鸡蛋清溶菌酶的提取及电泳鉴定
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还具有一定的保健作用；有促进血液凝固和止血作 用；有组织再生和瘢痕形成促进作用等。
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2.5 科学研究中的应用 利用溶菌酶专一性地水解细胞壁的特点, 了解微生 物细胞壁的构造，分解细胞壁后制备原生质体，从 而用于微生物育种以及微生物分类等学术研究的领 域。
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3 溶菌酶的生产现状及前景
上世纪50年代，国外开始了溶菌酶的工业化生产。 采用从鸡蛋清中直接结晶得溶菌酶，产品用来制作 口服药剂。 上世纪60年代，又开发了离子交换法，进一步降低 了生产成本，提高了产品质量，达到了注射级药品 质量要求。 上世纪70年代，开发了亲和色谱技术，主要用于高 纯度生化试剂的生产。
近来超滤法与其它方法相结合，进一步提高了溶菌 酶的生产工艺水平。
目前国内有大连生化、天津东原、烟台金梓等厂家 生产，初步满足了国内科研及医药工业的需求。
进口溶菌酶，存在着价格较高，进口环节复杂等诸 多方面的限制。
国产溶菌酶工业刚刚起步，生产规模小，工业水平 落后，产品的质量与国际标准差距较大。存在提取 率低，处理量小和产品比活低等缺点。
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我国是世界上最大的产蛋国家，原料来源丰富，目 前鲜蛋基本作为初级食品食用，深加工不足。而发 达国家的鲜蛋加工业可以加工鲜蛋总产量的 40%。
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鸡蛋清溶菌酶是动植物中溶菌酶的典型代表，也是 目前了解最清楚的溶菌酶之一。
白色、无臭结晶粉末，味甜，易溶于水，遇碱易破 坏，不溶于丙酮、乙醚中。
其分子是由 129 个氨基酸残基排列构成的单一肽链， 有四对二硫键，分子量Leabharlann Baidu14300。
碱性球蛋白，碱性氨基酸残基及芳香族氨基酸如色 氨酸残基的比例很高。其等电点为 pH10.7；其最适 pH 值为 pH7 左右，最适温度为50℃。
热变性随着有机溶剂的增加而直线下降。
溶菌酶对变性剂相对不敏感。在 6M 盐酸胍溶液中， 酶完全变性，但在8M尿素中则不变性。
吡啶、十二烷基磺酸钠等对酶有抑制作用，氧化剂 能使酶钝化。
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2 溶菌酶的应用
水解N-乙酰葡萄糖胺与N-乙酰胞壁酸之间β-1，4糖苷， 破坏革兰氏阳性细菌细胞壁而具有溶菌作用，是一 种专门作用于微生物细胞壁的水解酶，又称细胞壁 溶解酶（Muramidase）。
为弥补奶粉的不足，可以向其中添加适量溶菌酶， 制成母乳化奶粉，可以加强婴幼儿的抗感染能力， 可以促进婴儿胃内乳酪蛋白形成细微凝乳，有利 于婴儿的消化吸收。特别对早产婴儿，有防止体 重减轻、预防消化器官疾病、增进体重等功效。
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2.2 酶工程上的应用 近年来，溶菌酶已成为基因工程及细胞工程必不可少 的工具酶，用以提取菌体内的活性物质如核酸、酶及 活性多肽等。
第一层为外稀薄层，贴附在蛋清膜上，占整个蛋清的
23.3%； 第二层为外浓厚层（亦称中层浓厚蛋白层），约
57.2%； 第三层为内稀薄层，约占 16.8%； 第四层为系带膜状层（亦称内浓厚层），为一薄层， 加上与之连为一体的两端系带，约占 2.7%。
广泛存在于鸟类和家禽的蛋清中，哺乳动物的泪液、 唾液、血浆、尿、乳汁、其它体液中及白细胞和组织 （如肝、肾）细胞内，而且部分植物、微生物中也含 有此酶。
人溶菌酶的活性是最高的，大约为鸡蛋清溶菌酶酶活 力的3倍。但是蛋清中溶菌酶含量最丰富，约为0.3%0.4%左右，而且蛋清来源广泛，因此多数商品溶菌酶 是从蛋清中提取的。
鸡蛋清溶菌酶的提取及电 泳鉴定
药学院 2010-12-19
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实验目的：
1 了解鸡蛋清溶菌酶的性质、常用制备方法及原理 2 掌握盐析法分离蛋白质原理及操作 3 掌握SDS-PAGE鉴定蛋白纯度的原理及操作
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1 溶菌酶的性质
溶菌酶 (Lysozyme, EC 3.2.1.17) 由英国细菌学家弗莱明 (Fleming)在1922年在人的眼泪、唾液中发现的。
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2.3 发酵工业上的应用 溶菌酶制备酵母膏，则不仅可以提高浸膏量的收率， 还可以大大缩短酵母膏的制备时间。 溶菌酶还可用于菌体内含物质的提取。
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2.4 医学上的应用 溶菌酶制备的口腔药片或漱口液
治疗副鼻窦炎、口腔溃疡、扁平苔藓和渗出性中耳 炎等疾病。
作口服剂可抑制流行性感冒和腺病毒的生长、抗感 染及抗炎症，还具有多种药理作用。
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不规则的椭圆体，比较容易结晶，结晶形状随结晶 条件而异，有菱形八面体、正方形六面体及棒状结 晶等。用X射线衍射测得此酶的体积为45×30×30Ǻ。
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性质非常稳定：当 pH 值在1.2-11.3 范围内剧烈变化 时，其结构几乎不变。
遇热也很稳定，pH 值 4-7、100℃处理1分钟仍保持 原酶活性；pH值 5.5、50℃加热 4 小时后，酶活不受 影响。但是，在碱性条件下，溶菌酶的热稳定性较 差，易变性。
1kg鸡蛋大约8元，提取出溶菌酶，可以得到3.5g， 溶菌酶纯品售价60 元/1g左右。因此，进行溶菌酶的 提取工艺研究，有着重大的科学意义和现实意义。
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4 溶菌酶的提取工艺
蛋清的组成成分
蛋清又称蛋白，是一种胶体物质，约占蛋重的 45%～ 60%，颜色为微黄色。 鸡蛋清实际分为四层，由外向内的结构是：
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目前美国、加拿大、荷兰、法国、德国、丹麦、意 大利、日本等国家均生产溶菌酶，其产量与日俱增。 近年来，溶菌酶被用作天然防腐剂，极大的促进了 其市场需求，每年以10%的速率增长，现在市场规模 约为700吨。
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我国的食品工业、精细化工业、医药工业对溶菌酶 具有较大的需求。我国于上世纪70年代采用离子交 换法生产溶菌酶。
医疗、食品防腐及生物工程中，特别是在食品防腐 方面，以代替化学合成的食品防腐剂，具有较好应 用价值。
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2.1 食品工业上的应用 选择性的分解微生物的细胞壁，而不能作用于其 它物质，主要应用于海产品、水产品、乳制品和 干酪的保鲜，低度酒、糕点及饮料的防腐，以及 水产熟制品及肉类熟制品的防腐保鲜。 加入到饮料中，如钙奶、乳酸饮料中, 也可起到防 蛀牙、爽口的作用。
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2.5 科学研究中的应用 利用溶菌酶专一性地水解细胞壁的特点, 了解微生 物细胞壁的构造，分解细胞壁后制备原生质体，从 而用于微生物育种以及微生物分类等学术研究的领 域。
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3 溶菌酶的生产现状及前景
上世纪50年代，国外开始了溶菌酶的工业化生产。 采用从鸡蛋清中直接结晶得溶菌酶，产品用来制作 口服药剂。 上世纪60年代，又开发了离子交换法，进一步降低 了生产成本，提高了产品质量，达到了注射级药品 质量要求。 上世纪70年代，开发了亲和色谱技术，主要用于高 纯度生化试剂的生产。
近来超滤法与其它方法相结合，进一步提高了溶菌 酶的生产工艺水平。
目前国内有大连生化、天津东原、烟台金梓等厂家 生产，初步满足了国内科研及医药工业的需求。
进口溶菌酶，存在着价格较高，进口环节复杂等诸 多方面的限制。
国产溶菌酶工业刚刚起步，生产规模小，工业水平 落后，产品的质量与国际标准差距较大。存在提取 率低，处理量小和产品比活低等缺点。
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我国是世界上最大的产蛋国家，原料来源丰富，目 前鲜蛋基本作为初级食品食用，深加工不足。而发 达国家的鲜蛋加工业可以加工鲜蛋总产量的 40%。
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鸡蛋清溶菌酶是动植物中溶菌酶的典型代表，也是 目前了解最清楚的溶菌酶之一。
白色、无臭结晶粉末，味甜，易溶于水，遇碱易破 坏，不溶于丙酮、乙醚中。
其分子是由 129 个氨基酸残基排列构成的单一肽链， 有四对二硫键，分子量Leabharlann Baidu14300。
碱性球蛋白，碱性氨基酸残基及芳香族氨基酸如色 氨酸残基的比例很高。其等电点为 pH10.7；其最适 pH 值为 pH7 左右，最适温度为50℃。
热变性随着有机溶剂的增加而直线下降。
溶菌酶对变性剂相对不敏感。在 6M 盐酸胍溶液中， 酶完全变性，但在8M尿素中则不变性。
吡啶、十二烷基磺酸钠等对酶有抑制作用，氧化剂 能使酶钝化。
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2 溶菌酶的应用
水解N-乙酰葡萄糖胺与N-乙酰胞壁酸之间β-1，4糖苷， 破坏革兰氏阳性细菌细胞壁而具有溶菌作用，是一 种专门作用于微生物细胞壁的水解酶，又称细胞壁 溶解酶（Muramidase）。
为弥补奶粉的不足，可以向其中添加适量溶菌酶， 制成母乳化奶粉，可以加强婴幼儿的抗感染能力， 可以促进婴儿胃内乳酪蛋白形成细微凝乳，有利 于婴儿的消化吸收。特别对早产婴儿，有防止体 重减轻、预防消化器官疾病、增进体重等功效。
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2.2 酶工程上的应用 近年来，溶菌酶已成为基因工程及细胞工程必不可少 的工具酶，用以提取菌体内的活性物质如核酸、酶及 活性多肽等。
第一层为外稀薄层，贴附在蛋清膜上，占整个蛋清的
23.3%； 第二层为外浓厚层（亦称中层浓厚蛋白层），约
57.2%； 第三层为内稀薄层，约占 16.8%； 第四层为系带膜状层（亦称内浓厚层），为一薄层， 加上与之连为一体的两端系带，约占 2.7%。
广泛存在于鸟类和家禽的蛋清中，哺乳动物的泪液、 唾液、血浆、尿、乳汁、其它体液中及白细胞和组织 （如肝、肾）细胞内，而且部分植物、微生物中也含 有此酶。
人溶菌酶的活性是最高的，大约为鸡蛋清溶菌酶酶活 力的3倍。但是蛋清中溶菌酶含量最丰富，约为0.3%0.4%左右，而且蛋清来源广泛，因此多数商品溶菌酶 是从蛋清中提取的。
鸡蛋清溶菌酶的提取及电 泳鉴定
药学院 2010-12-19
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实验目的：
1 了解鸡蛋清溶菌酶的性质、常用制备方法及原理 2 掌握盐析法分离蛋白质原理及操作 3 掌握SDS-PAGE鉴定蛋白纯度的原理及操作
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1 溶菌酶的性质
溶菌酶 (Lysozyme, EC 3.2.1.17) 由英国细菌学家弗莱明 (Fleming)在1922年在人的眼泪、唾液中发现的。
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2.3 发酵工业上的应用 溶菌酶制备酵母膏，则不仅可以提高浸膏量的收率， 还可以大大缩短酵母膏的制备时间。 溶菌酶还可用于菌体内含物质的提取。
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2.4 医学上的应用 溶菌酶制备的口腔药片或漱口液
治疗副鼻窦炎、口腔溃疡、扁平苔藓和渗出性中耳 炎等疾病。
作口服剂可抑制流行性感冒和腺病毒的生长、抗感 染及抗炎症，还具有多种药理作用。
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不规则的椭圆体，比较容易结晶，结晶形状随结晶 条件而异，有菱形八面体、正方形六面体及棒状结 晶等。用X射线衍射测得此酶的体积为45×30×30Ǻ。
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性质非常稳定：当 pH 值在1.2-11.3 范围内剧烈变化 时，其结构几乎不变。
遇热也很稳定，pH 值 4-7、100℃处理1分钟仍保持 原酶活性；pH值 5.5、50℃加热 4 小时后，酶活不受 影响。但是，在碱性条件下，溶菌酶的热稳定性较 差，易变性。
1kg鸡蛋大约8元，提取出溶菌酶，可以得到3.5g， 溶菌酶纯品售价60 元/1g左右。因此，进行溶菌酶的 提取工艺研究，有着重大的科学意义和现实意义。
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4 溶菌酶的提取工艺
蛋清的组成成分
蛋清又称蛋白，是一种胶体物质，约占蛋重的 45%～ 60%，颜色为微黄色。 鸡蛋清实际分为四层，由外向内的结构是：
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目前美国、加拿大、荷兰、法国、德国、丹麦、意 大利、日本等国家均生产溶菌酶，其产量与日俱增。 近年来，溶菌酶被用作天然防腐剂，极大的促进了 其市场需求，每年以10%的速率增长，现在市场规模 约为700吨。
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我国的食品工业、精细化工业、医药工业对溶菌酶 具有较大的需求。我国于上世纪70年代采用离子交 换法生产溶菌酶。
医疗、食品防腐及生物工程中，特别是在食品防腐 方面，以代替化学合成的食品防腐剂，具有较好应 用价值。
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2.1 食品工业上的应用 选择性的分解微生物的细胞壁，而不能作用于其 它物质，主要应用于海产品、水产品、乳制品和 干酪的保鲜，低度酒、糕点及饮料的防腐，以及 水产熟制品及肉类熟制品的防腐保鲜。 加入到饮料中，如钙奶、乳酸饮料中, 也可起到防 蛀牙、爽口的作用。