雷公藤红素逆转K562_A02细胞多药耐药的实验研究
雷公藤红素对裸鼠肝癌皮下移植瘤抑制作用的研究
雷公藤红素对裸鼠肝癌皮下移植瘤抑制作用的研究
李景源;吴刘成;郑波;邵义祥
【期刊名称】《中国癌症防治杂志》
【年(卷),期】2014(6)3
【摘 要】目的：研究天然活性化合物雷公藤红素（celastrol）对裸鼠移植肿瘤的抑制作用。方法建立人源肝癌HepG2细胞的裸鼠皮下移植肿瘤模型。20只裸鼠随机分为4组，即空白对照组和雷公藤红素高剂量组、中剂量组和低剂量组，每组分别按4.0 mg/kg、2.0 mg/kg、1.0 mg/kg雷公藤红素腹腔给药，每日一次，每周5 d，共给药30 d，实验中每5 d测量一次肿瘤体积的变化。结果雷公藤红素高剂量组、中剂量组和低剂量组的体积抑瘤率分别是89.52%、65.60%和12.21%，与空白对照组相比，高剂量组、中剂量组的差异具有统计学意义（P<0.05）。高剂量雷公藤红素给药后对裸鼠肝脏和肾脏等产生严重的毒性反应。结论雷公藤红素对裸鼠肝癌皮下移植瘤具有良好的体内抗肿瘤效果，应进一步开展药物新剂型及分子结构优化方面的研究，减少其毒副反应。%Objective To study
the potential of celastrol to inhibit growth of transplanted tumors in nude
mice. Methods Nude mice(n=20)subcutaneously injected with HepG2 cells
were randomly divided into 4 groups and treated by abdominal injection
with 0,1.0,2.0 and 4.0 mg/kg once daily five times per week. Tumor size
was measured every five days. Results Tumor volume inhibition was 12.21%
雷公藤红素的抗肿瘤作用及结构改造研究进展
文章编号 １６７２Ｇ６６３４(２０１９)０５Ｇ００９４Ｇ１２DOI １０．１９７２８/j．issn１６７２Ｇ６６３４．２０１９．０５．０１５
雷公藤红素的抗肿瘤作用及结构改造研究进展
王红敏１ 刘玉玉２ 李晓静１ 柳仁民１
(１．聊城大学药学院,山东聊城２５２０５９;２．山东齐都药业有限公司,山东淄博２５５４００)
摘 要 雷公藤红素是从中药雷公藤中分离得到的五环三萜类化合物,具有广泛的生物学活性,特别是抗肿瘤作用比较显著,但因其毒副作用大、水溶性差,受限于临床应用．笔者查阅了２００９年Ｇ２０１８年以来国内外文献,对雷公藤红素抗肿瘤作用及其结构改造工作进行综述,旨在为进一步开展结构改造工作和抗肿瘤新药研发奠定基础．
关键词 雷公藤红素;抗肿瘤作用;结构改造中图分类号 R２８５文献标识码 A
０ 引言
癌症的发生和发展是一个多步骤多阶段的复杂过程,严重威胁人类的健康和生命．虽然目前临床上有多种抗癌药物供使用,但是癌症病因复杂、易产生耐药性,而且由于抗癌药物的毒副作用等原因使得现有药物不能满足妥善治疗或个体化治疗的需要[１]．天然产物一直是抗肿瘤药物发现的重要来源,萜类化合物是一类骨架庞杂、种类繁多、数量巨大、结构千变万化又具有广泛生物学活性的一类重要的天然药物化学成分[２,３]．
雷公藤红素(Celastrol),又称为南蛇藤素,来源于传统中药卫矛科植物雷公藤(TripterygiumwilfordiiHookf),为红色针状晶体,是醌甲基型五环三萜类化合物[４,５]．雷公藤红素具有抗炎,抗病毒,免疫调节,抗肿瘤等多种药理活性,其中抗肿瘤作用尤为显著．雷公藤红素对肺癌、卵巢癌、肝癌、胃癌、白血病、结肠癌、乳腺癌等多种癌细胞具有抑制作用．自２００６年YangHJ等[６]首次报道了雷公藤红素可以诱导前列腺癌细胞凋亡,引发了对雷公藤红素抗癌机制的研究．尽管雷公藤红素具有显著的抗肿瘤作用,但因其水溶性较差,生物利用度较低,且毒副作用大[７],目前仍未有单体药物上市的报道．通过对雷公藤红素进行结构改造,提高其溶解度和生物利用度,降低其毒副作用,成为雷公藤红素结构修饰工作的一个重要方向．笔者查阅国内外相关文献,对雷公藤红素的抗肿瘤作用及其结构改造工作展开论述,旨在为进一步开展雷公藤红素结构改造工作及其药理活性研究提供参考．
青蒿琥酯逆转K562／A02细胞对阿霉素耐药性机理的研究
东南大学
Ｕｎ学
ｉｖ报（Ｍ ｅｄ医Ｓ学
ｃｉ版ＥｄＪ Ｓｏｕｔｈｅａｓｔ Ｕｎｉｖ Ｍｅｄ Ｓｃ Ｅｄ）１ ２。。６，Ｎ。ｖ；２５（６）：４４５—４４７ ｉ、’ ’ 。 ・４４５・
青蒿琥酯逆转Ｋ５６２／Ａ０２细胞对
阿霉素耐药性机理的研究
苗立云 。张祖贻
（１．南京大学医学院附属鼓楼医院呼吸科，江苏南京２１０００８；２．东南大学附属中大医院呼吸科，江苏南京２１０００９）
［摘要］目的：研究青蒿琥酯逆转Ｋ５６２／Ａ０２细胞对阿霉素的耐药性及其作用机制。方法：以对阿霉素敏感的Ｋ５６２细胞作为 对照，用Ｍ Ｔｒｒ法观察在有或无阿霉素存在条件下青蒿琥酯对培养的Ｋ５６２／Ａ０２细胞干预４８ ｈ后的生长抑制情况，流式细胞仪检 测１００ ｇ・ｍｌ 青蒿琥酯作用４８ ｈ前后Ｋ５６２／Ａ０２细胞Ｐ糖蛋白（Ｐ—ｇＰ）平均荧光强度（ＭＦＩ）的强弱，生化方法检测１００ ｇ・ ｍｌ 青蒿琥酯作用４８ ｈ前后Ｋ５６２／Ａ０２细胞内谷胱甘肽（ＧＳＨ）的含量。结果：（１）在不合阿霉素情况下，青蒿琥酯对Ｋ５６２及 Ｋ５６２／Ａ０２细胞的Ｉｃ ０分别为ｌ３．８０ ｇ・ｍｌ 和ｌ３．６２ ｇ・ｍｌ （Ｐ＞０．０５），在阿霉素存在情况下，青蒿琥酯对Ｋ５６２／Ａ０２细 胞抑制作用明显增加（Ｐ＜０．０１）；（２）与Ｋ５６２细胞Ｐ—ｇＰ的表达相比，Ｋ５６２／Ａ０２细胞Ｐ—ｇＰ高表达，青蒿琥酯处理前后Ｋ５６２／ Ａ０２细胞的ＭＦＩ无差别（Ｐ＞０．０５）；（３）青蒿琥酯处理后Ｋ５６２／Ａ０２细胞内ＧＳＨ含量较处理前明显下降（Ｐ＜０．０５）。结论：青 蒿琥酯对Ｋ５６２及Ｋ５６２／Ａ０２细胞具有细胞毒作用，且可逆转Ｋ５６２／Ａ０２细胞对阿霉素的耐药，其机制可能是通过干扰细胞内 ＧＳＨ—ＧＳＨ－ｓ．转移酶系统功能的发挥，而非对Ｐ—ｇＰ表达的影响。 ［关键词］青蒿琥酯；多药耐药；Ｋ５６２／Ａ０２细胞；谷胱甘肽 ［中图分类号］Ｒ９７９．１；Ｒ７３３．７ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１６７卜６２６４（２００６）０６—０４４５—０３
地西他滨逆转白血病K562细胞株多药耐药的作用观察
・２７０・ ２．２不良反应评价：在两组病例中均没有出现重大不良反应 和过敏反应；顺铂治疗组和联合治疗组两组病例中，不良反应 主要集中在脱发和白细胞下降，恶心、呕吐的发生率也接近 ５０％左右；联合治疗组不良反应发生率要少于顺铂治疗组，具 体情况详见表２。 吉林医学２０１４年１月第３５卷第２期 表１紫杉醇脂质体联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的临床疗效评价
表２紫杉醇脂质体联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的不良反应评价［例（％）］
３讨论 顺铂是肺癌化疗的首选药物之一，几乎所有的一线非小 细胞肺癌的化疗都与顺铂联合应用 Ｊ。紫杉醇应用广泛，是 来源于红豆杉科植物提取物中的一种天然抗肿瘤药物，其抗 癌作用主要是通过促进肿瘤细胞细胞骨架成分Ｂ一微管蛋白 的聚合，抑制Ｂ一微管蛋白的解聚，从而将肿瘤细胞“阻滞”在 有丝分裂的问期，抑制肿瘤细胞增殖而实现 。紫杉醇水溶 性较差，因此限制了其应用范围的扩大。脂质体紫杉醇是利 用脂质体作为紫杉醇的特殊载体，脂质体双分子层结构将紫 杉醇分子包封在当中。与单纯紫杉醇相比，脂质体紫杉醇改 善了紫杉醇的溶解性，使之易于透过肿瘤细胞细胞膜的脂质 双分子层结构，从而进入肿瘤细胞内部发挥治疗效应，同时吐土 降低了其本身的毒副作用、延长了半衰期 。 在本研究中，对紫杉醇脂质体联合顺铂治疗ＩＩＩｂ、１Ｖ期的 非小细胞肺癌的临床疗效及不良反应进行了评价，结果表明 紫杉醇脂质体与顺铂联合治疗晚期非小细胞肺癌有较好的临 床疗效，不良反应少，是一种既较安全、有效的治疗方法。 ４参考文献 ［１］蔡莉，孙立春，杨春雨，等．恩度联合化疗治疗中晚期 非小细胞肺癌的疗效观察［Ｊ］．中国实用内科杂志，２００７， ２７（１９）：１５４１． ［２］Ｊａｉｎ ＡＫ，Ｈｕｇｈｅｓ ＲＳ，Ｓａｎｄｉｅｒ ＡＢ，ｅｔ ａ１．Ａｐｈａｓｅ ＩＩ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ ｃｈｅｍｏｒａｄｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｗｅｅｋｌｙ ｄｏｃｅｔａｘｅｌ，ｅａｒｂｏｐｌａｔｉｎ，ａｎｄ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ｃｏｎｓｏｌｉｄａｔｉｏｎ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｗｉｔｈ ｄｏ－ ｃｅｔａｘｅｌ ａｎｄ ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ ｆｏｒ ｌｏｃａｌｌｙ ａｄｖａｎｃｅｄ ｉｎｏｐｅｒａｂｌｅ ｎｏｎ—ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｊ Ｔｈｏｒａｃ Ｏｎｃｏｌ，２００９，４（６）：７２２． ［３］郭仁宏，王金万．紫杉醇脂质体的研究进展［Ｊ］．中国肿 瘤，２００８，１７（８）：６９８． ［４］Ｃｈｅｎ Ｆｅｎｇ，Ｄｏｎｇ Ｄａｎ，Ｆｕ Ｙａｎ，ｅｔ ａ１．Ａｎｔｉ—ｔｕｍｏｒ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｐｏｌｙｍｅｒ—ｐａｅｌｉｔａｘｅｌ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ Ｍｉｅｅｌｌｅ Ａｇａｉｎｓｔ Ｍｉｃｅ Ｕ１４ Ｃｅｒｖｉｃａｌ Ｃａｎｅｅ￣［Ｊ］．Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｕ． ｎｉｖｅｒｓｉｔｉｅｓ，２０１２，２８（４）：６５６． ［收稿日期：２０１３—０７—２４编校：潘宏竹］ 地西他滨逆转白血病Ｋ５６２细胞株多药耐药的作用观察 毛正禄（延安大学附属医院，陕西延安７１６０００） ［摘要］ 目的：探讨地西他滨逆转白血病Ｋ５６２细胞株多药耐药的作用。方法：实验室培养Ｋ５６２细胞株，设立空白对照 组、伊马替尼（ＩＭ）单药组（０．１￣ｍｏｌ／Ｌ）、地西他滨（ＤＡＣ）单药组（１ ｂ￣ｍｏ］／Ｌ），以不同的药物处理细胞，利用酶标仪检测处理后细 胞在５７０ ｎｍ吸光度（ＯＤ值），计算细胞抑制率。结果：ＤＡＣ单药组Ｉ（５６２细胞株抑制率为（２Ｏ．７３±０．３３）％，ＩＭ单药组抑制率 （２４．８５±Ｉ．２２）％，空白对照组的抑制率为０，ＩＭ的抑制率与ＤＡＣ的抑制率对比差异无统计学意义（ｔ＝０．９６５，Ｐ＞０．０５）。结论： 地西他滨和甲磺酸伊马替尼对Ｉ＜５６２细胞的增殖有抑制作用，可为耐药选择提供参考。 ［关键词】地西他滨；甲磺酸伊马替尼；Ｋ５６２细胞；细胞株多药耐药 慢性粒细胞白血病（自血病，ＣＭＬ）是一种起源于多能造 血干细胞的恶性骨髓增殖性疾病，死亡率高 “。当前研究显 示，由于ＤＮＡ高甲基化在恶性血液病中广泛存在，使得白血 病的去甲基化治疗成为可能 。在常规治疗中，酪氨酸激酶 抑制剂伊马替尼（ＩＭ）能干扰酪氨酸激酶活性，持续介导细胞 问信号传导，防止白血病细胞恶性增殖 。地西他滨（ＤＡＣ）
多药耐药相关蛋白1在人肿瘤细胞系K562、A549、SGC7901和SGC7901／VCR的表达
ＨＩＮＥＳＥ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＡＮＡＴＯＭＹ Ｖｏ１．３６ Ｎｏ．６ ２０１３ 解剖学杂志２０１３年第３６卷第６期 多药耐药相关蛋白１在人肿瘤细胞系 Ｋ５６２、Ａ５４９、ＳＧＣ７９０１和ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ的表达 曹兴明 靳艳 路军秀 王国栋 高福莲 （新乡医学院，ｌ组织学与胚胎学教研室，２三全学院，３基础医学院，新乡４５３００３） 摘要 目的：探讨多药耐药相关蛋白１（ＭＲＰ１）在常见人肿瘤细胞的表达。方法：培养Ｋ５６２、Ａ５４９、ＳＣ＿Ｋ２７９０１和８ＧＣ７９０１／ ＶＣＲ细胞，ＲＴ－ＰＣＲ检测ＡＢＣＣ１ ｍＲＮＡ的表达；ＳＡＢＣ法检测ＭＲＰ１蛋白的表达。结果：４种细胞均有ＡＢＣＣ１ ｍＲＮＡ的 表达，ＳＣＡＺ７９０１／ＶＣＲ细胞的ＡＢＣＣ１ ｍＲＮＡ水平显著高于ＳＣＫ３７９０１细胞；ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ细胞ＭＲＰ１表达显著高于 ＳＧＣ７９０１。结论：ＡＢＣＣ１／ＭＲＰ１可能参与ＳＧＣ７９０１细胞获得性多药耐药。 关键词 多药耐药相关蛋白１；人肿瘤细胞系 Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ １ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ Ｋ５６２，Ａ５４９，ＳＧＣ７９０１ ａｎｄ ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ Ｃａｏ Ｘｉｎｇｙｕｅ ，Ｊｉｎ Ｙａｎ ，Ｌｕ Ｊｕｎｘｉｕ ，Ｗａｎｇ Ｇｕｏｄｏｎｇ。，Ｇａｏ Ｆｕｌｉａｎ。△ （１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｍｂｒｙｏｌｏｇｙ，２．Ｓａｎｑｕａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ， ３．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ ４５３００３，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ １（ＭＲＰ１）ｉｎ ｃｏｍｍｏｎ ｈｕｍａｎ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｋ５６２，Ａ５４９，ＳＧＣ７９０１ ａｎｄ ＳＣＫ２７９０１／ＶＣＲ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡＢＣＣ１ ｍＲＮＡ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＲＴ＿ＰＣＲ；Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭＲＰ１ ｗａｓ ｔｅｓｔｅｄ ｂｙ ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ Ａ ｉｃ（ １ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｋ５６２。Ａ５４９，ＳＧＣ７９０１ ａｎｄ ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ １ｅｖｅ１ ｏｆ ＡＢＣＣ１ ｍＲＮＡ ｉｎ ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ＳＧＣ７９０１ ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｏｆ ｏｐｔｉｃａｌ ｄｅｎｓｉｔｙ ｗａｓ（０．７３±０．２１），（０．６Ｏ±Ｏ．１８），（１．２３±Ｏ．３４）， （１．９０±０．２６）ｉｎ Ｋ５６２，Ａ５４９，ＳＣＫ；７９０１，ＳＣ４２７９０１／ＶＣＲ ｃｅｌｌｓ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ １ｅｖｅｌ ｏｆ ＭＲＰ１ ｉｎ ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ＳＧＣ７９０１ ｃｅｌｌｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡＢＣＣ１／ＭＲＰ１ ｗａｓ ｆｏｕｎｄ ｉｎ Ｋ５６２，Ａ５４９， ＳＧＣ７９０１ ａｎｄ ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ ｃｅｌｌｓ．Ａｎｄ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ＡＢ（ １／ＭＲＰ１ ｉｎ ａｃｑｕｉｒｅｄ ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ—ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ ＳＧＣ７９０１ ｃｅｌｌｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ １：ｈｕｍａｎ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ 多药耐药相关蛋白１（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ １，ＭＲＰ１）由定位于人１６ｑ１３．１的 ＡＢＣＣ１基因编码，是引起肿瘤细胞产生多药耐药的一 种重要的ＡＢＣ转运蛋白，多药耐性是影响肺癌、白血 病和胃癌等多种肿瘤疗效的重要原因ｌ】］。细胞系是肿 瘤实验研究的常用对象，肿瘤细胞Ｋ５６２、Ａ５４９、 ＳＧＣ７９０１分别来自人慢性髓性粒细胞白血病、肺腺癌 和胃腺癌，ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ为ＳＧＣ７９０１细胞经长春新 碱（ＶＣＲ）加压筛选而获得的耐药细胞，目前未见系统 地对这４种细胞在ｍＲＮＡ水平和蛋白质水平检测 ＡＢＣＣ１／ＭＲＰ１表达的报道。本研究检测这４种肿瘤 细胞ＡＢＣＣ１／ＭＲＰ１的表达情况，筛选出ＭＲＰ１高表 达的细胞系，为进行ＭＲＰ１相关的耐药实验研究打 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１—１６３３．２０１３．０６．０１２ 第１作者Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｉｎｇｙｕｅ６１ ６＠ｘｘｍｔ１．ｅｄｕ．ＣＤ △通讯作者，Ｅ—ｍａｉｌ：ｇｆｌ＠ｘｘｍｕ．ｅｄｕ．Ｃｌｌ 收稿日期：２０１３～０１—０１；修回日期：２０１３—０７—０４ 基础。 １材料和方法 １．１材料 Ｋ５６２细胞由山东大学血液研究室惠赠；Ａ５４９、 ＳＧＣ７９０１细胞系由郑州大学基础医学院组织学与胚 胎学教研室惠赠；ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ细胞亚系由第四军 医大学西京医院消化病研究所樊代明教授惠赠； ＴＲＩｚｏｌ试剂购自Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；ＲＴ－ＰＣＲ试剂盒及引物 序列均选自上海生物工程公司；兔抗人ＭＲＰ１多克隆 抗体购自北京博奥森生物公司；ＳＡＢＣ试剂盒购自北 京中山公司。 １．２细胞培养 所有细胞均使用含１０ 灭活胎牛血清、１００ Ｕ／ｍｌ 青霉素、１００ ｆｉｇ／ｍ［链霉素的ＲＰＭＩ－１６４０培养液，置 ３７℃、５ ＣＯｚ、饱和湿度的恒温培养箱中培养。 ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ细胞的培养基中含有０．５ ｆｆｇ／ｍｌ ＶＣＲ， 以维持其耐药表型，实验前２周停药。 １ ０４９
环孢菌素A联合雌激素受体抑制剂逆转K562A02细胞多药耐药的探究
中文摘要
环孢菌素Ａ联合雌激素受体抑制剂逆转Ｋ５６２／Ａ０２细胞
多药耐药的研究
东南大学医学院附属中大医院血液内科
研究生鲍文导师陈宝安
中文摘要
目的：本课题旨在研究环孢菌素Ａ（ＣｓＡ）联合雌激素受体抑制剂雷洛昔
芬（ｍｌｏｘｉｆｅｎｅ）单独及联合应用对人’慢性粒细胞白血病急性红白血病变细胞株
Ｋ５６２及其耐药细胞株Ｋ５６２／Ａ０２Ｐ糖蛋白（Ｐ．ｇｌｙｅｏｐｒｏｔｅｉｎ，Ｐ－ｇｐ）表达的影响，
以探讨它们逆转多药耐药的作用机理，为环孢菌素Ａ和雌激素受体抑制剂雷洛
昔芬作为耐药逆转剂的临床应用提供理论依据。
方法：（１）采用甲基四唑蓝法（ＭＴＴ）法检测雷洛昔芬（２．５ｍｇ／Ｌ）及
ＣｓＡ（１ｉｎｇ／Ｌ）单独及联合作用于Ｋ５６２细胞和Ｋ５６２／Ａ０２细胞一定时间柔红霉素
ｆＤＮＲ）对细胞的半数抑制量；（２）采用半定量ＰＣＲ（Ｒ１：ＰｃＲ）法检测Ｋ５６２细
胞、雷洛昔芬（２．５ｍｇ／Ｌ）及ＣｓＡ（１ｍｇ／Ｌ）单独及联合作用于Ｋ５６２／Ａ０２细胞一定
时间细胞多药耐药基因（ｍｄｒｌ基因）ｍＲＮＡ表达水平；（３）采用流式细胞仪
（ＦＣＭ）检测Ｋ５６２细胞、雷洛昔芬（２．５ｍｇ／Ｌ）及ＣｓＡ（１ｍｇ／Ｌ）单独及联合作用
于Ｋ５６２／Ａ０２细胞一定时间细胞膜上Ｐ．ｇＰ的表达。（４）ＦＣＭ检测Ｋ５６２细胞、
雷洛昔芬（２．５ｒａｇ／Ｌ）及ＣｓＡ（１ｍｇ／Ｌ）单独及联合作用于Ｋ５６２／Ａ０２细胞一定时间
细胞内ＤＮＲ浓度。（５）ＦＣＭ检测雷洛昔芬（２．５ｍｇ／Ｌ）及ＣｓＡ（１ｍｇ／Ｌ）单独及联合作用于Ｋ５６２／Ａ０２细胞一定时间细胞的凋亡。
结果：（１）逆转剂处理前后ＤＮＲ对Ｋ５６２细胞和Ｋ５６２／Ａ０２细胞的毒性作
用：ＯＫ５６２／Ａ０２、Ｋ５６２细胞ＩＣ５０值分别为２３．５ｌ和Ｏ．２９ｍｇ／Ｌ；②雷洛昔芬及ＣｓＡ
单独联合处理Ｋ５６２细胞ＩＣ５０值无明显影响；③雷洛昔芬及ＣｓＡ单独处理
Ｋ５６２／Ａ０２细胞的ＩＣ５０值分别为５．９８、８．１５ｍｇ／Ｌ，两药联合作用增强ＩＣ５０值
非致死剂量高强度聚焦超声逆转K562／AO2细胞多药耐药的实验研究
・１６・ ２００８年８月第５卷第４期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｍｅｄ Ｕｌ￣ａｓｏｕｎｄ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｖｅ￣ｉｏｎ），Ａｕｇｕｓｔ ２００８， ｏｌ ． 医
非致死剂量高强度聚焦
细胞多药耐药的实验研 超声逆转Ｋ５６２／Ａ０２
究
叶欣徐兴鲁 沈绍华杨雪 于连玲王军 赵梅 葛忠民杨宪勇 亓春花
【摘要】 目的探讨非致死剂量高强度聚焦超声（ＨＩＦＵ）逆转Ｋ５６２／Ａ０２细胞多药耐药（ＭＤＲ）
的效能及其作用机制。方法 （１）固定辐照时间或超声声强，应用不同声强或辐照时间的ＨＩＦＵ辐
照Ｋ５６２、Ｋ５６２／Ａ０２细胞株，观察ＨＩＦＵ的剂量一效应关系；（２）将Ｋ５６２／Ａ０２细胞株分组为：阿霉素组
（ＡＤＭ组）、ＡＤＭ加ＨＩＦＵ辐照组（ＨＩＦＵ组）、ＡＤＭ加维拉帕米组（ＶＲＰ组），分别观察各组细胞内的 ＡＤＭ浓度、细胞的抑制率和细胞凋亡情况；（３）检测ＨＩＦＵ干预前后Ｋ５６２／Ａ０２细胞的Ｐ—ｇＰ、ＰＤＣＤ５
表达情况。结果（１）当辐照时间一定时（５ ｓ）声强越高肿瘤细胞存活率越低，当ＨＩＦＵ声强一定时
（４００ ｃｍ ）细胞存活率随ＨＩＦＵ辐照时间延长而下降；（２）在Ｋ５６２／Ａ０２细胞株中ＨＩＦＵ、ＶＲＰ干预
均能提高细胞内ＡＤＭ浓度，ＨＩＦＵ组、ＶＲＰ组与ＡＤＭ组比较Ｐ均＜０．０１，ＨＩＦＵ组与ＶＲＰ组比较Ｐ＞
０．０５：ＨＩＦＵ组、ＶＲＰ组、ＡＤＭ组均能抑制Ｋ５６２／Ａ０２细胞的增殖和促使Ｋ５６２／Ａ０２细胞发生凋亡，
ＨＩＦＵ组、ＶＲＰ组与ＡＤＭ组比较Ｐ均＜０．０１，ＨＩＦＵ组与ＶＲＰ组比较Ｐ＞０．０５；（３）ＨＩＦＵ辐照
Ｋ５６２／Ａ０２细胞后Ｐ—ｇＰ表达明显降低，ＰＤＣＤ５表达升高。结论非致死剂量ＨＩＦＵ辐照Ｋ５６２／Ａ０２细
胞能够提高耐药肿瘤细胞内的化疗药物浓度，增加耐药肿瘤细胞的抑制率和凋亡率。非致死剂量
ＨＩＦＵ逆转ＭＤＲ的可能机理是下调耐药细胞的Ｐ—ｇＰ表达和上调ＰＤＣＤ５表达。
藤黄酸对白血病K562A02细胞的耐药逆转作用
・２５２・中国实验血液学杂志Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ西科椭懈删Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ２０１２；２０Ｃ２）：２５２—２５７
文章编号（ＡｒｔｉｃｌｅＩＤＩ：１００９－２１３７（２０１２）０２—０２５２－０６・论著－
藤黄酸对白血病Ｋ５６２／Ａ０２细胞的耐药逆转作用
田亮１’２，刘娟２，陈宝安１’２’。程坚１，丁家华１，王帅１，夏国华１，高峰‘，邵泽叶１，
张海军１”，郭青龙３，张海伟２ｒ，王磊１”，任艳艳１”，蔡晓辉１”，刘苒１＇２
东南大学医学院１中大医院血液肿瘤科，２临床肿瘤学系，
江苏南京２１０００９；３中国药科大学，江苏南京２１０００９
摘要本研究旨在探讨藤黄酸（ｇａｍｂｏｇｉｃａｃｉｄ，ＯＡ）对Ｉ（５６２／Ａ０２细胞株的耐药逆转作用及其逆转机钥。采用ＭＴＴ法检测ＧＡ对ｌ（５６２和Ｋ５６２／Ａ０２细胞的增殖抑制作用及对ｌ（５６２／Ａ０２细胞阿霉素（ＡＤＭ）耐药逆转效应；用流式细胞术检测ＧＡ联合ＡＤＭ对ｌ（５６２厦Ｋ５６２／Ａ０２细胞凋亡率的影响；ＤＡＰＩ荧光染色观察ＡＤＭ联合ＧＡ作用后细胞的形态学改变；Ｗｅｓｌｅｍｂｌｏｔ法检测ｌ（５６２及Ｋ５６２／Ａｆｔ２细胞Ｐ・糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）、存活蛋白（Ｓｕｒｖｉｖｉｎ）基因的表
逮。结果表明：ＡＤＭ作用４８ｈ押科融６２和Ｋ５６２／Ａ０２细胞增殖的ＩＣ砷值分刺为（１．４２±Ｏ．０７）∥ｍＩ和（２ｓ．４２±
１．４０）斗ｇ／ｍｌ。ＧＡ≤Ｏ．０６２５ｐｍｏｌ／Ｌ时．对Ｉ（５６２及Ｋ５６２／Ａ０２细胞椿无明显增殖抑制作用；Ｏ．０６２５ｐ．ｍｏＶＬＧＡ联
合ＡＤＭ作用于Ｋ５６２／Ａ０２细胞能增加其时ＡＤＭ的敏感性，耐药逆转倍数为１．５３。０．０６２５ｔｔｍｏｌ／ＬＧＡ联合
ＡＤＭ作用于Ｋ５６２／Ａ０２细胞４８ｈ能提高细胞的凋亡率（Ｐ＜０．０５），下调Ｓｕｒｖｉｖｉｎ及Ｐ－ｇｐ蛋白的表达（Ｐ＜０．０５）。结论：ＧＡ可以逆转Ｋ５６２／Ａ０２细胞的耐药性，增强耐药细胞对ＡＤＭ的敏感性，其机制可能与提高Ｋ５６２／Ａ０２细胞
抑制有氧糖酵解逆转白血病K562-ADM多药耐药细胞的耐药性
抑制有氧糖酵解逆转白血病K562-ADM多药耐药细胞的耐药性
抑制有氧糖酵解逆转白血病K562/ADM多药耐药细胞的耐药性
白血病是一种常见的恶性肿瘤，由于多种因素的影响，白血病患者的治疗常常面临多药耐药的问题。特别是在白血病的治疗中，有氧糖酵解在细胞耐药性中扮演着重要的角色。然而，关于有氧糖酵解如何影响白血病多药耐药细胞的研究还不够深入。因此，本文旨在探讨抑制有氧糖酵解逆转白血病K562/ADM多药耐药细胞耐药性的可能方法和机制。
白血病多药耐药细胞的形成是由于药物选择性压力，例如多次的药物暴露，导致亚克隆细胞的选择和积累。同时，白血病细胞内部的代谢重构也与多药耐药性的形成紧密相关。有氧糖酵解是细胞内主要的能量供应途径之一，白血病细胞通过高度依赖有氧糖酵解来满足其急速生长和增殖的需求。研究已经发现，白血病细胞中有氧糖酵解过程中的一些关键酶如乳酸脱氢酶A（LDHA）、磷酸果糖激酶（PFKFB3）等的表达水平显著上调，与药物耐药性密切相关。
近年来，一些研究者开始探索抑制有氧糖酵解逆转白血病多药耐药细胞耐药性的新策略。其中，LDHA作为有氧糖酵解的关键酶，被认为是一个潜在的治疗靶点。实验证实，通过抑制LDHA的表达或活性，可以显著抑制白血病细胞的增殖和降低药物耐药性。此外，一些研究还发现，靶向磷酸果糖激酶（PFKFB3）同样可以有效地逆转白血病细胞的耐药性。这些研究表明，抑制有氧糖酵解途径的关键酶可能成为白血病多药耐药细胞治疗的新方向。 除了针对有氧糖酵解途径的关键酶进行干预，一些药物或化合物也显示出抑制有氧糖酵解途径的潜力。比如，一些已经广泛应用于临床的抗肿瘤药物，如类似雌激素物质，已经被证明可以显著抑制白血病细胞的有氧糖酵解途径，从而减少细胞的耐药性。此外，一些天然产物如三七总皂苷、绿茶多酚等也显示出对白血病细胞的有氧糖酵解逆转作用。
尽管已经有一些进展，但是抑制有氧糖酵解逆转白血病多药耐药细胞的治疗方法和机制仍然存在一定的挑战。首先，不同类型的白血病细胞可能存在差异，对于有氧糖酵解途径的依赖程度也可能不同，因此需要深入研究不同类型白血病细胞的特点和耐药机制。其次，在开发针对有氧糖酵解途径的药物或化合物时，需要考虑到其选择性和毒副作用问题。此外，如何克服多药耐药细胞的逆转问题，同时减少对正常细胞的影响也是亟待解决的难题。
氧化苦参碱逆转多药耐药细胞系K562／A02耐药性的研究
2008年第35卷第
19期中
国肿瘤临床
1127
氧化苦参碱逆转多药耐药细胞系
K562／A02耐药性的研究：l=
摘要目的
：观察非细胞毒性浓度(生长率
>95％)氧化苦参碱对耐阿霉素的人白血病细胞系K562／A02多药耐
药性的逆转作用
，并探讨其逆转机制
。方法
：采用M’rr法测定氧化苦参碱的细胞毒性及其对K562／A02细胞敏感性
的影响
，用流式细胞仪检测非细胞毒性浓度的氧化苦参碱处理后K562／A02细胞膜表面糖蛋白P170表达的变化与细
胞内柔红霉素的浓度
，应用SPSSl3
．0软件包对实验结果进行统计学处理
。结果
：氧化苦参碱对K562／A02细胞有
一
定的细胞毒作用
，其非细胞毒性浓度为50
1ag／
ml
，低细胞毒性浓度(生长率为85％
～90％)为135
lag／
ml
，把非细胞毒性
剂量的氧化苦参碱作为最佳逆转浓度
，非细胞毒性浓度氧化苦参碱可显著降低阿霉素对K562／A02细胞的Ic
。使
K562／A02细胞的Ic
。由原来的(34
．9
+0
．21)
tagJ
ml降低至(13
．3
+0
．21)
Ixg／
ml
，其逆转倍数为2
．62倍
；氧化苦参碱作用于
K562／A02细胞后
，细胞膜糖蛋白P170的表达从90
．22％下调至44
．24％(19
<0
．01)
；柔红霉素外渗试验显示
，氧化苦参
碱作用于K562／A02细胞后
，细胞内化疗药物的浓度明显增加
。结论
：氧化苦参碱可部分逆转人白血病K562／A02细
胞对阿霉素的耐药性
，氧化苦参碱通过下调K562／A02细胞膜糖蛋白P170的表达
，使其将化疗药物泵出细胞外的功
能受到了抑制
，使化疗药物在白血病细胞内能达到有效浓度
，从而可以杀灭耐药的白血病细胞
，达到逆转白血病细
胞耐药性的目的
关键词氧化苦参碱K562／A02细胞多药耐药
R
eversal
ofM
ultid
rugR
esi
st
ancei
nK562／A02C
ell
sb
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PENGXi
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．ZHANGW
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．LIJ