植物体内转化酶活性的测定
植物体内转化酶活性的测定
转化酶又称蔗糖酶(β—D—呋喃型果糖苷一果糖水解酶)，是一种水解酶。植物体的库组织中，一般含有较高活性的转化酶。它能将植物体内的主要同化产物——蔗糖不可逆地水解为葡萄糖和果糖，为细胞的可溶性糖类贮库提供可利用六碳糖，以用于细胞壁、贮藏多糖及果聚糖的生物合成，并通过与呼吸作用偶联的氧化磷酸化产生能量。所以，转化酶与植物组织的生长有密切关系，是衡量同化产物的转化和利用，植物细胞代谢及生长强度的指标。
【原理】
转化酶可将非还原性糖的蔗糖水解为葡萄糖和果糖。将从植物组织中提取的酶液与蔗糖溶液保温作用一定时间后，测定产生的还原糖的量来表示转化酶活性的大小。
在碱性条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色物质)，还原糖则被氧化成糖酸及其它产物。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度量呈一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线可求出样品中还原糖的含量。
通常，在测定过程中，溶液的pH对酶活性影响很大。不同的酶及不同材料中同一种酶都有其最适的pH值。转化酶有两个影响水解蔗糖能力的解离基团，一个PKa约为7，另一个PKa约为3。不同植物材料的转化酶中这两个基团的含量不同，它们的最适pH也不同(最适pH在左右的为中性转化酶，最适pH在以下的为酸性转化酶)。所以，在测定材料中转化酶的活性之前，首先要选择适宜的PH值。
【材料、仪器与试剂】
1．材料：植物组织
2．试剂：
（1）提取缓冲液：100 mmol/L Tris-HCl 缓冲液，内含5 mmol/L MgCl2, 2 mmol/L
EDTA-Na2,2% 乙二醇，%牛血清蛋白（BSA），2%PVP，5 mmol/LDTT。 （2）透析缓冲液：25 mmol/L Tris-HCl 缓冲液，内含 mmol/L MgCl2, 1 mmol/L
EDTA-Na2,1% 乙二醇，1 mmol/L DTT。
（3）酶反应液：80 mmol/L乙酸-K3PO4和缓冲液，内含50 mmol/L蔗糖。
（4）葡萄糖标准液：1 mg/mL。
（5）3，5-二硝基水杨酸试剂：精确秤取1g 3，5-二硝基水杨酸，溶于20 ml 2 mol/L
NaOH溶液中，加入50 ml蒸馏水，再加入30 g酒石酸钠，待溶解后用蒸馏水定容至100 ml。盖紧瓶塞，勿让CO2进入。若有浑浊可过滤后使用。
材料：小麦叶片、籽粒。
3．设备
冷冻离心机，恒温水浴，分光光度计，研钵一套，磁力搅拌器，天平（感量），1 mL移液管5支，5 mL带塞试管10支。
【方法与步骤】
1．酶的提取：称取1g植物叶片，置于预冷的研钵中，分批加入5ml 提取缓冲液，冰浴研磨提取，2度下10000转离心20分钟，上清液3ml 装入透析袋中，透析袋置于透析缓冲液中4度透析过夜，期间更换透析液3次，透析后酶液定容5ml 备用。
2．酶反应：取3支5 mL具有试管，加入 mL反应液和50L 透析后的酶液，30℃水浴中反应10 min中止反应。用煮死酶液作对照（煮沸10min）。
3．还原糖含量的测定：往各反应试管中再加3，5-二硝基水杨酸试剂1 mL，沸水浴5 min，冷却至室温，于540nm比色测定生成的还原糖量。
4．标准曲线制作：取7支5 ml具塞试管，编号，按下表配置加入各种试剂液，并按上述步骤3进行，测定其吸光度值。以吸光度值为纵坐标，葡萄糖含量为横坐标，绘制标准曲线，计算反应生成的葡萄糖量：
管号 1 2 3 4 5 6 7
1mg/mL葡萄糖标准液（ml） 0
加蒸馏水量（ml） 0 3，5-二硝基水杨酸(ml）
葡萄糖含量（mg） 0
A540
5.结果计算：酶活力以mg 葡萄糖·g-1FW·h-1 表示。
酶活力（mg 葡萄糖·g-1FW·h-1）=ntFWCVVSt
【结果与计算】
转化酶的活性用还原糖量(mg／g·fw·h)表示，计算公式如下：
C表示从标准曲线查得的葡萄糖量（mg）；
FW表示组织鲜重（g）；
t表示反应时间（h）；
Vt表示提取酶液的总体积（mL）；
Vs表示测定时取用酶液体积（mL）；
n表示提取液测定中的稀释倍数。
转化酶的测定
转化酶又称蔗糖酶，是一种水解酶，植物体的库组织中，一般含有较高活性的转化酶，它能将植物体内的主要同化产物——蔗糖不可逆的水解为葡萄糖和果糖，为细胞的可溶性糖贮库提供可利用六碳糖，以用于细胞壁、贮藏多糖及果聚糖的生物合成，并通过与呼吸作用偶联的氧化磷酸化产生能量，所以，转化酶与植物组织的生长有密切关系，是衡量同化产物的转化和利用、植物细胞代谢及生长强度的指标。
试剂：
1、10%蔗糖溶液
2、葡萄糖标准液（500μg/ml）
3、l的磷酸缓冲液
4、（DNS）3，5二硝基水杨酸：将6.3g二硝基水杨酸和262 ml 2mol/l NaOH溶液，加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶中备用。
方法：1、酶的提取：1g样品剪碎后，用预冷的蒸馏水在冰浴中研磨成匀浆，定容至100ml，在冰箱中浸提3小时，4000转离心15分钟，上清液即为酶的粗提液。
2、酶活性的测定：吸酶液2ml，放入试管中，再加入的缓冲液5ml及10%蔗糖溶液1ml，在37度水浴中保温30分钟，取出后立即按3，5二硝基水杨酸法测定还原糖的含量。以煮沸酶液10分钟钝化酶的试管作对照。
3、还原糖标准曲线的制作及还原糖含量的测定
①标准曲线：取6支20ml刻度试管，编号，按下表配置不同浓度的葡萄糖标准液：
管号 1 2 3 4 5 6
葡萄糖原液量（ml） 0
加蒸馏水量（ml） 0
葡萄糖浓度（μg/ml） 0 100 200 300 400 500
在上述各管中分别加入 3，5二硝基水杨酸试剂，在沸水浴中加热5分钟，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，加蒸馏水定容至20ml，混匀，以1号管为空白，测540nm波长下的OD值。以OD值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标，绘制标准曲线。
②酶反应液中还原糖的含量的测定：吸取2ml反应液，加入 3，5二硝基水杨酸试剂，沸水浴中煮沸5分钟，冷却定容至20ml ，测定540nm波长下的OD值，查标准曲线得酶反应液中还原糖的浓度。
4、结果计算：
A=(N-N’)*V/(T*W*1000)
A：转化酶的活性(mg/gfw/h) N：酶反应液中还原糖的浓度(μg/ml)
N’：钝化酶反应液中还原糖的浓度(μg/ml) V：酶反应液的总体积
T：反应时间 W：材料鲜重
脲酶的测定方法
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卑微如蝼蚁、坚强似大象 一、脲酶测定(比色法)
脲酶是对尿素转化起关键作用的酶，它的酶促反应产物是可供植物利用的氮源，它的活性可以用来表示土壤供氮能力。
1、试剂配制：
（1） pH6.7柠檬酸盐溶液：取368g柠檬酸溶于600mL蒸馏水中，另取295g氢氧化钾溶于水，再将两种溶液合并，用1N氢氧化钠将pH调至6.7，并用水稀释至2L。
（2） 苯酚钠溶液：称取62.5g苯酚溶于少量乙醇中，加2mL甲醇和18.5mL丙酮，后用乙醇稀释至100mL（A液），保存再冰箱中。称取27g氢氧化钠溶于100mL水中（B液），保存于冰箱中。使用前，取A、B两液各20mL混和，并用蒸馏水稀释至100mL备用。
（3） 次氯酸钠溶液：用水稀释制剂至活性氯的浓度为0.9％，（1.9g次氯酸钠溶于1L水中）溶液稳定。
（4） 10％尿素溶液：10g尿素溶于100mL水中。
（5） N的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水稀释至1L，则得1mL含0.1mgN的标液，再将此液稀释10倍制成氮工作液（0.01mg/mL）。
2、操作步骤
称取5ｇ土置于50mL容量瓶中,加1mL甲苯处理,加塞塞紧轻摇15ｍｉｎ;往瓶中加入5mL10%尿素液和10mL的柠檬酸盐缓冲液(ｐＨ6.7),仔细混匀。在37℃恒温箱中培养24ｈ。然后用热至38℃的蒸馏水稀释至刻度(甲苯应浮在刻度以上),摇荡,将悬液过滤。取滤液1mL置于50mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至10mL,然后加入4mL苯酚钠溶液,并立即加入3mL次氯酸钠溶液，加入每一试剂后,立即将混合物摇匀,20ｍｉｎ后,将混合物稀释至刻度,在波长578ｎｍ处测定吸光值。脲酶活性以样品所得的吸光值减去对照样品吸光值之差,根据标准曲线求出氨态氮量。 共享知识 分享快乐
卑微如蝼蚁、坚强似大象 标准曲线绘制：分别取0、1、3、5、7、9、11、13mL氮工作液置于50mL容量瓶中，加蒸馏水至20mL，再加4mL苯酚钠溶液和3mL次氯酸钠溶液，随加随摇匀，20min后显色，定容。1h内再分光光度计上于578nm处比色。
各种酶活性测定方法
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精品 抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性的测定
过氧化氢酶（CAT）活性测定
过氧化物酶（POD）测定方法
超氧化物歧化酶（SOD）活性测定
小组第一次讨论结果：
一、抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性的测定
1.原理
APX 是植物体内重要的抗氧化酶, 主要功能是分解H2O2, 此过程通过抗坏血酸- 谷胱甘肽循环来完成。此外, 它还直接参与抗坏血酸的氧化还原代谢, 而抗坏血酸能有效地清除多种活性氧自由基。因此，APX被认为与果实的抗热性直接相关。
2.所用方法
（1）采用碘液滴定法:
称取新鲜材料1 g，剪碎置研钵中，加少量石英砂及pH值6.0 的磷酸盐缓冲液，迅速研磨成浆，20 ℃下浸提30 min，中间摇动数次，3000 r /min 离心后保留上清液即为酶液。反应底物为抗坏血酸，加入酶液2 mL，20 ℃下反应10 min 后，立即加入偏磷酸1 mL，终止酶的活动，抗坏血酸被消耗的量，可用碘液滴定剩余的抗坏血酸来进行测定，加淀粉溶液几滴作指示剂，以碘液滴定出现浅蓝色为止，记录滴定值，用底物被消耗的量来表示APX 的活性。每个处理设3 个重复。
（2）紫外吸收法：
称取1g芥蓝叶片组织，加入1.6 mL预冷的磷酸缓冲液（PBS-K）（pH 7.8）提取液（含1 mmol·L-1 AsA，3 mmol·L-1β-巯基乙醇，0.5 mmol·L-1PMSF，.
精品 2% PVP，1 mM EDTA）。用液氮研磨，提取液于4℃，12000×g离心20 min，上清液用于酶活性的测定。取0.10 ml 酶液（可视情况调整），加入1.70 ml 含0.1 mM
EDTA-Na.
精品 2的PBS（0.05 mol/L，pH7.0），再加入0.10 ml 5 mM的AsA，最后加入0.10 ml
20mM H2O2，立即在20℃下测定D290（紫外）值在一定时间内的变化，计算单位时间内AsA减少量，并求酶活性（室温下测定，缓冲液调零）。
脲酶的测定方法 2
脲酶的测定方法
一、脲酶测定(比色法)
脲酶是对尿素转化起关键作用的酶，它的酶促反应产物是可供植物利用的氮源，它的活性可以用来表示土壤供氮能力。
1、试剂配制：
（1）pH6.7柠檬酸盐溶液：取368g柠檬酸溶于600mL蒸馏水中，另取295g 氢氧化钾溶于水，再将两种溶液合并，用1N氢氧化钠将pH调至6.7，
并用水稀释至2L。
（2）苯酚钠溶液：称取62.5g苯酚溶于少量乙醇中，加2mL甲醇和18.5mL 丙酮，后用乙醇稀释至100mL（A液），保存再冰箱中。称取27g氢
氧化钠溶于100mL水中（B液），保存于冰箱中。使用前，取A、B
两液各20mL混和，并用蒸馏水稀释至100mL备用。
（3）次氯酸钠溶液：用水稀释制剂至活性氯的浓度为0.9％，（1.9g次氯酸钠溶于1L水中）溶液稳定。
（4）10％尿素溶液：10g尿素溶于100mL水中。
（5）N的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水稀释至1L，则得1mL 含0.1mgN的标液，再将此液稀释10倍制成氮工作液（0.01mg/mL）。
2、操作步骤
称取5ｇ土置于50mL容量瓶中,加1mL甲苯处理,加塞塞紧轻摇15ｍｉｎ;
往瓶中加入5mL10%尿素液和10mL的柠檬酸盐缓冲液(ｐＨ6.7),仔细混匀。在37℃恒温箱中培养24ｈ。然后用热至38℃的蒸馏水稀释至刻度(甲苯应浮在刻度以上),摇荡,将悬液过滤。取滤液1mL置于50mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至10mL,然后加入4mL苯酚钠溶液,并立即加入3mL次氯酸钠溶液，加入每一试剂后,立 即将混合物摇匀,20ｍｉｎ后,将混合物稀释至刻度,在波长578ｎｍ处测定吸光值。脲酶活性以样品所得的吸光值减去对照样品吸光值之差,根据标准曲线求出氨态
氮量。
标准曲线绘制：分别取0、1、3、5、7、9、11、13mL氮工作液置于50mL容量瓶中，加蒸馏水至20mL，再加4mL苯酚钠溶液和3mL次氯酸钠溶液，随加随摇匀，20min后显色，定容。1h内再分光光度计上于578nm处比色。
测量酶方法
氮蓝四唑（NBT）法测定超氧物歧化酶（SOD）活力
一、原理
超氧物歧化酶（superoxidedismutase , SOD）普遍存在于动、植物体内，是一种清除超 氧阴离子自由基的酶。本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（ NBT）在光下的还原作用来
确定酶活性大小。 在有氧化物质存在下， 核黄素可被光还原， 被还原的核黄素在有氧条件下 极易再氧化而产生 02,可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，后者在 560nm处有最大吸收。而 SOD可清除02，从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶活 性愈低,反之酶活性愈高。据此可以计算出酶活性大小。
二、材料、仪器设备及试剂
（一）材料；水稻或小麦叶片
（二） 仪器设备： 1.高速台式离心机； 2.分光光度计； 3.微量进样器； 4.荧光灯（反应试管处 照度为 4000Lx）； 5.试管或指形管数支。
（三） 试剂 :1. 0.05mol/L 磷酸缓冲液（ pH7.8）；
2. 130mmol/L 甲硫氨酸（ Met ）溶液：称 1.9399gMet 用磷酸缓冲液定容至 100ml（ 现用现配 ）；
3.750卩mol/L氮蓝四唑溶液：称取 0.06133gNBT用磷酸缓冲液定容至 100ml,
（避光保存 ）；
4. 100卩mol/L EDTA- Na2溶液：称取 0.03721gEDTA— Na2用磷酸缓冲液定容至 1000ml ；
5. 20卩mol/L核黄素溶液：称取 0.0753g核黄素用蒸馏水定容至 1000ml（避光保 存）。
三、 实验步骤
1. 酶液提取
取一定部位的植物叶片（视需要定，去叶脉） 0.5g于预冷的研钵中，1ml预冷的磷酸缓冲液
在冰浴上研磨成浆，加缓冲液使终体积为 5ml。取1.5〜2ml于1000rpm下离心20min，上
清液即为SOD粗提液。
2. 显色反应
取5ml指形管（要求透明度好）4支，2支为测定管，另2支为对照管，按下列加入各溶液： 试剂（酶）用量（ ml）终浓度（比色时） 0.05mol/L磷酸缓冲液 1.5130mmol/L Met溶液
苯丙氨酸解氨酶（PAL）在植物中的作用及其活性测定方法
苯丙氨酸解氨酶（PAL）在植物中的作用及其活性测定方法
生命科学实验
117篇原创内容
公众号
苯丙氨酸解氨酶（PAL）催化 L-苯丙氨酸解氨生成反式肉桂酸，是连接初级代谢和苯丙烷类代
谢、催化苯丙烷类代谢第一步反应的酶，也是苯丙氨酸代谢途径的关键酶和限速酶。莽草酸途
径产生的莽草酸通过分枝酸、预苯酸经转氨作用生成苯丙氨酸，从而进入苯丙烷类代谢途径，
苯丙烷类代谢可生成反式肉桂酸、香豆酸、阿魏酸、芥子酸等中间产物，这些中间产物可进一
步转化为香豆素、绿原酸，也可以形成 CoA酯，再进一步转化为木质素、黄酮、异黄酮、生物
碱、苯甲酸酯糖苷等次生代谢产物。一切含苯丙烷骨架的物质都由该代谢途径直接或间接生
成。在生物次生物质代谢中具有防紫外线伤害、抵抗病原体的侵害、保持花粉生活力及形成植
物花青素等多种重要作用。该酶在不同组织中、不同的内外因素调节下，含量水平及其基因表
达的时空方式均有所不同。
1.PAL对植物生理代谢的意义植物的代谢分为初级代谢和次级代谢。植物的次级代谢有多条途
径，苯丙烷类代谢途径是其中很重要的一条。苯丙烷类途径生成的黄酮、异黄酮、生物碱等次
生代谢产物在植物的生长发育过程中起着重要的作用，所以PAL对植物的生理意义非常重大。
1.1在木质化中的作用
在植物的木质化组织中含有较高的PAL活性。用分离的百日草叶肉细胞研究了苯丙烷类代谢酶类
与木质素、管状分子形成和细胞分化的关系，发现在百日草细胞分化过程中，木质素的合成及
管状分子形成与PAL 活性的增加成正相关，细胞溶质中的 PAL 活性在木质化之前迅速上升，微
粒体和细胞壁的 PAL 活性在木质化期间快速增加。
1.2在植物色素形成过程中的作用花色素是植物花朵、果实和叶片颜色的重要组成部分，花色素
等的合成可由苯丙烷类产物反香豆酰 CoA 经过类黄酮途径生成，该过程与 PAL 密切相关。如苋
红素是中央种子目植物所特有的色素，当用白光、蓝光或红光照射尾穗苋黄化苗后，发现 PAL
植物生理指标检测方法
植物组织中可溶性糖含量的测定
在作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为 NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。
Ⅰ蒽酮法测定可溶性糖
一、原理
糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。
该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。
糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm ，故在此波长下进行比色。
二、实验材料、试剂与仪器设备
（一）实验材料
任何植物鲜样或干样。
（二）试剂
1. 80 ％乙醇。
2. 葡萄糖标准溶液（ 100 μg/mL ）：准确称取 100 mg 分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至 100 mL ，使用时再稀释 10 倍（ 100 μg/mL ）。
植物生理指标测定
实验22过氧化物酶活性的测定
过氧化物牌是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶，它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系，在植物生长发育过程中，它的活性不断发生变化，因此测量这种酶，可以反映某一时期植物体内代谢的变化。通过本实验了解过氧化物酶的作用，掌握常用的测定过氧化物酶的方法一愈创木酚法。
一、原理
在过氧化物酶(peroxidase)催化下,H2O2将愈创木酚氧化成茶褐色产物。此产物在470m处有最大光吸收，故可通过测470 nm下的吸光度变化测定过氧化物酶的活性。
二、材料、仪器设备及试剂
(一)材料
马铃薯块茎。
(二)仪器设备
722型分光光度计，离心机，研钵，容量瓶，量筒，试管，吸管。
(三)试剂
(1)0.05 mol/L.pH5.的磷酸缓冲液。 (2)0.05 mo/L愈创木份溶液。
(3) 2%H202。 (4)20%三氯乙酸。
三、实验步骤
(一)酶液的制备
取5.0g洗净去皮的马铃薯块茎，切碎放入研钵中，加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆。将匀浆液全部转人离心管中,于3000g离心10 min,上清被转人25 mL,容量瓶中。沉淀用5 mL磷酸缓冲液再提取两次，上清液并人容量瓶中，定容至刻度，低温下保存备用。
(二)过氧化物酶活性测定
酶活性测定的反应体系包括:2.9 mL.0.05 mol/L磷酸缓冲液; 1.0ml.2%H2O2 ；
1.0mL.0.05mol/L愈创木面和0.1mL酶液。用加热煮沸5min的酶成为对照，反应体系加人酶液后，立即于37C水浴中保温15min.然后迅速转人冰浴中，并加人2.0ml.20%三氯乙酸终止反应，然后，过虑(或5000xg离心10min),适当稀释.470mm波长下测定吸光度。
四、结果计算
以每分钟内A470变化0.01为1个过氧化物酶活性单位(u)。 过氧化物酶活性=∆𝐴470×𝑉𝑇𝑊×𝑉𝑠×0.01×𝑡[u/（g.min）]
5种酶测定方法
丙二醛含量(MDA)
原理
丙二醛（MDA）是由于植物官衰老或在逆境条件下受伤害，其组织或器官膜脂质发生过氧化反应而产生的。它的含量与植物衰老及逆境伤害有密切关系。测定植物体内丙二醛含量，通常利用硫代巴比妥酸(TBA)在酸性条件下加热与组织中的丙二醛产生显色反应，生成红棕色的三甲川（3、5、5－三甲基恶唑2、4－二酮），三甲川最大的吸收波长在532nm。但是测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶性糖，糖与硫代巴比妥酸显色反应产物的最大吸收波长在450nm处，在532nm处也有吸收。植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测定植物组织中丙二醛与硫代巴比妥酸反应产物含量时一定要排除可溶性糖的干扰。此外在532nm波长处尚有非特异的背景吸收的影响也要加以排除。低浓度的铁离子能显著增加硫代巴比妥酸与蔗糖或丙二醛显色反应物在532、450nm处的吸光度值，所以在蔗糖、丙二醛与硫代巴比妥酸显色反应中需要有一定的铁离子，通常植物组织中铁离子的含量为100－300μg·g－1Dw，根据植物样品量和提取液的体积，加入Fe3＋的终浓度为0.5nmol· L－1。在532nm、600nm和450nm波长处测定吸光度值，即可计算出丙二醛含量。
三、材料、仪器设备及试
1. 材料：植物叶片。
2. 仪器设备：离心机，分光光度计；电子分析天平；恒温水浴；研钵；试管；移液管（1ml、5ml）、试管架；移液管架；洗耳球；剪刀。
3. 试剂：
10％三氯乙酸：50gTCA 用水定容至500ml
0.6％硫代巴比妥酸（TBA）溶液：0.6gTBA 溶于100ml水中（加少量1mol/L NaOH溶解）
采用赵世杰(1994)方法，略有改动。
称取新鲜材料0.2 g，加入8 ml 10%TCA（三氯乙酸）溶液 (分三次加入，注意冲洗研钵)，在预冷研钵上充分研磨，4000 rpm离心10 min。取上清液2 ml(对照加2 ml蒸馏水)，加入2 ml 0.6%TBA(硫代巴比妥酸)(用10%的TCA溶液配制)溶液，加塞，摇匀。沸水浴15 min，取出试管冷却，再次离心10 min，取上清液测定450 nm、532 nm、600 nm波长处OD值。5次重复。
土壤酶活性实验报告(3篇)
第1篇
一、实验目的
本次实验旨在通过测定土壤酶活性，了解土壤中酶的分布、活性以及与土壤理化性质的关系，为土壤质量评价和植物生长提供科学依据。
二、实验材料与方法
1. 实验材料
- 土壤样品：采集于我国某典型农田，分为0-20cm和20-40cm两个土层。
- 仪器设备：分光光度计、pH计、微孔板、酶标仪、水浴锅、离心机等。
- 试剂：葡萄糖、果糖、丙酮、盐酸、硫酸铵、磷酸二氢钾、氯化钠等。
2. 实验方法
（1）土壤样品处理：将采集的土壤样品风干、磨碎，过筛后备用。
（2）土壤酶活性测定
1）酸性磷酸酶活性测定：采用分光光度法，以磷酸苯二钠为底物，测定在酸性条件下土壤酶催化产生的酚的量。
2）β-葡萄糖苷酶活性测定：采用分光光度法，以对硝基苯-β-D-葡萄糖苷为底物，测定在碱性条件下土壤酶催化产生的对硝基苯的量。
3）蛋白酶活性测定：采用分光光度法，以酪蛋白为底物，测定在碱性条件下土壤酶催化产生的酪氨酸的量。
（3）土壤理化性质测定
1）土壤pH值测定：采用pH计测定土壤溶液的pH值。
2）土壤有机质测定：采用重铬酸钾容量法测定土壤有机质的含量。
3）土壤全氮、全磷、全钾测定：采用凯氏定氮法、过硫酸钾消解-分光光度法、火焰光度法分别测定土壤中的全氮、全磷、全钾含量。
三、实验结果与分析
1. 土壤酶活性测定结果 表1 土壤酶活性测定结果
| 土层 | 酸性磷酸酶（U/g） | β-葡萄糖苷酶（U/g） | 蛋白酶（U/g） |
| --- | --- | --- | --- |
| 0-20cm | 10.2 | 9.8 | 8.5 |
| 20-40cm | 8.9 | 8.3 | 7.2 |
由表1可知，0-20cm土层中的酸性磷酸酶、β-葡萄糖苷酶和蛋白酶活性均高于20-40cm土层。
土壤酶活活性测定方法
土壤酶活活性测定方法
酶活性是指酶在一定时间内单位体积或质量产生的酶催化反应产物的数量。酶活性在土壤中起着关键作用，因为它们能够将无机和有机物质转化为可供植物吸收的形式。常用的土壤酶活性指标包括脲酶、过氧化氢酶、蔗糖酶、碱性磷酸酶等。
下面将介绍常见的土壤酶活活性测定方法：
1.脲酶活性测定：脲酶能够催化尿素的水解，生成氨和二氧化碳。用于测定土壤脲酶活性的方法是通过在土壤样品中加入一定浓度的尿素，经过一定时间后，测量生成的氨量来评估脲酶活性水平。
2.过氧化氢酶活性测定：过氧化氢酶是一种重要的抗氧化酶，能够将过氧化氢分解为氧气和水。测定土壤中过氧化氢酶活性的方法是在土壤样品中加入过氧化氢底物，经过一定时间后，通过测量反应体系中氧气释放速率来评估过氧化氢酶活性水平。
3.蔗糖酶活性测定：蔗糖酶是一种能够催化蔗糖水解生成葡萄糖和果糖的酶。测定土壤中蔗糖酶活性的方法是在土壤样品中加入一定浓度的蔗糖，经过一定时间后，测量生成的葡萄糖和果糖的量来评估蔗糖酶活性水平。
4.碱性磷酸酶活性测定：碱性磷酸酶是一种能够催化有机磷酸盐水解为无机磷酸盐的酶。测定土壤中碱性磷酸酶活性的方法是在土壤样品中加入一定浓度的磷酸酯底物，经过一定时间后，通过测量反应体系中无机磷酸盐生成的速率来评估碱性磷酸酶活性水平。 除了以上几种常见的土壤酶活性指标外，还有其他一些指标可以用于评估土壤酶活性，如脱氢酶、葡萄糖氧化酶等。具体选择测定方法应根据实际需求和研究目的来确定。
总结起来，土壤酶活活性测定方法是通过测定土壤中特定酶活性水平来评估土壤质量和生态系统功能的一种手段。常见的土壤酶活性指标包括脲酶、过氧化氢酶、蔗糖酶、碱性磷酸酶等。选择适当的测定方法需要考虑实际需求和研究目的。