山羊痘病毒属病毒检测技术研究进展
——６６—— ——簟 ■ 中国动物检疫２０１１年第２８卷第１０期
山羊痘病毒属病毒检测技术研究进展
肖 雯 。，聂福平 ～，王昱 ～，肖进文 ～，李应国。，３刘 力
（１．西南大学动物科技学院，重庆北碚４００７１５；
２．重庆出入境检验检疫局，重庆江北４０００２０；３．重庆进出口食品安全工程技术研究中心，重庆江北４０００２０）
摘要：山羊痘病毒属包括山羊痘病毒、绵羊痘病毒和牛结节疹病毒，分别引起山羊痘、绵羊痘和牛结节疹，感染动物发热、局
部或全身出现丘疹或结节，损坏皮张，产乳量下降，造成严重经济损失并具有重要的公共卫生意义。文章就近年来国内外对该类病
毒在病原学、血清学、分子生物学等方面的检测技术与方法进行综述，以促进对羊痘病毒检测技术的进一步研究和发展。 关键词：羊痘病毒；检测；研究进展
中图分类号：￥８５２．６５４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００５．９４４Ｘ（２０１１）１０．００６６．０４
山羊痘病毒属（Ｃａｐｒｉｐｏｘｖｉｒｕｓ，ＣａＰＶ）包括山羊
痘病毒（Ｇｏａｔｐｏｘ ｖｉｒｕｓ，ＧＰＶ）、绵羊痘病毒（Ｓｈｅｅｐｐｏｘ
ｖｉｒｕｓ，ＳＰＶ）和牛结节疹病毒（Ｌｕｍｐｙ ｓｋｉｎ ｄｉｓｅａｓｅ
ｖｉｒｕｓ，ＬＳＤＶ），属于痘病毒科（Ｐｏｘｖｉｄｄａｅ）脊椎动物
痘病毒亚科（Ｃｈｏｒｄｏｐｏｘｖｉｒｄａｅ），分别引起山羊痘、
绵羊痘和牛结节疹，感染动物表现为发热，皮肤、黏
膜、器官表面广泛性丘疹或结节，皮肤水肿，淋巴结
肿大，消瘦，产乳量大幅度降低，严重时导致死亡，给
养殖业带来较大的危害，造成严重的经济损失，阻碍
国际贸易［１－２］ｏ山羊痘最早于公元前２００年在欧洲发
现，绵羊痘最早于１３世纪在英国发现，山羊痘和绵羊
痘统称羊痘，是动物痘病中最为严重的一种，发病率
５０％～８０％，病死率２０％～８０％，其中羔羊致死率可达
１００％。世界各国均有羊痘发病和流行的相关报道，目
前非洲北部、中东和亚洲的部分国家流行较为严重。
羊痘病毒可作为生物武器，美国疾病控制中心（ＣＤＣ）
将其划归到ＩＩ类危险病毒。此外，中国、印度、瑞典有
人感染羊痘病毒的报道，因此羊痘在公共卫生方面也
有要意义［３】。牛结节疹于１９２９年在赞比亚首次发生，
主要分布在非洲，发病率３％～８５％，死亡率差异很大，
一般为１％～２％，但在某些情况下可达２０％～８５％，近
年来，随着国际贸易的日益频繁，该病在非洲以外地
区扩散的趋势。世界动物卫生组织（ＯＩＥ）将山羊痘、
绵羊痘和牛结节疹列为法定通报传染病，我国将山羊
痘、绵羊痘列为一类动物疫病［４］。
１ 病原学检测技术
１．１ 电镜观察
ＣａＰＶ是一种亲上皮性的病毒，病畜的皮肤丘疹
和结节、黏膜、血液、鼻腔分泌物、肺部病损组织和淋
基金项目：国家质检总局科研项目（２００９ＩＫＯ２７）（２０１０ＩＫ０１５）
通讯作者：李应国，刘力 巴结内存在大量病毒粒子，可作为病原分离培养的病
料标本，切片负染后，直接在透射电镜下观察病毒粒
子进行诊断。由于羊痘属三种病毒形态相似，且与正
痘病毒也很难区别，需要尽可能多观察以确定病毒形
态。该方法检出率低，耗时长，发病区往往无这样的专
业设备，难以满足快速诊断的需要。
１．２病毒培养
ＣａＰＶ可在山羊、绵羊、牛的组织培养细胞上生
长，原代或次代羔羊睾丸（ＬＴ）细胞和羔羊肾（ＬＫ）细
胞最为敏感，尤其是毛用绵羊细胞，也可在某些传代
细胞系中增殖，如ＢＨＫ．２１、Ｖｅｒｏ．Ｅ６细胞等［５】。周碧
君等［６ 研究表明，组织病料对Ｖｅｒｏ—Ｅ６细胞的适应
性比对ＢＨＫ－２１细胞要好，前者可用于临床组织样本
中羊痘病毒的初次分离。病毒接种后２４ ｈ出现细胞病
变，３ ｄ后整个细胞单层出现病变，特征为细胞膜收缩
并与周围细胞分离，圆化，染色质贴近细胞膜。病毒分
离培养特异性较高，但耗时、费力，需要较高的专业知
识和技能，因而在应用上受到限制。
２血清学检测技术
２．１ 中和试验（ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ｔｅｓｔ，ＮＴ）
机体感染ＣａＰＶ后主要产生细胞免疫应答，仅产
生低水平的中和抗体，因此该方法敏感性不高 】。但
是，感染病毒后痊愈的动物在其血清中可检测到较高
水平的中和抗体。
２．２荧光抗体试验（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｅｓｔ，ＦＡＴ）
山羊痘病毒抗原可在感染的组织培养破片上进
行ＦＡＴ来鉴定，但该方法操作繁琐，有非特异性反应
的问题，难以推广 。
２．３ 琼脂凝胶免疫扩散试验（ａｇａｒ ｇｅｌ
ｉｍｍｕｎｏｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｔｅｓｔ，ＡＧＩＤ）
ＡＧＩＤ最早应用于６０年代，可用于羊痘病毒沉 中国动物检疫２０１１年第２８卷第１０期 ＇脯・— ——６７——
淀抗原的检测，后来利用甲硫氨酸对山羊痘抗原进
行标记，极大地提高了对山羊痘抗体的检测敏感性。
ＡＧＩＤ操作简单、需要设备少、价格便宜等特点而得到
广泛应用，但其敏感性相对较低，适于基层兽医开展
山羊痘病例的诊断 】。
２．４ 对流免疫电泳（ｃｏｕｎｔｅｒ ｉｍｍｕｎｅ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，
ＣＩＥ）
ＣＩＥ是一种常用的检测抗原或抗体的方法，１９８８
年首次用于检测羊痘病毒抗体，结果显示用灭活的抗
原与抗体具有同等的敏感性，与ＡＧＰ相比，其检出率
更高。１９９９年，Ｊｏｓｈｉ等用生理盐水溶液替代巴比妥
缓冲液，改进的后ＣＩＥ与常规ＣＩＥ相比，可提高检测
的灵敏度。周碧君等［９】研究发现ＣＩＥ能提高对抗原或
抗体的分辨能力，较ＡＧＩＤ敏感且速度快。该方法比
较简单经济，但需要一定的设备。
２．５间接血凝试验（ｉｎｄｉｒｅｃｔ ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ，
ＩＨＡ）
ＣａＰＶ本身不能凝集红细胞，因此利用致敏的绵
羊红细胞进行间接凝集实验非常有用，如反向被动
血凝试验（ｒｅｖｅｒｓｅｄ ｐａｓｓｉｖｅ ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ，
砌，ＨＡ）主要用于临床痘疹痂皮和感染细胞中ＧＰＶ
抗原的定量测定。ＩＨＡ用于实验室检测ＣａＰＶ比
ＡＧＩＤＴ和ＣＩＥ更敏感。在各种类型的致敏红细胞中，
用戊二醛与鞣酸致敏可大大提高检测的灵敏度，在绵
羊痘的诊断中效果较好 ｍ。
２．６乳胶凝集试验（１ａｔｅｘ ａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ ｔｅｓｔ，ＬＡＴ）
ＬＡＴ在多种抗体、抗原检测系统中被广泛应用，
是一种不需要昂贵的设备，操作简便、快速的检测方
法，特别适合在田间和农场使用。１９９６年，Ｒａｏ等
首次建立了检测羊痘的乳胶凝集试验，其敏感性可与
ＣＩＥ相当。
２．７酶联免疫吸附试验（ｅｎｚｙｍｅ．１ｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏ
ｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ，ＥＬＩＳＡ）
ＥＬＩＳＡ操作便利、快速、敏感、特异性强，便于自
动化等优点而被广泛应用。国外己建立了多种检测
ＣａＰＶ抗原或抗体的ＥＬＩＳＡ方法。Ｃａｍｔ“ 建立了用
于检测从山羊、绵羊、牛的活组织样品中分离的羊痘
病毒的抗原捕捉ＥＬＩＳＡ方法，适合于组织培养物中的
病毒检测。１９９７年Ｒａｏ等［１ 建立了用于检测皮肤活
组织中的ＧＰＶ抗原的免疫捕捉ＩＣ．ＥＬＩＳＡ方法，特异
性８０％￣１００％，敏感性７０％～８６％，该法不能与绵羊痘
区别诊断。１９９９年Ｒａｏ等［１ 建立了用于检测ＧＰＶ
抗体的Ａｖｉｄｉｎ．ｂｉｏｔｉｎ（抗生素蛋白．生物素）ＥＬＩＳＡ
方法，特异性为９１．８％，敏感性为９４．１％。然而，目前国
内外还暂无牛结节疹ＥＬＩＳＡ检测方法报道。 Ｐ３２蛋白抗原在ＥＬＩＳＡ中反应性好，灵敏度、特
异性较ＡＧＩＤ高，可进行批量样品的检测，与国际通
用的ＮＴ比较，有与其他痘病毒也无交叉反应、不需要
组织培养条件、检测样本量大、便于推广等优点［１１－１４１，
但是，其跨膜区对细胞有毒性，使其表达量较低，重组
Ｐ３２蛋白很难纯化［１ ，而截取跨膜区会对Ｐ３２蛋白免
疫原性有一定影响［１ ，因而推广受到限制。目前，Ｐ３２
蛋白的体外表达已成为国际上羊痘研究的热点［１ 之 。
３分子生物学检测技术
随着聚合酶链式反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ
Ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）方法的日益成熟，该技术已广泛用于
病毒的分类、鉴定和疾病诊断。ＣａＰＶ属于双股ＤＮＡ
病毒，更适于ＰＣＲ检测ｎ 之 。已报到的羊痘病毒
ＰＣＲ检测方法中，引物多根据编码羊痘衣壳蛋白Ｐ３２
和反向末端重复序列（Ｉｎｖｅｒｔｅｄ ｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｐｅａｔ，ＩＴＲ）
设计。国外Ｉｒｅｌａｎｄ［２ 和Ｈｅｉｎｅ等【 根据Ｐ３２基因序
列设计了相应的引物，建立了检测皮肤样品中羊痘病
毒的ＰＣＲ方法，并利用限制性内切酶做了进一步的
确诊。Ｍａｒｋｏｕｌａｔｏｓ等口 针对ＳＰＶ的ＩＴＲ和Ｑ微
管蛋白基因设计３对引物，建立了用于检测皮肤组织
中ＳＰＶ的多重ＰＣＲ技术，该方法敏感性和特异性较
好，但偶尔会出现假阴性结果。Ｈｏｓａｍａｎｉ等【２ 依据
ＧＰＶ和ＳＰＶ的Ｐ３２基因序列的差异，建立了区分山
羊痘和绵羊痘的限制性片段长度多态性（ＰＣＲ．ＲＦＬＰ）
方法。在国内，郭巍等［２ 根据Ｐ３２基因和ａ微管蛋
白基因序列设计２对引物，建立了山羊痘的诊断方法，
扩增出Ｐ３２基因序列与Ｇｅｎｂａｎｋ上收录的序列同源
性达９８％。康文玉等［２９】依据羊痘Ｐ３２基因序列，建立
了快速、特异、敏感、可定量、可同时检测大量样品的
实时荧光定量ＰＣＲ技术。韩若婵等口。 根据Ｐ３２基因
和ＩＴＲ设计２对引物，建立的多重ＰＣＲ方法。Ｓｔｒａｔａ
Ｙ［３ｕ等通过进化树比对分析羊痘病毒基因组末端
４６６ ｂｐ片段，建立的半巢式ＰＣＲ方法，分别与绵羊痘
病毒、羊口疮病毒和牛疱疹病毒进行ＰＣＲ比对检测，
该方法检测羊痘病毒的特异性高。
此外，还有针对ＣａＰＶ其他基因建立ＰＣＲ方法
的研究。如Ｍａｎｇａｎａ Ｖｏｕｇｉｏｕｋ等［３ 】基于山羊痘病毒
的ＫＳ．１和Ｉｎｓ—ｌ基因序列设计引物鉴定了６株在细
胞培养物上培养的ＳＰＶ，能将其与接触传染性脓疱皮
炎病毒和疱疹病毒区分开。程振涛等［３。 针对山羊痘
病毒基因组ｇｐ０６４区域约６４ ｂｐ的基因片段设计一
对ＰＣＲ引物和一条ＴａｑＭａｎ．ＭＧＢ探针，建立了ＦＱ．
ＰＣＲ和标准曲线，用该方法对山羊痘临床皮肤痘疹材
料和人工感染动物材料进行ＧａＰＶ核酸检测，为山羊
痘临床快速高效地诊断和山羊痘病毒感染羊只的发
山羊痘自然病例的病理形态学观察及诊断
收稿日期 2003-09-17 修回日期 2004-04-02程国富 男 1963年生 在职博士生 副教授.工作单位 华中农业大学动物医学院 武汉430070山羊痘自然病例的病理形态学观察及诊断
程国富李红文周诗其谷长勤胡薛英
!华中农业大学动物医学院"武汉430070#
摘要对湖北省某地发生的以高热~皮肤出现丘疹~消瘦~母羊流产~羔羊死亡率高为特征的疾病 进行了病例调查~临床症状~大体剖检以及病理组织学检查 结果表明在感染山羊的皮肤上皮细胞~气管粘膜上皮细胞中发现有嗜酸性病毒包涵体存在 其他脏器均有不同程度的病变 根据临床症状~流行病学特点以及病理变化确诊该病为山羊痘 并讨论了该疾病的可能发病机制 关键词山羊痘 病理变化 包涵体 诊断中图法分类号S852.3
山羊痘是由山羊痘病毒
感染引起的山羊热性急性接触性传染病 1J 根据资
料该病主要流行于南非~中东以及欧洲~印度~亚洲
的部分地区 2～4J 目前在我国诸多省份如河北~陕
西~江苏~浙江~福建等均有发生 5～7J 山羊痘病毒
为山羊痘病毒属
与绵羊痘病毒有交叉抗原 8 9J 在自然情况下 该
属病毒具有各自特定的宿主 2 3J 病羊的唾液~皮
肤水疱中含有大量的病毒 健羊可通过直接或间接
地接触病羊而感染 吸血昆虫可作为传播媒介 7～9J
耐过山羊可获得坚强免疫力 9J
2002年7～8月份对湖北省某市发生的以高
热~皮肤出现丘疹~消瘦~母羊流产~羔羊死亡率高为
特征的疾病 进行了病例调查~临床症状~大体剖检
以及病理组织学检查 诊断为山羊痘 现将结果报告
如下
*材料与方法
*+*病料采集
送检病羊及死亡山羊经病理剖检 并采取皮肤~
气管~肺脏~肝脏~心肌~子宫~小肠~淋巴结~胆囊等
组织 10 中性福尔马林溶液固定备用
*+,组织切片及染色
将所取病变组织作石蜡包埋~切片 进行~. .染色和包涵体染色 10J *+-计算机病理图象分析
使用~PIAS-1000病理图文分析系统对包涵体形态进行定量分析
云南山羊痘流行毒株P32基因的克隆与表达
２４ 中国兽医杂志２００８年（第４４卷）第７期
云南山羊痘流行毒株Ｐ３２基因的克隆与表达
姚 俊，李华春，高华峰，单于乃纯，张念祖
（云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室国家外来动物疫病诊断实验室，云南昆明６５０２２４）
中图分类号：Ｑ７８６ 文献标识码：Ｂ 文章编号：０５２９—６００５（２００８）０７—００２４—０２
山羊痘是由山羊痘病毒引起的一种严重的、高
度接触传染的动物疾病，被国际兽疫局（ＯＩＥ）列为
Ａ类动物传染病。临床上以体温升高、全身性或局
部性皮肤痘疹及内脏病变（特别是肺）乃至死亡为特
征。山羊痘病毒（ＧＴＰＶ）属痘病毒科脊索动物亚科
羊痘病毒属的成员，该属其他成员还有绵羊痘病毒
（ＳＰＰＶ）、疙瘩皮肤病病毒（ＬＳＤＶ）。Ｐ３２抗原是一
种结构蛋白抗原，包含有一个主要的抗原决定簇，存
在于所有的羊痘病毒属的３个成员中。针对山羊痘
病毒与副痘病毒属存在免疫交叉反应，缺乏有效的
鉴别诊断试剂盒，本研究克隆表达出羊痘病毒属特
异的Ｐ３２蛋白，为进一步研制抗体及抗原检测试剂
盒奠定前期工作基础。
收稿日期：２００７一。卜２３ 作者简介：姚俊（１９７２－），男，助理研究员，硕士，主要从事预防 １材料与方法
１．１ 材料
１．１．１ 山羊痘病毒标准阳性血清，购自中国兽医药 品监察所。
１．１．２质粒、大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）及限制性内切酶
ｐＭＤ１８Ｔ—Ｐ３２（ＸＷ）重组质粒，为克隆测序时构建。
Ｐ３２基因两端均含有ＢａｍＨ Ｉ、Ｈｉｎｄ ＩＩＩ酶切位点。
ｐＥＴ２８ａ质粒、ＤＨ５ａ、ＢＬ２１（ＤＥ３）大肠杆菌，由云南
农业大学张以芳教授惠赠。ＢａｍＨ Ｉ、Ｈｉｎｄ Ｉｌｌ、 Ｈｉｎｆ Ｉ限制性内切酶，购自ＴａＫａＲａ宝生物工程
（大连）有限公司。
１．１．３ 分子生物学试剂 质粒抽提纯化试剂盒，
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司。ＤＮＡ凝胶回收试剂盒、ＤＮＡ连 接试剂盒、ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ、ＩＰＴＧ，宝生物工程（大连）
我国羊痘的防治
我国羊痘的防治
张建滨
【摘 要】羊痘是一种急性、热性、高度接触性的传染病.本文介绍了近年来我国羊痘的流行情况,阐述了羊痘的实验室诊断与免疫现状,分析了羊痘防控工作面临的挑战,如羊养殖方式落后、羊痘的基础免疫和调运监管难度大、企业与科研机构实验室生物安全监管难度大等,以期为我国羊痘的防治工作提供参考.
【期刊名称】《中国动物检疫》
【年(卷),期】2017(034)007
【总页数】3页(P85-87)
【关键词】羊痘;流行特点;实验室诊断;防控建议
【作 者】张建滨
【作者单位】山东省滨州市滨城区畜牧局,山东滨州 256600
【正文语种】中 文
【中图分类】S855.3
羊痘，又叫羊“天花”，按照被感染动物绵羊与山羊上的病原基因序列差别，将该病分为绵羊痘与山羊痘[1]。世界动物卫生组织（OIE）将绵羊痘和山羊痘列为须通报动物疫病，我国将其列为一类动物疫病[2]。该病是一种急性、热性、高度接触性传染病，发病率高，发病急，严重影响羊毛、羊绒和肉制品的质量及产量，给世界各国养羊业造成了巨大的经济损失[3-4]。当前世界各国的科研机构针对羊痘抗体诊断技术的研究较多，我国也有一些研究机构生产出相应的抗体检测试剂盒，但是产品的灵敏度与特异性在临床血清样品检测中并不尽如人意，导致我国在绵羊痘和山羊痘的检疫诊断、净化措施与防控对策方面仍存在诸多问题[5]。本文就羊痘在我国的流行情况、实验室诊断现状与羊痘的防控方面进行了综述
羊痘虽然在我国大部分省份内均有发生，但其发生与流行具有较明显的地域性[5]。据农业部兽医公报数据统计，2009—2016年除西藏、河南、上海、北京、辽宁没有通报疫情外，其他大部分省均有疫情发生，如宁夏、甘肃、青海、内蒙、湖南的疫情在80起以上，云南、福建、浙江、江苏、陕西、安徽、新疆、陕西、贵州的疫情在25起以上[5]。其中，甘肃、青海、宁夏等我国西北地区省份羊痘通报疫情数量最多，且流行也最为严重。究其原因有以下几个方面：一是我国西北地区羊养殖量庞大，但羊痘免疫的比例不高；二是引种防疫不够，容易引入疾病；三是该病毒具有很强的耐干燥性，在干燥的痂皮内能成活数月至数年，西北地区的干燥气候给羊痘病毒的传播提供了便利条件。
山羊痘病的诊断与防治
．钓・ 兽医临诊 ｕＶＥｓＴＯＣＫＡＮＤ ＰｏＵＬＴＲＹ｜ＮｏＵｓＴｉｔＹＮｏ ２６６ 一起羔羊大肠杆菌病的诊治 昊同平 林兆京 （１．福建省南平市延平区畜牧兽医水产局，福建 动物疫病预防控制中心） 根据发病情况、临床症状、解剖变 化和实验室检验诊断为羔羊大肠杆菌 病。 南平３５３０００；２．福建省南平市 ５治疗措施 中图分类号：￥８５８．２６ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００８—０４１４（２０１１）０６—００８０—０１ 羔羊大肠杆菌病，俗称羔羊白痢。 是由致病性大肠杆菌引起的一种以败 血症和剧烈腹泻为特征的急性传染 病，主要通过消化道传染，感染率和死 亡率高，呈地方性流行或散发。是对羔 羊危害较严重疾病之一。如果对该病 控制不好，会对养羊业造较大的经济 损失。 １ 发病情况 我区大横镇养羊专业户罗某共饲 养本地山羊２３１只。其中成年羊ｌ１３只。 羔羊１ｏ８只。２０１１年３月１１ Ｅｔ羊群突然 发病，发病的全部是羔羊，以高热、精 神沉郁、腹泻和出现明显的中枢神经 紊乱为主要的症状，用青霉素、链霉 素、庆大霉素等药物治疗均无效，到３ 月１６日发病羔羊５３只，发病率４９．０７％ （５３／１０８），多为１周龄左右羔羊，死亡３１ 只，死亡率２８．７％（３１／１０８），致死率 ５８．４９％（３１／５３），该羊场卫生条件极差。 ２临床症：Ｏｒ 病羊精神沉郁，结膜潮红，食欲不 振，体温升高达４ｌ～４２℃，腹部胀气，继 之出现呼吸困难。呈典型的腹式呼吸， 口流白沫，鼻流粘液，步态不稳，部分 羔羊关节肿大，喜卧．头向后仰或弯向 一侧，最后在昏迷中死亡， ３解剖变化 解剖８只病死羊．肛门周围被稀血 便污染（８／８）；前胃积食，膨胀，真胃粘 膜有陈旧性出血斑（６／８）；肠系膜水肿。 肠内容物呈小豆粥样．肠粘膜有散在 出血点（８／８）；腹水增多，呈橘红色，并 有恶臭味（７／８）；全身淋巴结均肿大，尤 以肠系膜淋巴结为甚，外观黑紫色．切 面多汁（５／８）；肝肿大，质脆，表面有点 状出血（４１８）；心冠和心外膜有出血点 收稿日期：２０１１－０４—１８ 和出血斑（３／８）；肺表面有大量的出血 点（３，８）。 ４实验室检验 ４．１镜检 取死亡不久羔羊的淋巴结、肝、 脾、肺及肾组织进行触片．取心包液做 涂片，革兰氏染色镜检，可见革兰氏阴 性、红色、单个散在的短杆菌。 ４．２细菌培养 无菌取病死羊的心、肝、脾病料分 别接种于普通琼脂平板．３７℃培养 ２４ ｈ后形成圆形隆起、光滑、湿润、半 通明的无色菌落。 ４．３生化试验 该菌可发酵葡萄糖、麦芽糖、乳 糖、蔗糖，产酸产气，三糖铁斜面和底 部均变黄，产气但不产生Ｈ２Ｓ。 ５．１ 隔离消毒 健康羊和病羊隔离饲养，健康羊 异地放牧，羊舍、食槽及周围环境用消 毒净每日消毒一次。被污染的场地要 严格消毒，每天用２％～３％烧碱喷雾消 毒一次。 ５＿２治疗 （１）病羔羊，肌肉注射拜有利注射 液（主要成分为环丙沙星），每只１ ｍＬ。 复方止泻灵（主要成分为穿心连），每 公斤体重０．２ ｍＬ，每天２次，连用５ ｄ。 重病羔羊采用静脉注射５％葡萄糖生 理盐水３００ ｍＬ￣Ｊ＂液．同时注射５％碳酸 氢钠溶液２０ ｍＬ；（２）饮水中加百病消； （３）饲料内ＪＪｎ５／万的氟派酸原粉。并增 加多种维生素，增强机体的抗病力。 采取上述措施５ ｄ后。全场恢复正 常，未见新病例发生。除严重的５只死 亡外，其他病羊治愈，共死亡羊３６只， 致死率６７．９３％（３６／５３）治愈率达 ７２．７３％（１６，２２）。 山羊痘病的诊断与防治 王志强（山西省交口县动检站，山西交口０３２４００） 中图分类号：￥８５８．２６ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００８—０４１４（２０１１）０６—００８０—０２ 山羊痘是由痘病毒科（Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ） 山羊痘病毒属（Ｃａｐｏｆｐｏ Ｘｕｉｒｕｓ）的山 羊痘病毒（Ｇｏａｔ Ｐｏｘ Ｖｉｍｓ）引起的急性 热性接触性传染病。国际动物卫生组 织将其列为Ａ类动物疫病，我国将其 列为一类动物疫病。其特征是羊全身 皮肤，尤其是无毛或少毛的皮肤、黏膜 上发生特异的痘疹。痘初期为丘疹，后 变为水疱，随后变为脓疱，脓疱干结成 痂。脱落后痊愈。山羊痘对羔羊致死率 高，给养羊业带来严重的经济损失，挫 伤了农民养羊的积极性。 １ 临床症状 收稿日期：２０１１－０４—２５ 发病羊精神萎顿．食欲减少或不 食，体温升高到４１ ２℃．伴有咳嗽、寒 颤。先在皮肤上出现明显的充血斑点． 随后出现眼睑肿胀，眼结膜出血；眼角、 鼻腔流出脓性或浆液性分泌物：在腹股 沟、腋下和会阴等部位、甚至全身出现 红斑、丘疹、结节、水泡，严重的可形成 脓胞。甚至全身皮肤出现红斑．随后红 斑逐渐增大，突出，形成丘疹结节。结节 在几天内形成水泡，化脓，最后结痂脱 落而愈。病程约２—３周；病羊口腔、咽喉、 舌头等处亦发生多个丘疹，化脓形成溃 疡，发臭，严重影响饮食；发生羊痘后， 病羊常伴有并发症，如呼吸道炎症、肺 炎以及孕羊流产等。在痘病发展过程
山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因的表达与细胞凋亡的相关性
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 中国兽医杂志２０１２年（第４８卷）第４期
山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因的表达
与细胞凋亡的相关性
关会敏 ，冉雪琴 ，姬志林。，王嘉福 。
（１．贵州大学动物科学学院，贵州贵阳５５００２５；２．楚雄医药高等专科学校医学检验系，云南楚雄６７５０００；
３．贵州大学农业生物工程省重点实验室，贵州贵阳５５００２５）
摘要：以贵州本地分离纯化的山羊痘病毒为试验材料，感染Ｖｅｒｏ细胞，通过台盼蓝、吖啶橙／溴乙锭荧光染色分析细胞的 死亡及凋亡比例；经特异性ＰＣＲ从山羊痘病毒基因组中分离出山羊痘病毒抗凋亡蛋白样基因，基因长５３１ ｂｐ，含有完整的编 码框，与绵羊痘病毒抗凋亡蛋白基因的相似性为９７ ，因此确定为山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因。进一步研究山羊痘病毒抗凋 亡蛋白基因在Ｖｅｒｏ细胞中的表达，结果显示，病毒感染Ｖｅｒｏ细胞２４ ｈ时没有检测到凋亡现象，山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因 的ｍＲＮＡ水平最高；感染４８ ｈ时，Ｖｅｒｏ细胞的凋亡率上升到１３ ，山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因的表达量随之下降。结果表 明，山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因的表达量与Ｖｅｒｏ细胞的凋亡呈负相关，有助于病毒在细胞内的生存和侵染等过程。 关键词：山羊痘病毒；抗凋亡蛋白基因；基因表达
中图分类号：￥８５２．６５ ９．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：０５２９—６００５（２０１２）０４—０００３—０４
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉ—ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｐｒｏｔｅｉｎ ｇｅｎｅ ｉｎ ｇｏａｔ ｐｏｘ ｖｉｒｕｓ
ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｌｅｖａｎｃｅ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ Ｖｅｒｏ ｃｅｌｌｓ
ＧＵＡＮ Ｈｕｉ—ｍｉｎ ’ ，ＲＡＮ Ｘｕｅ—ｑｉｎ ，ＪＩ Ｚｈｉ—ｌｉｎ。，ＷＡＮＧ Ｊｉａ—ｆｕ ・。
（１．Ｆａｃｕｌｔｙ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ ５５００２５，Ｃｈｉｎａ；２．Ｆａｃｕｌｔｙ ｏｆ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ Ｃｈｕｘｉｏｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｃｈｕｘｉｏｎｇ ６７５０００，Ｃｈｉｎａ；３．Ｌａｂ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ ５５００２５，Ｃｈｉｎａ）
牛结节性皮肤病
牛结节性皮肤病
作者：何欣
来源：《新农业》2022年第04期
牛结节性皮肤病简称LSD，也叫牛结节疹、牛疙瘩皮肤病、牛结节性皮炎，是由痘病毒科、山羊痘病毒属的LSD病毒（LSDV）引起的一种急性、热性、全身性感染疫病。山羊痘病毒属还包括山羊痘病毒和绵羊痘病毒，三者之间亲缘关系很近，并存在交叉免疫保护。该病主要危害养牛业，是OIE法定报告的疫病之一，我国将其列为二类传染病管理。
LSD临床症状主要以发热、皮肤出现结节为特征，有的黏膜和器官表面出现广泛性结节，病牛伴有流泪、流涕、皮肤水肿、表皮增生、肌体消瘦、淋巴结肿大，体温41℃以上，稽留热型，产奶量显著下降，公牛暂时性或永久性不育，母牛流产等症状，瘤体包裹流产胎儿，肉牛生产性能下降。皮肤结节主要在头颈部、四肢、生殖器和乳房部位，40%～50%的病畜会出现全身病变，导致病牛的皮张无法使用。牛感染该病后，5%～85%发病，20%死亡率。
病牛的唾液、眼睛分泌物、精液和皮肤结痂皮等含有LSDV。病畜及其产品的接触可传播此病，蚊虫等叮咬也可传播，多发生在蚊、蝇、蜱等动物叮咬吸血活跃的季节，具有一定的季节性。LSDV抵抗力强，在坏死的皮肤结节上可存活达33天之久，在风干的皮革中可以存活18天，在阴暗的棚舍中可以存活数月。-80℃可保存10年。55℃2小时和65℃30分钟均可将其灭活。LSDV对强酸、强碱、氯仿、乙醚、甲醛等敏感。黄牛、奶牛、水牛等均为易感动物，家兔和羊等动物也可被感染。
自然潜伏期为7天，世界上首次报道是在1929年的赞比亚，逐渐向北扩散到津巴布韦、博茨瓦纳，主要在南非和撒哈拉以南的非洲地区呈地方性流行，1989年从非洲大陆蔓延到以色列、伊朗、巴基斯坦和沙特阿拉伯等国家，2013年土耳其报道该病，2015年希腊和俄罗斯也报道该病，2016年开始在欧洲蔓延。2019年我国的新疆地区首次报告LSD，截止到2021年，全国共有新疆、江西、福建、浙江、安徽、广东、广西、内蒙古、云南、海南、四川、山东、宁夏、陕西、重庆共计15个省、自治区和直辖市报告了LSD，基本遍布我国的东西南北各个方向。后分析认为LSD传入大概与跨境活牛贸易和走私活牛有关。严防这个环节有增加消灭该病的可能性。
山羊送检血样检测疫病种类及方法
山羊送检血样检测疫病种类及方法
作者：何涛
来源：《当代畜禽养殖业》 2018年第9期
摘要：本文以山羊血液检测为例，总结山羊送检血液检测疫病的种类及方法，旨在提高山羊疫病检测技术，检测结果为规模养殖场和养殖户提供科学依据，从而更好地预防山羊疫病的发生。
关键词：山羊；送检血样；检测；疫病种类；方法
为了更好地预防控制山羊疫病的发生，规模养殖场都会对山羊进行血液样品采集和检测工作。本文从山羊血液检测的角度简单总结了山羊送检血液检测疫病的种类及方法，以期为准确地为山羊的采血及检测提供参考意见。
1 山羊血液样品采集
（1）采集方法。采集山羊血液前所有工作人员穿好防护服，戴上乳胶手套，准备好采血所需的一次性采血注射器及碘酒、酒精等器械和药品。由助手站立保定好羊只，采取颈静脉采血方式采血。
保定好羊只后，采血部位用手术剪剪毛，先涂擦碘酒，后涂擦酒精消毒。采血者用一只手按压静脉下端，使静脉血液充盈膨胀，另一只手持一次性采血注射器，先抽拉针筒活塞，针管预留1～2mL空气，45°角进针斜插入静脉，有血液流出。缓慢抽拉针筒活塞，尽量避免产生气泡，抽取5mL的血液。采集好的血液抽拉针筒活塞，使血液离顶端有2～3mL的空气，盖好原针头保护套。采血后注射器需倾斜放置，夏天常温下静置30～40分钟，冬天需放在温水中静置30～40分钟，等待血清析出。
（2）样品保存。血清析出后，把针头脱出，一手斜拿离心瓶，一手将注射器针头端沿离心瓶管壁缓慢推注血清3mL。盖好离心瓶盖子，用记号笔在离心管瓶盖上做好编号，用保鲜袋装好，保鲜袋内随血清瓶存放有小纸条，书写编号对应的羊只栏舍耳号，放置在冰箱冷冻层。需要送检时用冰块和保温箱保存送检到当地动物疫病预防控制中心检测。
2 检测疫病种类
（1）口蹄疫。口蹄疫是发生于牛、羊、猪等偶蹄动物的重大动物疫病。该病属于人畜共患病，一经确诊必须及时上报，立即封锁疫区，采取扑杀措施，消灭传染源，防止疫病传播。山羊口蹄疫的临床表现为发烧、流口水、口腔黏膜和蹄冠皮肤长水泡、蹄底开裂，严重者蹄不着地，蹄壳脱落[1]。
羊痘病的流行病学分析及防治
羊痘是一种传染性极强的绵羊病毒，广泛分布于亚洲。病原体属于山羊痘病毒属，是脊椎动物痘病毒的六个属之一。引起羊痘的病毒与山羊痘病毒和块状皮肤病病毒在抗原和遗传上密切相关。该疾病通过直接接触传染性动物和间接接触受污染物体传播；例如，病毒可以在常温下在干痂中存活多年，而在羊毛上可以存活两个月。受感染的绵羊可能会在疾病的每个阶段传播病毒，甚至可以在病变消退后长达八周持续散毒。另一种传播途径是通过苍蝇叮咬等节肢动物传播。当感染羊痘的羊在羊群之间移动时，羊痘就会在羊群之间传播。羊痘可以迅速传播，并导致受感染的动物在几天内死亡。羊痘主要见于羔羊，典型症状是发热和瘫痪。眼睛和鼻子的黏膜，以及皮肤的无毛部分会出现红色斑点形式的痘。广大养殖户在养殖过程中，应注意预防该病，避免羊痘的发病和流行，从而获得尽可能多的利益。1动物流行病学与任何其他传染病一样，羊痘暴发伴随着发病率、死亡率和病死率（CFR）。发病率和死亡率可能低至1%，最高可达100%。尽管羔羊的发病率通常很高，但在成年羊群中也有高发病率的报道，这取决于养殖地区和季节。在品种方面，纯种和杂交羔羊以及猪的发病率很高。有研究表明，山羊存在显著的种间发病率和死亡率。其死亡率可能高达100%。而病死率范围从15.78%～57.9%。宿主（年龄、性别、品种、营养和免疫状态）、病原体（菌株、毒力、致病性）、环境（微观和宏观）、管理不善、饲料短缺和兽医服务不足等因素对绵羊的流行病学有直接影响[1]。暂时而言，根据季节、气候、病原体和当地绵羊的品种，全年都会暴发羊痘。而某些地区的冬季和夏季羊痘暴发达到了高峰，8月份最少。在这些季节，绵羊暴露在各种地理气候条件下，从而导致压力的不良释放，进而抑制了绵羊的免疫系统，使其易患疾病。其他可能的原因包括羊群迁移和母羊排卵，这可能有助于疾病的传播。羊痘的严重程度受多种因素的影响，如年龄、性别、品种、动物的生理状态和生物气象因素。虽然严重程度随年龄而异，但所有年龄组的羊都会受到影响。成年绵羊和新生羔羊相比，幼羔（4～8月龄）的疾病更严重。气候因素也会对许多传染病的传播速度产生重大影响。微生物因子及其载体对温度、湿度、降水、地表水、风速、植被变化和贸易（包括社会和政治不稳定）等因素敏感。羊痘的发生也直接受环境因素的影响。羊痘发生与各种类型的生态系统、地貌、土壤类型、降雨量、相对湿度和温度之间的显著关联已得到研究，所有这些因素对疾病的发生都有很大的影响。2临床体征和症状羊痘的潜伏期为4～8d，初期体温、脉搏和呼吸频率升高、眼睑水肿、流鼻涕、食欲不振、弓背、流泪、咳嗽、流涎、流鼻涕导致结痂形成、肺炎、超敏反应、便秘和尿少。1～2d后，皮肤表面毛茸茸的部分会出现皮疹。病变经历黄斑、丘疹、水疱和脓疱阶段，这是任何痘病的典型特征。痂会持续3～4周，愈合后瘢痕可能会残留。可能会发生致命的败血症和脓毒症，并且病毒本身可能会导致动物在出血性麻疹的发热阶段死亡。口腔病变是病毒传播的重要来源。严重程度取决于品种、年龄、营养和免疫状态、病毒株、毒力、继发感染的性质和所涉及的器官。由继发性细菌并发症引起的败血症或脓血症可能导致死亡[2]。3宿主范围绵羊是羊痘的自然宿主。存在两种类型的羊痘，其中一种是宿主特异性的，而另一种影响绵羊和山羊。最近的研究表明，羊痘菌株确实会在绵羊和山羊之间传播，尽管大多数情况下，会对绵羊引起更严重的疾病。4传播途径羊痘是一种高度传染性疾病，通过直接接触病变或受污染的物体、饲料和羊毛而传播。环境污染导致病毒进入皮肤伤口，病毒可以通过鼻腔分泌物、乳汁和尿液排出。在羊痘暴发期间，病毒很可能通过受病毒污染的飞沫而在绵羊之间传播。由于紫外线和高温对动物产生热刺激，在开阔的天空下放牧，可能会导致羊痘。绵羊涉水穿过灌木丛和多刺植物，啃食金合欢树叶，会损害皮肤，促进疾病从受感染的绵羊传播到易感绵羊。此外，这些区域很容易被苍蝇等昆虫进入，它们很容易咬伤羊、吸血并传播病毒。5发病机制和病理在自然情况下，经过8～13d的潜伏期，直肠温度升高（40℃），然后在2～5d内出现斑疹，然后丘疹可能会覆盖整个身体或可能羊痘病的流行病学分析及防治庄夕栋（山东省诸城市畜牧业发展中心山东潍坊262200）绵羊是牧羊人的“移动银行”，绵羊的肉、羊毛和羊皮的经济贡献是巨大的。然而，各种传染病会危及绵羊的最佳生产力；其中羊痘病极为严重，该病除了给养殖户造成经济损失外，还限制了绵羊及其产品的出口。虽然从临床症状可以诊断该疾病，但实验室确认对于明确诊断和研究流行病学是必要的。病原体绵羊痘病毒（SPV）、山羊痘病毒（GPV）以及块状皮肤病病毒（LSDV）在抗原性和遗传学上密切相关。本文涉及羊痘病的分离、鉴定、病理学、流行病学、诊断和预防；本文旨在提供对羊痘病及其防治的一些论述，以便为养殖户提供参考，以期帮助养殖户尽可能地减少损失。羊痘病；动物流行病学；临床体征；疫苗防治doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2021.12.027
山羊痘病毒和支原体混合感染症的诊断与防治
兽医临床
山羊痘病毒和支原体混合感染症的诊断与防治
翟宝库 （黑龙江省大庆市动物疫病预防与控制中心黑龙江大庆１６３３１１）
山羊痘病毒和羊支原体都可单独感染羊只而发
病，单独发病时有其各自典型的临床症状和病理特
点。但是如果以上２种病原同时或激发感染羊只，往
往不会出现其各自感染时的典型症状和病理特点，
由于这种模糊性往往对此混合感染病症难于诊断。
１病原
山羊痘病毒（ＧＰＶ）可以感染所有品种、年龄和
性别的山羊，尤其以羔羊最易感，感染率可达９０％以
上。ＧＰＶ一般通过呼吸道的吸入，接触痘疹破损后的
皮肤，或者媒介（如蚊虫叮咬）的传播而感染其他山
羊，同群间传播很快，但一般不向其他羊群传播、扩
散。山羊痘病毒对干燥环境有很强的抵抗力，病毒在
干燥的痂皮内可以存活４～６个月，在干热达１００℃
时，超过５分钟方使其被杀灭。对普通消毒药有很强
的抵抗力，但对氯仿和乙醚敏感。反复冻融对其没有
显著的杀灭作用。引起羊支原体肺炎的病原主要有２
种，一种是绵羊肺炎支原体，既能使绵羊发病，也能
使山羊发病；另一种是山羊丝状支原体，只能使山羊
发病，不能使绵羊发病。
２病因分析
本混合感染的流行可能与引种未进行严格检疫
有关，若引人后也未很好隔离观察，就和当地羊混群
饲养，结果可能将病毒带入羊群，引发本病。若本地
羊群未接种任何疫苗，羊对羊痘和传染性胸膜肺炎
无免疫力，致使该病传播迅速，病势严重。 一
若发病羊群处于山区，雾重霜多，加上管理粗放，
羊舍简陋，羊群受应激因素影响，可加重本病流行。
３ Ｉ临诊依据
发病前期，病羊萎靡，体温升高达４１～４２＇１２，食欲
废绝或下降，眼结膜发红，眼角流泪。发病中后期，在
眼眶、口鼻、腿内侧、乳房、阴囊等部位的皮肤出现红
色板块，逐渐变位丘疹，玉米豆粒大小，于皮肤表面
显著突出，呈紫色。之后丘疹缓慢扩大，形成淡红色
或灰白色坚实的结节，病情严重者的结节呈全身分
布，用手可触摸到。发病末期，病羊的继发（混合）感
羊痘病的流行病学实验室诊断及其防控
羊痘病的流行病学实验室诊断及其防控
羊痘病，是一种由羊痘病毒引起的传染病，主要发生在绵羊、山羊等反刍动物身上，广泛分布在世界各地。羊痘病毒属于痘疹病毒科，是一种双链DNA病毒，其感染范围广泛，易于传播，对家畜的健康和养殖业的发展都造成了严重的危害。
为了有效诊断和防控羊痘病，科学家们进行了大量的流行病学实验室研究，积累了丰富的诊断和防控方法。以下我们将详细介绍羊痘病的流行病学实验室诊断及其防控措施。
一、流行病学特点
1. 传染途径
羊痘病的传染途径主要包括接触传播和空气传播两种方式。感染的动物通过呼吸道、眼结膜、皮肤、消化道等途径，将病毒排出体外，其他动物通过接触感染动物或者吸入病毒颗粒经空气传播而感染。
2. 季节分布
羊痘病主要发生在春季和秋季，温暖湿润的环境有利于病毒的生存和传播。畜牧业者在这两个季节需要加强对动物的监测和防控。
3. 群体感染
羊痘病具有明显的群体感染特点，一旦有动物感染，往往会迅速在整个群体中传播。对于有群养习性的动物，需要特别加强预防措施。
二、实验室诊断
1. 病原学检测
利用PCR技术可以检测羊痘病病毒的存在，该技术快速、准确，是目前检测羊痘病最常用的方法之一。
2. 血清学检测
通过对患病动物的血清中抗体的检测，可以判断是否有羊痘病毒感染。ELISA试剂盒等快速检测试剂的使用，能够在短时间内得出检测结果，为动物的及时治疗和隔离提供重要依据。
3. 病理学检测 对疑似感染的动物进行组织标本的病理学检测，主要观察病变部位的组织病理学变化，包括细胞变性、炎症反应、病变程度等指标，从而确定是否为羊痘病感染。
三、防控措施
1. 疫苗预防
疫苗预防是预防羊痘病最有效的手段之一，目前市面上有多种羊痘病灭活疫苗和弱毒疫苗可供选择。畜牧业者可根据实际情况选择合适的疫苗进行预防接种，提高动物的免疫力，降低感染风险。