行 降脂 有效 部位 的提 取纯 化 ， 再制 备成 缓释 片 。 ５ １ ，５ ２ １按上述 色谱 条件 注入 色谱 仪 ， ，０ １ ，０ ， 面 积对 进 样 量 （ ） 归 ， 回 归 方 程 ， ＝１２ ３９ ２ １３ ＋ ｇ 回 得 Ａ ８ ６ ． ２ Ｃ 本实验对山楂的降脂有效部位进行提取研究。 ２ ２ ．７ ， 关 系 数 ｒ ０ ９ ９７， 丝 桃 苷 在 ０ ２ ２２９ ５ ２ 相 ＝ ．９ 金 ． ３—４ ６ ｇ范 ． １ 仪 器 与 试 药 １１ 仪器 Ｗａ ￣６０ ． ｔ ０ Ｅ液相 色谱 仪 ； ｔｒ ６０泵 ， ｒ ２８ 围 内线 性关 系 良好 。 ｅ ｗａ ｓ ０ ｅ Ｗ￣ｅ ４７ ｓ 金丝桃苷 的含量测定 ： １— 将 ９号样 品各 取 １ｍ ， １ｍｌ ｌ加 甲 紫 外 检测 器 ； ｌ 色 谱 作 站 。 Ｍｉ ｌ 分析纯） 稀释 ， 超声处理 ５ｍ ｎ 用 ０ ４ ｍ微 孔滤膜过 滤 ， ｉ ， ．５ 然 １２ 试剂与试药 金丝桃苷对照 品由中国药品生物制 品检定所 醇 （ ． 。 提供 （ 批号 １１２ ２ ０ ０ ） 水为重 蒸馏 水 ， １５ １— ０ ３３ ， 甲醇 为 色谱纯 ； 磷 后按上述 色谱条 件进 行测 定。检测 结果 见表 ２ ２ ２２ 出膏率的测定 用移液管从 上述 ５ 容量瓶 中移 出 ２ ． ． Ｏｍｌ ０ 酸为分析纯 ， 药材购 自咸 阳市药材公 司。 ｍ１ 已 于 １５ 干 燥 至 恒 重 的 蒸 发 皿 中 ， 水 浴 上 蒸 干 ， 至 ０℃ 置 于 ２ 方法 与结 果 ０￣ 测定 出膏率 （ 。结果见表 ２ ％） 。 ２ １ 工 艺路 线设计 山楂 中降血脂 的有效部位 是 以金 丝桃苷 为 １５Ｃ干燥至恒重 ， ． ２ ３ ３ 实验测定结果及分析 ．． 主的黄酮类化合物 。为了最大程度提取和保留有效成分 ， 首先 采 用一定浓度的 乙醇提取有效 部位 。由于黄酮类 成分 的稳定性 受 温度影响较大 ， 高温 长时间加热 的情况 下会使 其分解 ， 度控 在 温 制方面既要保证提取率 ， 又要使化学 降解率 控制在 最小范 围 。 般多 以 ８ ℃为提取温度 。参考相关文献 确定 影响有效 部位 ５ 的因素为乙醇浓度 、 提取 时间 、 提取次数 和溶 剂量 。根据 预实验 和文献资料 ， 乙醇的浓度选 取 ５ ％ ，０ ，０ ０ ６ ％ ７ ％３个 水平 ， 取时 提 间选 取 ０ ５ １ １５ｈ 提 取 次 数 选 取 １２ ３次 ３ 水 平 ， 剂 量 选 ． ， ，． ， ，， 个 溶
黄酮类化合物提取工艺研究
黄酮类化合物提取工艺研究唐鹰1(1.湖北民族学院湖北恩施445000）摘要黄酮类化合物是一类存在于高等植物及蕨类植物中的活性物质，具有特殊的保健及治疗功能。
本文综述了天然黄酮类物质的多种提取工艺，分别是水提法、碱性水或碱性烯醇提取法、有机溶剂提取法、微波法、超声波法、酶解法、大孔树脂吸附法、超滤法、超临界萃取法，比对各工艺利弊进行了分析。
关键词黄酮类化合物提取工艺研究The extracting technology of flavonoids compoundsTang Ying1（1.Hubei institute for nationalities Hubei Enshi 445000）Abstract There is a type of flavonoids in higher plants and ferns of active substances, with special care and treatment function.This paper analyses summarized the natural flavonoids substances respectively,a variety of extraction process was water -extraction and alkaline water or alkaline propylene alcohol extraction, organic solvent extraction,microwave-extraction method, ultrasonic method, enzyme hydrolysis and macroporous resins, ultrafiltration , supercritical fluid extraction, each process than and analyzed the advantages and disadvantages.Keywords Flavonoids extraction technology research黄酮类化合物在植物界中分布广泛，,属于植物次级代谢产物 ,在植物的叶子和果实中少部分以游离形式存在，大部分与糖结合成苷类以配基的形式存在。
山楂叶的研究进展_陈四平
山楂叶的研究进展陈四平1,臧亚茹2(1.承德医学院中药研究所,河北承德 067000;2.承德医学院附属医院) 【关键词】山楂叶;研究进展 【中图分类号】R282.7 【文献标识码】A 【文章编号】1004-6879(2003)02-0164-02 山楂为蔷薇科植物,在我国具有悠久的保健与药用历史。
过去我们注重其果实方面的效果,但近几年随着提取工艺,检验手段的提高,对于山楂叶的研究有了很大进展,尤其是其在心血管系统方面有效的治疗保健作用以及抗衰老等作用,使之更加受到人们的青睐。
本文介绍国内外对山楂叶提取物及其制剂的有关化学,质量控制及生物活性,供开发山楂叶制剂参考。
1 化学1.1 化学成分 近年来对山楂叶化学成分的研究有了很大的进展,其主要成分为黄酮类。
黄酮也是山楂叶生理活性的主要成分,现已分离得到的主要有槲皮素(quercetin)、金丝桃甙、牡荆素(V it exin)、牡荆素2″-O-鼠李糖苷(V it exin-2″-0-rham no syl)[1]、pinnatifidaA、pinnat ifidaB、6″-0-乙酰基牡荆素(V itex in-6″-0-acety l)、2″-0-乙酰基牡荆素(V it exin-2″-0-acetyl)[4],pinna tifidaC、pinnatifidaD[5]。
除此之外,云南山楂叶中还含有芦丁[2],大果山楂中含有5,7,4ø-三羟基黄酮-8-C-B-D-葡萄糖(1→4)-B-D-葡萄甙[3]。
此外,还含有熊果酸[2],对羟基苯甲苹果酸[2-(4-hydr ox ybenzy l),ma lic-acid][1]等有机酸类;山梨醇(sor bitol)[1],二十乙烷醇[2]等有机醇类;还含有胡萝卜甙[2],盐酸二乙胺(diethy amine hydro chlor ide[1]等其它成分。
1.2 提取与精制1.2.1 水提法:干燥山楂叶粉碎,加热水提取,水提液过聚酰胺柱,乙醇洗脱得总黄酮[2]。
黄酮类化合物提取和分离方法研究进展
收稿日期:2007205225作者简介:梁 丹(19852),女,河南鹿邑人,贵州大学农药学硕士研究生,研究方向为植物源农药.第24卷第5期周口师范学院学报2007年9月Vol.24No.5Jo urnal of Zhoukou Normal U niversity Sept.2007黄酮类化合物提取和分离方法研究进展梁 丹1,张保东2(1.贵州大学农学院,贵州贵阳550025;2.周口师范学院继续教育学院,河南周口466001)摘 要:黄酮类化合物具有多种生理活性,从天然产物中提取和分离黄酮类化合物,引起了人们的广泛关注,其提取和分离方法也不断地改进和发展.文章主要综述了近几年来不同的提取和分离方法在黄酮类化合物中的应用进展.随着科技的进步,黄酮类化合物的提取和分离方法将更加快速、高效、完善.关键词:黄酮;提取;分离;进展中图分类号:O652 文献标识码:A 文章编号:167129476(2007)0520087203 黄酮类化合物是植物界分布广泛的天然酚类化合物,植物中的黄酮大体上可分为“黄酮类”与“黄烷酮类”两大类物质,已知化学结构的黄酮类物质至少有4000余种.黄酮类化合物具有广泛的生理功能,是许多中草药的有效成分,具有很高的药用价值,如有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用[1,2].黄酮类化合物还在食品、化妆品等行业中广泛应用.随着市场需求量的增加,经济效益的提高,黄酮类化合物提取和分离方法也在不断地改进和提高.1 黄酮类化合物提取方法的研究进展1.1 按所用溶剂不同分类(1)热水提取法(以水作溶剂).热水一般仅限于提取苷类.在提取过程中要考虑加水量、浸泡时间、煎煮时间及煎煮次数等因素.此工艺成本低、安全,适合于工业化大生产.郭京波等[3]以水做溶剂,同时提高浸提温度、延长浸提时间和增加液料比(60倍),可以明显提高芦丁的产率.(2)有机溶剂萃取法.乙醇和甲醇是提取黄酮类化合物的最常用溶剂.高浓度的醇(90%～95%)适合提取苷元,60%左右的醇适合提取苷类,提取的次数一般为2～4次[4].胡福良等[5]提取蜂胶液中黄酮类化合物,以80%乙醇提取的总黄酮的含量最高.其他有机溶剂法是根据相似相溶原理,对不同性质的黄酮选择最佳的有机溶剂进行提取.(3)碱提取酸沉淀法.黄酮类成分大多具有酚羟基,易溶于碱水(如碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钙水溶液)和碱性稀醇.因此,可先用碱性水提取,碱性提取液加酸后黄酮苷类即可沉淀析出.提取时应控制酸碱的浓度,以免在强碱下加热时破坏黄酮类化合物的母核.当有邻二酚羟基时可加硼酸保护.此方法简便易行,橙皮苷、黄芩苷、芦丁等都可用此法提取.1.2 按提取条件不同分类(1)回流提取法.本法是加热回流提取黄酮类化合物的一种方法.所用回流剂一般有水、醇及混合溶剂.此法操作简便,但效率不够高,一般很难一次性完全提出黄酮化合物,需要反复回流提取[6,7].(2)索式提取法.该法是用索式提取器,多次提取黄酮,其溶剂可反复利用,操作方便,价格低廉且提取效率高,但此法所需时间较长.索式提取黄酮类化合物的方法已广泛为人们所利用[8].(3)微波辅助提取法.该法是利用微波加热的特性对成分进行选择性提取的方法.此法具有快速、高效、高选择性、对环境无危害等特点.刘峙嵘等采用微波萃取银杏叶中黄酮类化合物及唐课文等采用微波辅助法从黎蒿中提取黄酮类化合物,与传统溶剂萃取方法相比,微波萃取法更简单,而且具有萃取时间短、成本低、萃取效率高等优点[9,10].(4)超声提取法.该法是利用超声波浸提黄酮类化合物的一种方法.其基本原理是利用超声波的空化作用,破坏植物的细胞,使溶剂易于渗入细胞内,同时超声波的强烈振动能给植物和溶剂传递巨大的能量,使它们做高速的运动,加速细胞内物质的释放和溶解以及有效成分的浸出,大大提高了提取效率.超声提取法具有提取时间短、效率高、无需加热等优点[4].刘海鹏等[11]用超声波提取银杏叶总黄酮比回流法提取率高,且操作简便,节省时间,其最佳条件为:提取时间25min,温度10℃,连续提取3次,总黄酮提取率达96%.霍丹群等[12]在综合考虑成本等可行性因素下,提取山楂中黄酮类物质,提取时间大大缩短,产率较高,且实验可在室温下进行,设备简单,操作方便.(5)超滤法.该法是一种膜分离法,而且是唯一能用于分子分离的过滤方法,能从周围的介质中分离出100～1000nm的微粒.因此,超滤既可应用于除去溶液中胶体悬浮微粒,又能分离出溶液中的溶质.超滤的工作原理是:凡含有两种或两种以上溶质的溶液,通过滤膜分离流动时,其中分子体积小的溶质,经滤膜流出,而分子体积较大的溶质,不能通过滤膜而被截留[13].超滤法以多孔薄膜为分离介质,依靠薄膜两侧压力差作为推力来分离溶液中不同分子量的物质,从而起到提纯的作用.它具有不需加热,操作条件温和,不必添加化学试剂,不损坏黄酮类化合物,不存在相的转换,耗能低,分离率高,超滤装置可反复使用等优点.控制超滤膜孔径大小能有效除去溶液中大分子物质,选用适宜孔径的超滤膜是提高产品收率和质量的关键.20世纪80年代后期,采用超滤技术提取黄芩苷,收到了较好的效果.在溶液温度为14℃, p H=1.5时,提取黄酮类化合物的收率较高[14].(6)酶提取法.植物的有效成分往往被包裹在细胞壁内,提取时细胞壁造成传质阻力,使提取效果受到很大的限制.酶的作用可使细胞壁疏松、破裂,因此需要减小传质阻力,加速有效成分的释放,从而提高提取效率[15].毕会敏等[6]用纤维素酶法提取红景天总黄酮,最佳工艺条件为:加酶量1.95%(以原料干重计),液料比70∶1(体积质量比,mL∶g),p H 值5.5,酶解温度40℃,酶解时间5h,红景天总黄酮的浸出率为4.385%.研究表明,采用纤维素酶对红景天进行酶解处理,可提高黄酮类物质的浸出率,且粗提物产率高,DPP H清除活性强.(7)超临界流体提取法.该法(Supercritical Flu2 ids Ext raction,SFE)是20世纪80年代发展起来的一项提取分离技术,利用超临界流体(Supercritical Fluids,SCE)为萃取剂,从液体或固体中萃取出待测组分,其中超临界二氧化碳最为常用(SCF2 CO2)[16].SFE具有提取效率高、无溶剂残留、天然植物中活性成分和热不稳定成分不易被分解破坏等优点,同时还可以通过控制临界温度和压力的变化,达到选择性提取和分离化合物的目的.2 黄酮类化合物分离方法的研究进展由于黄酮化合物的性质不同,其分离原理有: (1)极性大小不同,利用吸附能力或分配原理进行分离;(2)酸性强弱不同,利用p H梯度萃取进行分离;(3)分子大小不同,利用葡聚糖凝胶分子筛进行分离;(4)分子中某些特殊结构,利用与金属盐络合能力的不同进行分离[17].2.1 p H梯度萃取p H梯度萃取适合分离酸性强弱不同的游离黄酮类化合物.将混合物溶于有机溶剂(如乙醚),依次用5%碳酸氢钠(萃取7,4′2二羟基黄酮)、5%的碳酸钠(萃取72羟基黄酮或4′2羟基黄酮)、0.2%氢氧化钠(萃取一般酚羟基黄酮)、4%氢氧化钠(萃取52羟基黄酮)萃取而使其分离[3].2.2 高效液相色谱分析(HPL C)法运用H PL C法分离黄酮类化合物的报道很多.有人对18种黄酮及黄酮苷类化合物在C8、C18和CN3种固定相上洗脱的RP2H PL C法分离做了研究,结果表明C18基本可以使植物黄酮苷元和配基实现分离,但它对极性大的苷部分洗脱出峰快,分离效果不大理想.而C8介于C18和CN之间,因而对黄酮苷的分离比较理想,峰形和分离也最好[18].H PL C 也可以用来测定黄酮的含量[19].2.3 高速逆流色谱分离法高速逆流色谱分离法(high speed co untercur2 rent chro matograp hy,HSCCC)是一种新的分离技术.其具有两大突出特点:(1)线圈中固定相不需要载体,因而清除了气液色谱中由于使用载体而带来的吸附现象;(2)特别运用于制备性分离,每次进样体积较大,进样量也较多[16].李彩侠等[20]提取荷叶中黄酮类化合物,经HSCCC分离纯化的效果很好,结合TL C分析、颜色反应鉴定得到两种纯度很高的黄酮醇类化合物.HSCCC对分离和制备黄酮类化合物有很大的优势,其应用前景越来越受到人们的关注.2.4 柱色谱法(1)硅胶柱色谱[17,18].此法应用范围最广,非极性与极性化合物都能用,适用于分离黄酮类、黄酮醇类、二氢黄酮醇类、二氢黄酮类、异黄酮类、黄酮苷元类.少数情况下,在加水活化后也可以用于分离极性较大的化合物,如羟基黄酮醇类及其苷类等.与硅胶88 周口师范学院学报2007年9月混存的微量金属离子,应预先用浓盐酸处理,以免干扰分离效果.(2)聚酰胺柱色谱[17,18].分离黄酮类化合物,聚酰胺是较为理想的吸附剂.其吸附强度主要取决于黄酮类化合物分子中羟基的数目、位置及溶剂与黄酮类化合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小.由己内酰胺聚合而成的尼龙-66及由己二酸与己二胺聚合而成的尼龙-66,最早应用于黄酮类化合物的分离.此法是目前最有效而简便的方法.(3)葡聚糖凝胶(Sep hadex gel)柱色谱[18].黄酮类化合物的分离,主要使用两种型号的凝胶:Sep ha2 dex G型和Sep hadex L H220型.其原理主要是吸附作用.凝胶对黄酮类化合物的吸附程度取决于游离羟基的数目.但分离黄酮苷时,分子筛的性质起主导作用.在洗脱时,黄酮苷类大体上是按相对分子质量由大到小的顺序流出柱体.(4)大孔吸附树脂分离法.该法是以大孔吸附树脂为吸附剂和分子筛的柱色谱分离形式.其原理是吸附性和分子筛性.吸附性主要来源于范德华力和氢键作用力;分子筛性来源于大孔树脂的多孔性结构产生的渗透和过滤作用.被分离的成分根据其分子的大小不同和吸附能力的差异而分离[3].近年来大孔吸附树脂在中药成分(如黄酮、生物碱等)精制纯化等领域中应用越来越广泛[21223].刘健伟等[22]对D101型(非极性)、Hz2806型(中等极性)和AB28型(弱极性)3种大孔吸附树脂进行了筛选,并对甘草中总黄酮分离纯化工艺进行了研究;王雅君等[23]则用D101大孔树脂进行了制备菟丝子总黄酮的研究.这些研究表明,大孔吸附树脂对于黄酮类化合物具有良好的分离纯化效果,与传统的分离方法相比,具有操作简便、树脂再生容易、耗费有机溶剂少、提取率高等优点.3 展望近几年来,科学家对黄酮进行了广泛而深入的研究,发现了黄酮不少令人感兴趣的新用途,黄酮类天然产物是近年来天然药物和人类健康产品研究开发的热点.从药用植物和经济植物中提取具有生理活性的黄酮作为天然药物、保健品和化妆品等行业的原料,已日益引起重视,其应用前景无限广阔.随着科学技术的不断进步和发展,黄酮类化合物的独特效能将得到不断的发掘及应用.因此,黄酮类化合物的提取和分离方法也将得到更加深层的研究和开发,已有的方法将会日趋成熟和完善,各种高效、方便快捷的新方法将会不断涌现.参考文献:[1]黄锁义,黎海妮,余美料.益母草总黄酮的提取及鉴别[J].时珍国医国药,2005,16(5):3982399.[2]姚小敏,覃成箭,羊金梅.茶叶中总黄酮的提取、鉴别及其含量测定[J].右江民族医学院学报,2005,27(6):7792 781.[3]郭京波,王向东,张燕,等.不同提取方法对苦荞类黄酮提纯得率的影响分析[J].食品科学,2006,27(10):4332 436.[4]杨红.中药化学实用技术[M].北京:化学工业出版社,2004:9.[5]胡福良,李英华,朱威,等.不同方法提取的蜂胶液中总黄酮含量的测定及抗肿瘤与抗炎作用研究[J].2005,5(3):11215.[6]毕会敏,张守勤,刘长姣.纤维素酶提取红景天总黄酮的研究[J].天然产物研究与开发,2006,18:8182821. [7]陈燕清,颜流水,黄智敏.醇溶剂回流法提取藜蒿中黄酮类化合物方法研究[J].南昌航空工业学院学报,2004, 18(3):61264.[8]徐洁昕,周方钦.白花败酱中总黄酮的提取研究[J].广州食品工业科技,2004,82(4):42243.[9]刘峙嵘,俞自由,方裕勋.微波萃取银杏叶黄酮类化合物[J].东华理工学院学报,2005,128(12):1512154. [10]唐课文,易健民,张跃超.微波辅助法从黎蒿中提取黄酮类化合物的研究[J].天然产物研究与开发,2005, 117(5):6622664.[11]刘海鹏,刘延成,马东升,等.超声波/回流法银杏叶总黄酮提取的研究[J].化学工程师,2005,119(8):49250.[12]霍丹群,张文.超声波法与热提取法提取山楂总黄酮的比较研究[J].中成药,2004,26(12):106321065. [13]李毓群,施顺清.采用先进的提取方法促进中药制剂现代化[J].中草药,2002,33(6):5722574.[14]李苑,张敏.中草药中黄酮类化合物提取工艺的研究概况[J].广东药学,1999,9(2):426.[15]Wu M L,Zhou C S,Chen L S,et al.Study on the ex2traction of total flavonoids f rom G inkgoleaves by en2 zyme hydrolysis[J].Nat Prod Res Dev,2004,16: 5572560.[16]周文华,杨辉荣,岳庆磊.生物碱提取和分离方法的研究新进展[J].当代化工,2003,32(2):1112113. [17]刘湘,汪秋安.天然产物化学[M].北京:化学工业出版社,2005:3.[18]宋晓凯.天然药物化学[M].北京:化学工业出版社,2004:8.[19]董文庚,邓晓丽.HPL C法测定银杏叶中黄酮的含量[J].理化检验:化学分册,200541(8):5632565. [20]李彩侠,张赟彬,黄国纲.荷叶提取物的分离和纯化[J].食品工业,2006(1):40241. (下转第97页)98第24卷第5期梁 丹,等:黄酮类化合物提取和分离方法研究进展 Hereditas ,1997,126(3):2112217.[18]Jiang J M ,G ill B S ,Wang G L ,et al.Metaphase andinterphase fluorescence in situ hybridization mapping of thericegenomewithbacterialartificialchromosome[J ].Proceedings of the National Academy of Science of USA ,1995,92:448724491.[19]Wei W H ,Qin R ,Song Y C ,et parativeanalyses to diseases resistant and nonresistant linesf rom maize ×Zea diploperennis by GISH[J ].Botanical Bulletin of Academia Sinica ,2001,42:1092114.[20]Li C B ,Zhang D M ,Ge S ,et al.Identification ofgenome constitution of Oryza malampuzhaen Οsis ,O.minuta ,and O.punctata by multicolor genomic in situ hybridization[J ].Theor ApplGenet ,2001,103:2042211.Analysis of ti f olia and O.alt a with genomic in situ hybridizationGUAN Ni 1,Q IU Xiao Οfen 1,SON G Fa Οjun 1,Q IN Rui 1,2(1.College of Life Science ,South ΟCentral University For Nationalities ,Wuhan 430074;2.College of Life Science ,Wuhan University ,Wuhan 430072,China )Abstract :Genomic in situ hybridization (GISH )method was used to study differentiation and relationship s between the ti f olia and O.alta genomes in the officinalis complex of the genus Ory z a .The chromosomes of ti f olia (CCDDgenomes )were hybridized with labelled probes of two CCDD genome f rom ti f olia and O.alta separating.The GISH results indicate that the homology between these two CCDD genomes is very close and differentiation is also clearly.Karyotype analysis is made based on the similar band patterns of the hybridization signal.K ey w ords :ti f olia ;O.alta ;GISH(上接第89页)[21]米靖宇,宋纯清.大孔吸附树脂在中草药研究中的应用[J ].中草药,2001,23(1):911.[22]刘健伟,陈勇,熊富良,等.骨碎补总黄酮提取和大孔吸附树脂纯化的工艺研究[J ].中国药学杂志,2006,41(16):122221224.[23]王雅君,郭澄.应用大孔吸附树脂吸附分离技术制备菟丝子总黄酮的研究[J ].中药材,2004,27(11):8612862.The ne w extraction and isolation progress of flavonoidsL IAN G Dan 1,ZHAN G Bao Οdong 2(1.College of Agriculture ,Guizhou University ,Guiyang 550025;2.School of Continuing Education ,Zhoukou Normal University ,Zhoukou 466001,China )Abstract :Flavonoids have a wide variety of physiological activity ,and many valuable results had been made.How to ex 2tract and isolate of flavonoids f rom the natural product made widely concern and its extraction and isolation methods are im 2proving .This paper reviews the application and progress of flavonoids ′different extraction and isolation methods in the re 2cent years.With the advancement of technology ,extraction and isolation methods of flavonoids will be more rapid ,efficient and perfect.K ey w ords :flavonoid ;extraction ;isolation ;progress79第24卷第5期关 妮,等:两种CCDD 型野生稻的基因组原位杂交比较分析 。
黄酮类化合物提取方法研究进展
212020年第33卷第1期 粮食与油脂黄酮类化合物提取方法研究进展宋林晓，邵娟娟（河北农业大学理工学院，河北沧州 061000）摘 要：总结了黄酮类化合物提取方法的应用情况，展望了黄酮类化合物提取方法的前景，旨在为黄酮类化合物的深入研究提供建议。
关键词：黄酮；提取方法Research progress on extraction methods of flavonoidsSONG Lin-xiao, SHAO Juan-juan(Hebei Agricultural University Institute of Technology, Cangzhou 061000, Hebei, China)Abstract: The recent application of flavonoids extraction methods were summarized. The prospect of flavonoids extraction methods was prospected in order to provide suggestions for the further study of flavonoids.Key words: flavonoid; extraction method中图分类号：TS201.1 文献标识码：A 文章编号：1008-9578（2020）01-0021-02收稿日期：2018-01-22作者简介：宋林晓（1995—），女，本科生，研究方向为食品科学与工程。
通信作者：邵娟娟（1984—），女，工程师，硕士，研究方向为粮油加工与资源开发黄酮类化合物是以C 6-C 3-C 6为基本骨架的天然化合物[1]，以糖苷或游离态（苷元）的形式广泛存在于植物中，具有独特的生物活性[2]。
如黄芪总黄酮有抗氧化性[3]，薇甘菊叶部黄酮有抑菌性、抗瘤性，降低血脂等多种功效[4]。
人类只可通过食物摄取黄酮类化合物，不同食物中所含黄酮类化合物种类也不相同，因此黄酮类化合物提取方法的研究就显得尤为重要。
新疆地产山楂总黄酮和多糖的含量测定_王晋
药物定性定量研究新疆地产山楂总黄酮和多糖的含量测定王晋*杜华**王鲁石**摘要:为进一步研究和开发山楂资源,采用微波技术辅助测定山楂中总黄酮和多糖的含量。
经测定山楂总黄酮含量为8. 14%多糖含量为9.31%。
关键词:微波技术;山楂;总黄酮;多糖;含量测定中图分类号:R285.5文献标识码:B文章编号:1006)0979(2006)01)0032)02山楂为蔷薇科植物山里红(Crataeg us pinnatifida Bgc.var. major N.E.Br.)或山楂(Cr ataegus pinnatifida Bge.)的干燥成熟果实。
主要产于江苏、浙江、安徽、河南,新疆主要产于伊犁地区112。
文献报道:山楂含有山楂酸、枸橼酸、琥珀酸、绿原酸、咖啡酸、齐墩果酸、熊果酸等有机酸和槲皮素、牡荆素、槲皮苷、金丝桃苷、矢车菊素、儿茶精等黄酮类化合物。
此外,还含有内酯、脂肪酶、蛋白质、维生素C、核黄素、胡罗卜素等。
其主要药理作用是能增强心肌收缩力,增加心输出量,减慢心率;扩张冠状血管,增加冠脉流量,降低心肌耗氧量:还有降压、降脂及抗心律失常作用;并能增加胃中酶类,促进消化及有较强的抑菌作用。
此外,还有收缩子宫、驱绦虫及解痉、镇静作用。
近年发现山楂对人脑中的衰老物质单胺氧化酶有明显的抑制作用,显示其具有延年益寿的功效122。
针对新疆丰富的山楂资源,一方面深入研究山楂的提取工艺,另一方面要充分开发利用这一优良野生果实的降血压作用,以及用于制作保健食品等。
我们运用微波技术辅助测定山楂中总黄酮和多糖的含量132。
1仪器材料与试剂1.1仪器:U V2401型分光光度计(日本岛津),M CL-3型连续微波反应器(四川大学无线电系)。
1.2材料:山楂,购置于新疆伊犁市中药材公司,烘干后粉碎置于干燥器中备用。
1.3试剂:对照品芦丁购自中国药品生物制品检定所。
其余试剂均为分析纯。
2实验方法与结果2.1样品溶液制备:取山楂细粉2g,精密称定,置于索氏提取器中,用石油醚(60e~90e)水浴回流脱脂2次(每次2h)。
比色法测定市售大山楂丸中总黄酮的含量
化学工业
何姗 （天津渤海职业技术学院 天津 ３ ０ ０ ４ ０ ２ ）
摘 要：采用以槲皮素为对照品，比色法测定大山楂丸中总黄酮的含量（λ ｍａｘ ＝ ５ｌ０ｎｍ）。绘制了标准曲线并做了线性方程回归，测得含 量为 ２．６３％。此测定方法结果准确，操作方便，重复性好，可作为大山楂丸中总黄酮物质含量测定方法。
表 １ 标准溶液浓度与吸光度的关系表
９８
科技创新导报 Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｈｅｒａｌｄ
黄酮类化合物具有 ４－ 羰基，３－ 或 ５－ 羟基和邻二酚羟基的结构，可与铝盐、铅 盐、镁盐等金属盐类试剂反应，生成有色 配合物，可用分光光度法测定其含量。利 用黄酮类化合物在亚硝酸钠的碱性溶液 中，与 Ａｌ３＋ 产生高灵敏度的橙红色配合物 （λ ｍａｘ ＝ ５ｌ０ｎｍ），从而用可见分光光度法 （比色法）测定大山楂丸中总黄酮的含量。
精密量取提取液 ５ｍＬ，按上述标准曲 线制备方法进行测定，并由标准曲线，计算 样品中总黄酮的含量。
３ 试验结果与讨论
３ ． １ 对照品与供试品的称量 利用电子天平，称取槲皮素质量为 ０．０２０９
克，大山楂丸质量 ３．３２１５ 克。 ３ ． ２ 标准曲线的绘制（ 见表 １ 及图 １ ） 。
ｎ ——溶液稀释倍数； ｍ ——待测物质质量 ｍ ｇ 。 带入公式计算得： 大山楂丸中总黄酮物质的
关键词：比色法 大山楂丸 总黄酮 含量
中图分类号： Ｇ ４ ２ ４ ． ３ １
文献标识码： Ａ
文章编号：１６７４－０９８Ｘ（２００９）０８（ｂ）－００９８－０１
山楂叶总黄酮药理作用浅析
山楂叶总黄酮药理作用浅析
史逸达
【期刊名称】《中国中医药咨讯》
【年(卷),期】2012(004)001
【摘要】山楂叶系蔷薇科植物山楂的叶子,其主要化学成分为黄酮类成分,如金丝桃苷、牡荆素、槲皮素、芦丁等,具有降压、增加冠脉流量、降低血脂,耐缺氧等作用,研究表明,山楂中所含的黄酮类成分能显著抑制高脂高胆固醇饲料喂养大鼠血清总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)浓度,显著升高高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)浓度,还能显著降低血清和肝脏丙二醛(MDA)含量,增强红细胞和肝脏超氧化物歧化酶(SOD)的活性,同时增强全血谷胱甘肽还原酶(GSH-Px)活性,促进脂质的运转和排泄,是山楂降低血脂的主要活性物质.山楂叶的药理作用:
【总页数】1页(P437)
【作者】史逸达
【作者单位】沈阳市沈河区妇幼保健所,辽宁沈阳,110013
【正文语种】中文
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