酶解法制备方格星虫多肽及其抗氧化作用研究

第２４卷第９期　２０１２年９月　化学研究与应用　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　Ｖｏ１．２４，Ｎｏ．９　Ｓｅｐ．，２０１２　

文章编号：１００４—１６５６（２０１２）０９—１３９７－０５　

朱银玲　，刘华忠ｈ，李思东　，廖　艳　，李江明。　

（１．广东海洋大学实验教学部，广东　湛江５２４０８８；２．广东海洋大学理学院，广东湛江５２４０８８；　

３．广东海洋大学食品科技学院，广东湛江５２４０８８）　

摘要：采用木瓜蛋白酶酶解制备方格星虫多肽，通过单因素实验研究了加酶量、酶解温度、酶解时间、酶解ｐＨ　值和料液比等因素对羟自由基清除率的影响。通过正交试验确定了木瓜蛋白酶对方格星虫最佳的酶解工艺　条件为：加酶量３００　Ｕ／ｇ，酶解温度５０％，酶解时间６０　ｍｉｎ，酶解液ｐＨ值７．０，料水比１：３。在此条件下酶解方　格星虫获得多肽的羟自由基清除率为９５．４２％，表明方格星虫酶解物具有较明显的抗氧化能力。由高效体积　

排阻色谱（ＨＰＳＥＣ）法测得方格星虫多肽的分子量为５８６８。　关键词：木瓜蛋白酶；方格星虫；多肽；抗氧化　中图分类号：Ｒ２８５．５　文献标识码：Ａ　

Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ　ｆｒｏｍ　ｓｉｐｕｎｃｕｌｓ　ｎｕｄｕｓ　ｂｙ　

ｅｎｚｇｍｌｏｙｓｉｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ａｎｔｉ－ｏｘｉｄａｔｉｏｎ　

ＺＨＵ　Ｙｉｎ．Ｌｉｎｇ　，ＬＩＵ　Ｈｕａ．ｚｈｏｎｇ　，Ｕ　Ｓｉ—ｄｏｎｇ　，ＬＩＡＯ　Ｙａｎ　，Ｕ　Ｊｉａｎｇ－ｒｕｉｎｇ　

（１．Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ　Ｃｅｎｔｅｒ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｏｃｅａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ｚｈａｎｊｉａｎｇ　５２４０８８，Ｃｈｉｎａ；　２．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｏｃｅａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ｚｈ　ｉａｎｇ　５２４０８８，Ｃｈｉｎａ；　３．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｏｃｅａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈａｎｊｉａｎｇ　５２４０８８，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ　ｆｒｏｍ　Ｓｉｐｕｎｃｕｌｓ　ｎｕｄｕｓ　ｗａｓ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｂｙ　ｐａｐａｉｎ　ｅｎｚｙｍｏｌｙｓｉｓ．Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ａｍｏｕｎｔｓ　ｏｆ　ｅｎｚｙｍｅ，ｔｅｍｐｅｒａ—　ｔｕｒｅ，ｔｉｍｅ，ｐＨ　ｖａｌｕｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ａｎｄ　ｗａｔｅｒ　ｏｎ　ｈｙｄｒｏｘｙ　ｒａｄｉｃａｌ　ｃｌｅａｎｉｎｇ　ｒａｔｉｏ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｂｙ　ｓｉｎｇｌｅ　ｆａｃｔｏｒ　ｔｅｓｔ．Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｏｆ　ｅｎｚｙｍｏｌｙｓｉｓ　ｗｅｒｅ　ａｓ　ｆｏｌｌｏｗｓ：３００Ｕ／ｇ　ｏｆ　ａｍｏｕｎｔｓ　ｏｆ　ｅｎｚｙｍｅ．５０℃ｏｆ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，６０ｒａｉｎ　ｏｆ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｔｉｍｅ　ａｎｄ　ｐＨ＝７．０，１：３　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｈｙｄｒｏｘｙ　ｒａｄｉｃａｌ　ｃｌｅａｎｉｎｇ　ｒａｔｉｏ　ｗａｓ　９５．４２％，ｗｈｉｃｈ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ　ｆｒｏｍ　Ｓｉｐｕｎｃｕｌｓ　ｎｕｄｕｓ　ｈａｄ　ｅｖｉｄｅｎｔ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ａｎｔｉ－ｏｘｉｄａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｐｅｌｙｐｅｐｔｉｄｅ　ｆｒｏｍ　Ｓｉｐｕｎｃｕｌｓ　ｎｕｄｕｓ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｂｙ　ＨＰＳＥＣ　ｗａｓ　５８６８．　

Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｐａｐａｉｎ；ｓｉｐｕｎｃｕｌｓ　ｎｕｄｕｓ；ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ；ａｎｔｉ－ｏｘｉｄａｔｉｏｎ　

方格星虫（Ｓｉｐｕｎｃｕｌｓ　ｎｕｄｕｓ），俗称沙虫，属星　

虫门星虫科，又称光裸星虫、沙肠子等，其体呈长　

筒形，很像一根肠子，体长约１Ｏ～２０厘米，且浑身　

光裸元毛，体壁纵肌成束，每环肌交错排列，形成　方块格子状花纹，所以又被称为裸体方格星虫。　

活性自由基对生物膜和其他组织可产生一系列的　危害，海洋生物抗氧化剂可通过各种途径清除内　

源性和外源性自由基，具有抗氧化作用强、种类　

多、结构复杂、副作用低等特点¨　。抗氧化活性肽　

是天然抗氧化剂研究热点之一，而且现在大部分　

抗氧化活性肽是通过蛋白酶在温和条件下水解蛋　白质而获得，食用安全性高［２］。林琳等人　发现　

收稿日期：２０１２－０４－２３；修回日期：２０１２－０６—１２　基金项目：国家自然基金项目（３１７１６６７）资助；广东海洋大学自然基金项目（１０１２１６３）资助　联系人简介：刘华忠（１９７４一），男，副教授，主要研究方向：海洋生物活性物质。Ｅ—ｍａｉｌ：９０２０３０＠ｓｉｎａ．ｃｏｒｎ

　１３９８　化学研究与应用　第２４卷　

鱿鱼皮胶原蛋白水解肽在试验动物体内具有抗氧　

化作用。张桂和等人　研究发现方格星虫经木瓜　

蛋白酶酶解后酶解物含有蛋白质、多肽以及游离　

氨基酸等成分，并具有较强的抗氧化作用。本文　

采用湛江产方格星虫作为实验材料，利用木瓜蛋　

白酶解法制备抗氧化酶解物，并优化酶解工艺。　

旨在为更好的研究、开发和利用方格星虫提供理　

论依据。　

１材料与方法　

１．１实验材料　

优质新鲜方格星虫购于湛江东风水产品市　场，用蒸馏水洗净泥沙，去肠肚，用不锈钢剪刀剪　

碎，用绞碎机搅成糊状，置冰箱冷冻保存备用。　

１．２主要仪器及试剂　

１．２．１　酶及主要试剂木瓜蛋白酶购自广西庞　

博生物工程有限公司。干酪素、，Ｊ一酪氨酸、磷酸氢　

二钠、磷酸二氢钠、磷酸、氢氧化钠、硫酸亚铁、双　

氧水、甲基紫等均为分析纯，以上试剂均购自广州　

化学试剂厂。　

１．２．２主要仪器ＴＵ一１９０１双光束紫外可见分光　

光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）、ＭＰ２００Ａ　

电子分析天平（上海精科天平）、０４０８￣型低速台式　

离心机（上海医疗器械有限公司）、ＨＨ－６恒温水浴　锅（江苏省金坛市环宇科学仪器厂）、７２００可见分　

光光度计（尤尼柯上海仪器有限公司）、ＨＩ２２１０酸　

度计（意大利哈纳）、ＬＣ－２０ＡＴ型液相色谱仪（美国　

Ｗａｔｅｒｓ高效液相色谱仪）、ＰＲＯＴＥＩＮ－ＰＡＫ　６０　

（ＷＡＴ０８５２５０）蛋白凝胶柱（广州市东征化玻仪器　

有限公司）。　

１．３实验方法　

１．３．１木瓜蛋白酶活力的测定　儿钊　采用Ｆｏｌｉｎ　

酚法测定酶活力。　

１．３．２酶解液的制备在温度５０＇Ｅ、ｐＨ７．０、酶　解时间１　ｈ、酶加入量３００Ｕ／ｇ、底物浓度１：３的条　

件下用木瓜蛋白酶对方格星虫进行水解，制备酶　

解液，用等体积的０．４　ｍｏ］／Ｌ的三氯乙酸沉淀未被　

酶解的蛋白质，然后经过０．４５　ｍ滤膜过滤，得到　

酶解液。　

１．３．３酶解工艺优化单因素实验：取５　ｇ方格　

星虫原浆，用木瓜蛋白酶进行酶解，以羟自由基清　

除率为指标，分别对方格星虫加酶量、酶解温度、　

酶解时间、酶解ｐＨ值、料液比五个因素分别进行　测定，确定单因素优化条件。方格星虫的酶解工　

艺因素水平见表１。　表１　方格星虫的酶解工艺因素水平　Ｔａｂｌｅ　１　Ｔｈｅ　Ｓｉｐｕｎｃｕｌｓ　ｎｕｄｕｓ　ｏｆ　ｅｎｚｙｍｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｌｅｖｅｌ　

垩　Ⅱ醒量　ｇ温度　时间　尘　液比　１　１００　５０　４Ｏ　１：２　２　

３　３００　

４ｏｏ　５５　

６０　６０　

８０　１：３　

１：４　

１．３．４方格星虫的酶解方法在温度５ｏ℃、ｐＨ７．０、　酶解时间６０　ｍｉｎ、酶加入量３００　Ｕ、料液比１：３的条件　

下用木瓜蛋白酶对方格星虫进行水解，测定酶解　液对羟自由基的清除率，考察酶解温度、酶解ｐＨ、　

酶加入量、酶解时间、料液比等５个因素对羟自由　基清除率的影响，确定其最佳酶解条件。在此基　础上恒定酶解液ｐＨ值为７．０的条件下，选择加酶　量、酶解温度、酶解时间、料液比进行正交试验，确　

定最优酶解条件。　１．３．５羟自由基清除率的测定　清除羟自由　基的研究采用甲基紫褪色法－８　Ｊ。其基本原理是：　

Ｏ２一・和Ｆｅ发生Ｆｅｎｔｏｎ产生・ＯＨ。・ＯＨ容易进　

攻高电子云密度点，会与甲基紫中具有高电子云　

密的．Ｃ＝Ｃ一基团发生亲电加成反应，而使甲基紫褪　色。通过测定甲基紫吸光度值的变化可间接测定　

出・ＯＨ的生成量。方法：按表１的方法加样，用　ｐＨ为３．２－３．７的Ｔｒｉｓ—ＨＣ１的缓冲溶液调节反应体　系ｐＨ为４．７，最终体积是１０．０　ｍＬ，然后在５７８ｎｍ　

波长下比色，测得吸光度值，计算清除率：　清除率（％）＝［（Ａ　－，４。）／（Ａ－Ａ。）］×１００（式　

中：　．样品组吸光度；Ａ。．空白组吸光度；Ａ一对照组　吸光度。Ａ，为加甲基紫，其余均不加在５７８ｎｍ波　长下比色，测得的吸光度值；　。不加样品，其余均　加在上述相同条件下测得的吸光度值；Ａ加样品，　

同时其余均加在上述相同条件下测得吸光度值）。　甲基紫清除羟自由基的加样程序见表２。　

表２　甲基紫清除羟自由基的加样程序　Ｔａｂｌｅ　２　Ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅ　ｐｒｏｇｒａｍ　ｏｆ　ｍｅｔｈｙｌ　ｖｉｏｌｅｔ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｈｙｄｒｏｘｙｌ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ

　第９期　朱银玲等：酶解法制备方格星虫多肽及其抗氧化作用研究　１３９９　

２结果与讨论　

２．１单因素实验　２．１．１　木瓜蛋白酶加入量对羟自由基清除率的　

影响图１为酶加入量与自由基清除率的关系。　

由图可知，当酶加入量到达３００　Ｕ／ｇ时，自由基清　

除率达到最高。随酶加入量的增加而略有下降。　

这可能是因为随着酶浓度的上升，酶与底物的接　

触机会增加，蛋白质酶解速度提高，导致多肽更快　

地分离出来。达到饱和后，蛋白被酶解的速度趋　

于稳定，再增大加酶量也难以显著提高多肽得率。　

因此最适加酶量应在３００　Ｕ／ｇ左右。　ｌ００　

９５　

錾９０　

８５　

８Ｏ　０　ｌＯ０　２００　３Ｏ０　４００　５Ｏ０　６００　酶加入量（Ｕ／ｇ）　

图ｌ酶加入量对自由基清除率的影响　Ｆｉｇ．１　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｎｚｙｍｅ　ａｄｄｉｔｉｏｎ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｈｙｄｒｏｘｙｌ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｒａｔｅ　

２．１．２温度对羟自由基清除率的影响　由图２　

可知，木瓜蛋白酶酶解液清除羟自由基的效率随　

温度升高而增加，５０ｃｃ时最大，随着温度的升高而　

下降。这可能是因为随着温度的逐渐增加，反应　

物的能量随之升高，反应速度加快，有利于酶解的　

快速进行；当超过一定温度后，酶的活力降低，甚　至完全失去活性，从而导致多肽得率下降。因此，　

最适酶解温度在５Ｏ℃左右。　１００　

９５　

９０　

８５　

８Ｏ　３０　４０　５０　６０　７Ｏ　温度（℃）　

图２温度对清除羟自由基的影响　Ｆｉｇ．２　ｒＩ１ｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　Ｏｉｌ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｃｌｅａｒｉｎｇ　ｕｐ　ｈｙｄｒｏｘｙｌ　ｒａｄｉｃａｌｓ　２．１．３酶解时间对羟自由基清除率的影响图３　的结果表明，当其他条件一定的情况下，木瓜蛋白　

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PEF结合酶法提取方格星虫(Sipunculus nudus)多糖工艺条件

陈文;王湘君;邵东旭;王玉杰;孙宏元;公维洁

【期刊名称】《海洋科学》

【年(卷),期】2018(042)007

【摘要】为了优化提取方格星虫(Sipunculus nudus)多糖工艺实验条件,采用PEF酶法提取方格星虫多糖,依据料液比、浸提温度、酶底比、PEF电场强度、浸提时间、脉冲数对多糖提取率的影响,以响应曲面法优化方格星虫多糖提取的最优工艺条件,通过紫外可见分光光度计测定多糖吸光度进而计算提取率.结果表明:各因素对方格星虫多糖提取率的影响程度为:料液比>电场强度>提取温度>提取时间;最优工艺条件为:料液比(g/mL)1︰7,浸提温度50℃,酶底比为2.5％,电场强度30 kV/cm,脉冲数为12,浸提时间2 h;多糖最大提取率为6.45％.

【总页数】10页(P54-63)

【作者】陈文;王湘君;邵东旭;王玉杰;孙宏元;公维洁

【作者单位】海南热带海洋学院海洋科学技术学院,海南三亚 572022;海南热带海洋学院生命科学与生态学院,海南三亚 572022;海南热带海洋学院海洋科学技术学院,海南三亚 572022;海南热带海洋学院海洋科学技术学院,海南三亚 572022;海南热带海洋学院海洋科学技术学院,海南三亚 572022;海南热带海洋学院海洋科学技术学院,海南三亚 572022

【正文语种】中文【中图分类】Q517;Q915.821+.5

【相关文献】

1.PEF结合酶法提取方格星虫粗多糖工艺研究综述 [J], 钱明;陈文;王湘君;孟凡猛;赵秀志;苏安云;林勇

2.PEF结合酶法提取海菖蒲粗多糖研究综述 [J], 张顺琦;陈文;王湘君;郭琼琼;钱明;温佳惠

3.PEF结合酶法提取方格星虫粗多糖研究综述 [J], 文霞;陈文;王湘君;胡吉玲;林勇;黄丽娜;钱明

4.PEF结合酶法提取仙人掌花粗多糖工艺研究综述 [J], 黄丽娜;陈文;王湘君;黄联谊;徐颖;何鸿源;吕晓通

鸡蛋壳膜多肽酶解工艺及抗氧化活性研究

圆园21年11月第42卷第21期食品研究与开发

DOI：10.12161/j.issn.1005-6521.2021.21.008

基金项目：吉林省科技发展计划项目（20170204026NY）作者简介：张伟云（1995—），女（汉），硕士研究生，研究方向：天然产物提取与功能食品研究。*通信作者：张凤清（1967—），女（汉），教授，硕士，研究方向：天然产物提取与功能食品研发。鸡蛋壳膜多肽酶解工艺及抗氧化活性研究

张伟云，张凤清*

（长春工业大学化学与生命科学学院，吉林长春130012）

摘要：试验以鸡蛋壳膜为原料，通过酶解法制备小分子肽，并对其生物活性进行研究。以水解度为评价指标，通过单因素试验确定蛋白酶种类、酶解时间、料液比以及酶添加量等因素对壳膜多肽水解度的影响，并通过响应面设计（Box-Behnkendesign，BBD）对酶解条件进行三因素三水平优化；通过高效凝胶过滤色谱测定酶解后壳膜多肽分子量的分布情况，并测定壳膜多肽对DPPH·、ABTS+·、·OH、O2-·的清除能力。结果表明，最佳酶解工艺条件为碱性蛋白酶（AP-200a），酶添加量2.4%，料液比1颐9.5（g/mL），酶解时间5h；在此条件下，壳膜多肽水解度为27.15%，水解后相对分子质量小于1000Da的小分子肽所占比例为90.9%；且壳膜多肽对DPPH·、ABTS+·的清除率分别为（93.03依0.51）%、（94.53依0.92）%，与VC的效果相当；但对·OH和O2-·的清除率分别为（43.33依1.10）%和（53.40依0.70）%。因此，通过该法酶解得到的壳膜多肽中小分子肽占比较高，易被人体消化吸收，且具有一定抗氧化活性。关键词：鸡蛋壳膜多肽；酶解；响应面优化；分子量；抗氧化活性

EnzymaticHydrolysisandAntioxidantActivityofPolypeptidefromEggshellMembraneZHANGWei-yun，ZHANGFeng-qing*

多肽的制备及其活性研究进展

.实用文档.

. 多肽的制备及其功能活性的研究进展

摘要：科学研究发现生物体内存在多种具有生理活性的多肽物质，它们具有不同的结构和功能活性。人体摄入的蛋白质经酶水解后，主要以肽的形式被消化吸收。几乎所有细胞都受多肽调节，它具有调节机体生理功能和为机体提供营养的双重成效。人们已从包括人、植物、动物在内的各种生物体中别离出各类活性多肽，并且对多肽的性质、制备方法、别离纯化方法、鉴定技术、功能活性及应用等方面进行了大量的研究，并取得了一定的成效。本文介绍了活性多肽的制备方法及其活性研究现状，对多肽的多种功能活性进行了介绍，概述了不同来源多肽的制备方法和其功能活性研究进展。

关键词：多肽；功能活性；别离纯化

前言

近年来，多肽在生物体内的生理功能受到越来越多的重视。大量研究结果说明，蛋白质由于其分子量大，结构复杂，摄人人体后不易被消化吸收，从而影响了其生理功能和营养价值的有效发挥。多肽是比蛋白质结构简单，分子量小，由2～16个氨基酸通过肽键连接的一类化合物，按氨基酸组成数目可人为分为短肽(2～5个氨基酸)，多肽(6～16个氨基酸)。多肽是涉及生物体内各种细胞功能的生物活性物质。科学发现，几乎所有细胞都受多肽调节，如：细胞分化、神经激素递质调节、免疫调节等均与活性多肽密切相关，它具有调节机体生理功能和为机体提供营养的双重成效。由于多肽具有调节植物神经系

统、活化细胞免疫机能、改善心血管功能和抗衰老等生理活性，这为.实用文档.

. 开发肽药物、肽类保健食品提供了理论依据。可见，进行多肽的研究和开发有着十分重要的研究意义和应用前景【1】。

一，多肽的制备方法

目前，国内外制备多肽的方法主要有：蛋白酶水解法、化学合成法、基因重组法、别离提取法等。酶法生产功能性多肽应用较为普遍[2]。龚吉军等人[3]利用茶籽蛋白酶酶解制备菜籽多肽，确定了最正确条件，此条件下氨基酸态氮生成率可达34．64％，制备的茶籽多肽对超氧自由基和羟基自由基具有强烈的去除作用；李书国等人[4]研究了酶法生产大豆多肽的加工工艺，别离得到纯洁的酸性水解物溶液，水解率高达95％；班玉凤等人[5]研究了Alcalase水解大豆蛋白制备大豆蛋白寡肽的方法，确定了酶解的最正确条件，其水解液的水解度到达了24．1％；刘大川等[6]也利用碱性蛋白酶对富硒菜籽别离蛋白酶解制备蛋白肽，水解度达32．51％，制得的富硒菜籽蛋白肽分子量分布较好，几乎完全是小分子多肽，分子量均在1500D以下。以下是几种方法优缺点的概述。

海洋生物酶解多肽活性功能研究进展

本文对近几年来采用酶解方法从海洋生物蛋白中获取生物活性肽的相关研究进行了综述,介绍了该类生物活性肽抗氧化、抗高血压、抗肿瘤、抗血栓形成等活性功能的研究现状,描述了各研究的蛋白来源、酶的选择及生物活性肽的分离纯化手段等,并对该研究领域提出展望,旨在为以后的相关研究提供参考。

标签：海洋生物;酶解多肽;活性功能

生物活性肽(biological active peptides)是指具有优化机体代谢环境、有益于机体健康的一类多肽[1]。它们通过作用于机体的消化系统、心血管系统、免疫系统和神经系统等多种机体代谢系统,最终起到提高机体免疫力、减少慢性疾病发生的作用。近几十年来,运用酶解方式从动植物蛋白中获取生物活性肽一直是国内外研究的热点,尤其对陆地生物来源的蛋白研究较多,已从中分离提取出具有免疫调节、抗氧化、抑菌、降血压、抗血栓、抗肿瘤等[2-6]多种生物活性肽。本文旨在综述近年来以酶解方法从海洋生物蛋白中获取生物活性肽的研究情况,重点描述蛋白来源、酶的选择、酶解多肽的提取分离手段及其活性功能等。

1抗氧化活性肽

各国学者对于酶解多肽抗氧化功能已进行了大量的研究。Song等[7]使用中性蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶对毛蚶蛋白进行酶解,测定各酶解液对DPPH和H2O2自由基的清除作用,证实在所选用的3种蛋白酶中,碱性蛋白酶酶解液对2种自由基的清除能力最强,EC50分别为6.23 mg/ml和19.09 mg/ml。Hsu等[8]从枯草芽孢杆菌中提取出一种肽链内切酶Orientase,用该酶酶解金枪鱼蒸煮液,将酶解物纯化后得到3个多肽组分,其分子量分别是1305Da、938Da和584Da。经测定,这3个多肽均具有很好的抗氧化性能。Kim等[9]用多种蛋白酶分别对新西兰无须鳕的骨蛋白进行酶解,分别测定各酶解物对脂质过氧化的抑制作用,并采用电子自旋共振技术测定各种酶解物对DPPH自由基、羟基、过氧化氢自由基及超氧化物自由基的抑制作用,结果表明,胃蛋白酶酶解物具有最强的抑制脂质过氧化及清除各自由基的作用。对该酶解物分离纯化后,得到1种酶解多肽APHPH,该肽的分子量为1801 Da。

生物活性多肽在食品中的应用研究

随着科学技术的进步，生物活性多肽在食品中的应用研究越来越受到关注。生物活性多肽是一类具有生物功能的小分子蛋白质，具有抗氧化、抗菌、降血压、抗肿瘤等多种功效。本文将从生物活性多肽的来源、制备及其在食品中的应用等方面进行探讨。

一、生物活性多肽的来源和制备

生物活性多肽可以从多种来源获得，例如植物、动物和微生物等。其中，动物和植物是常见的来源之一。动物来源的生物活性多肽可以从动物的肌肉、器官和血液中提取获得，如鱼、虾、牛肉、鸡肉等。植物来源的生物活性多肽则可以从植物的种子、根、茎和叶中提取获得，如黄豆、麦胚、大豆蛋白等。

生物活性多肽的制备主要有两种方法：化学合成和酶解。化学合成方法是通过合成原料中的氨基酸构建多肽链，但这种方法成本较高且操作复杂。而酶解方法则是通过将蛋白质暴露在合适的酶中，使其产生水解作用，从而产生多肽。酶解法制备的生物活性多肽成本低，操作简单，因此在实际应用中更为常见。

二、生物活性多肽在食品中的应用

1. 抗氧化

生物活性多肽具有显著的抗氧化活性。抗氧化活性可以通过清除自由基和抑制氧化反应来实现。自由基是导致衰老、肿瘤和心血管疾病等的主要原因之一。在食品加工过程中，生物活性多肽可以作为天然的抗氧化剂，降低氧化反应的速度，延长食品的保鲜期。

2. 抗菌生物活性多肽具有较强的抗菌活性，可以抑制多种致病菌和腐败菌的生长。这使得生物活性多肽在食品领域中具有广泛的应用前景。例如，在乳制品中添加生物活性多肽可以延长产品的保鲜期、增强免疫功能，并减少使用传统防腐剂的需要。

3. 降血压

高血压是心血管疾病的主要危险因素之一。研究表明，一些生物活性多肽具有明显的降血压作用。这些多肽可以通过抑制血管紧张素转化酶、促进一氧化氮的释放等机制，降低血压。因此，在食品中添加具有降血压活性的生物活性多肽，对于预防和治疗高血压具有重要意义。

4. 抗肿瘤

生物活性多肽还具有抗肿瘤活性。它们可以通过抑制肿瘤细胞的增殖、诱导凋亡以及抑制肿瘤血管生成等机制，起到抗肿瘤的作用。因此，将具有抗肿瘤活性的生物活性多肽应用于食品中，有望为人们提供一种安全有效的预防和治疗肿瘤的方式。

多棘海盘车酶解多肽体外抗氧化活性研究

李敏晶;王旭莹;张宇;刘远

【摘要】[目的]探讨多棘海盘车多肽的抗氧化活性.[方法]时多棘海盘车中水溶性蛋白进行提取,再采用酶解法,以胰蛋白酶和木瓜蛋白酶分别酶解水溶性蛋白,经离心、透析、冻干后分别得到多肽样品T-P、P-P.通过分析T-P、P-P对羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O2-·)、1,1-二苯基-2-三-硝基苯肼自由基(DPPH·)的清除能力及在脂质体系中的抗氧化能力来表征其体外抗氧化活性.[结果]T-P、P-P对3种自由基均具有一定的清除作用,对脂质体系的氧化也有一定的抑制作用;P-P的抗氧化活性优于T-P;T-P、P-P的抗氧化活性均弱于水溶性蛋白.[结论]研究可为多棘海盘车多肽的深入研究及开发利用提供理论依据.

【期刊名称】《安徽农业科学》

【年(卷),期】2016(000)005

【总页数】3页(P113-115)

【关键词】多棘海盘车;多肽;抗氧化活性

【作者】李敏晶;王旭莹;张宇;刘远

【作者单位】大连海洋大学海洋科技与环境学院,辽宁大连116023;大连海洋大学海洋科技与环境学院,辽宁大连116023;大连海洋大学海洋科技与环境学院,辽宁大连116023;大连海洋大学海洋科技与环境学院,辽宁大连116023

【正文语种】中文

【中图分类】S912 Abstract

[Objective] To discuss the antioxidant activity in vitro of the enzymolysis peptide from Asterias amurensis. [Method] Water-soluble protein was extracted from A. amurensis, and then was enzymolyzed by trypsin and papain using enzyme hydrolysis method. After centrifugation, dialysis and freeze drying, peptide samples T-P and P-P were obtained. Antioxidant activity in vitro was characterized based on analyzing the scavenging activities of T-P and P-P to hydroxyl radical (·OH), superoxide anion free radical ·), and 1, 1 diphenyl -2 -trinitrobenzene hydrazine free radicals (DPPH·). [Result] T-P and P-P had certain scavenging action to the three free radicals, and had certain inhibitory effects on the oxidation of lipid system. [Conclusion] Antioxidant

酶法制备乳源抗氧化肽的工艺研究

应用技术　食品研究与开：笈　

Ｆｏｏｄ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ａｎｄ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　２０１１年１０月　第３２卷第１０期　

酶法制备乳源抗氧化肽的工艺研究　１０１＝＝＝・　

彭建军　，海文英　。肖诗英　

（１．内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司，内蒙古呼和浩特０１１５００；２．湖北工业大学化学与环境工程学院，湖北　

武汉４３００６８）　

摘要：酶解产物以清￣，ＤＰＰＨ自由基能力为指标，由３种食品级蛋白酶确定制备乳源蛋白抗氧化肽的最佳蛋白酶种　类及其酶解工艺，考察其酶解产物的抗氧化能力。结果表明：中性蛋白酶是制备乳源蛋白抗氧化肽的优选蛋白酶，酶　

解工艺为温度４５℃，ｐＨｉ６．０，酶解时间２．５　ｈ，底物浓度４．５％。　关键词：乳清蛋白；中性蛋白酶；抗氧化肽　

Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍｉｌｋ—－Ｄｅｒｉｖｅｄ　Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　ｏｆ　Ｅｎｚｙｍｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　

ＰＥＮＧ　Ｊｉａｎ－ｊａｎ　，ＨＡｌ　Ｗｅｎ－ｙｉｎｇ　，ＸＩＡＯ　Ｓｈｉ－ｙｉｎｇ　（１．Ｉｎｎｅｒ　Ｍｏｎｇｏｌｉａ　Ｍｅｎｇｎｉｕ　Ｄａｉｒｙ（Ｇｒｏｕｐ）Ｃｏ．Ｌｔｄ．，Ｈｕｈｈｏｔ　０１１５００，Ｉｎｎｅｒ　Ｍｏｎｇｏｌｉａ，Ｃｈｉｎａ；２．Ｈｕｂｅｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　

Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｗｕｈａｎ　４３００６８，Ｈｕｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓ　ｈｙｄｒｏｌｙｚａｔｅ　ｔｏ　ｃｌｅａｒ　ｔｈｅ　ＤＰＰＨ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｂｉｌｉｔｙ　ａｓ　ａｎ　ｉｎｄｅｘ，ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｆｏｏｄ—　

ｇｒａｄｅ　ｐｒｏｔｅａｓｅ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉｌｋ—・ｄｅｒｉｖｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｎｚｙｍｅ　

酶解法制备方格星虫多肽及其抗氧化作用研究

文章编号：１００４—１６５６（２０１２）０９—１３９７－０５　

酶解法制备方格星虫多肽及其抗氧化作用研究　

朱银玲　，刘华忠ｈ，李思东　，廖　艳　，李江明。　

（１．广东海洋大学实验教学部，广东　湛江５２４０８８；２．广东海洋大学理学院，广东湛江５２４０８８；　

３．广东海洋大学食品科技学院，广东湛江５２４０８８）　

Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ　ｆｒｏｍ　ｓｉｐｕｎｃｕｌｓ　ｎｕｄｕｓ　ｂｙ　

ｅｎｚｇｍｌｏｙｓｉｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ａｎｔｉ－ｏｘｉｄａｔｉｏｎ　

ＺＨＵ　Ｙｉｎ．Ｌｉｎｇ　，ＬＩＵ　Ｈｕａ．ｚｈｏｎｇ　，Ｕ　Ｓｉ—ｄｏｎｇ　，ＬＩＡＯ　Ｙａｎ　，Ｕ　Ｊｉａｎｇ－ｒｕｉｎｇ　

酶解法制取蚕蛹多肽

王玉海;孙卫东;秦志喧;邱英华;陆海勤;李凯

【期刊名称】《大众科技》

【年(卷),期】2012(014)005

【摘要】以蚕蛹为原料,经脱脂后,采用碱法提取蚕蛹蛋白,以双酶水解的方法制取可溶性蚕蛹多肽,最佳制取条件为固液比1：10,水解温度45℃,酶用量3%（木瓜蛋白酶：胰蛋白酶=1：1）,水解时间6h,在此条件下制备的蚕蛹多肽得率为62.5%。使用胃蛋白酶和胰蛋白酶分别水解时,多肽得率为58.7%。%The peptides were

prepared from silkworm pupa protein by hydrolysis with compound

enzyme.The favorable method of hydrolysis is：enzyme（papain：trypsin=1：1） 2%,Temp.45℃,hydrolysis time 6 hours,and the ratio of solid

to liquid 1：10.The yield of pupa peptide can reach 62.5%.When the pupa

protein is hydrolyzed by pepsin and tripsin separately,the yield of pupa

peptide is 58.7%.

【总页数】2页(P97-98)

【作者】王玉海;孙卫东;秦志喧;邱英华;陆海勤;李凯

【作者单位】南宁创新科技医药技术有限公司,广西南宁530007;广西大学轻工与食品工程学院,广西南宁530004;南宁创新科技医药技术有限公司,广西南宁530007;南宁创新科技医药技术有限公司,广西南宁530007;广西大学轻工与食品工程学院,广西南宁530004;广西大学轻工与食品工程学院,广西南宁530004

【正文语种】中文【中图分类】TS201.1

麦麸多肽抗氧化及吸湿保湿性能的测定

陈晓磊;刘盼;陈夫山

【摘要】采用超声提取法提取麦麸蛋白,并利用风味蛋白酶和碱性蛋白酶混合酶法进行酶解反应制备麦麸多肽。通过对麦麸多肽抗氧化性能测定,发现其具有一定的自由基清除能力,对ABTS自由基清除能力与维生素C相当,且对亚油酸的自氧化有显著的抑制作用。通过进一步考察其保湿性能,证实麦麸多肽具有一定的吸湿保湿能力,尤其在高湿环境中展现出超强的吸湿和保湿能力,在化妆品保湿方面有较大的应用前景。

【期刊名称】《齐鲁工业大学学报：自然科学版》

【年(卷),期】2018(032)002

【总页数】5页(P8-12)

【关键词】麦麸蛋白;麦麸多肽;吸湿保湿;抗氧化

【作者】陈晓磊;刘盼;陈夫山

【作者单位】[1]青岛科技大学化学与分子工程学院,青岛266042;;[1]青岛科技大学化学与分子工程学院,青岛266042;;[2]青岛科技大学海洋科学与生物工程学院,青岛266042;

【正文语种】中文

【中图分类】TS213.2

随着社会的发展和人民生活水平的提高,各种生物多肽的开发和研究价值日益提升。多肽是一种涉及生物体内各种细胞功能的生物活性物质,具有降血压、降胆固醇、抗氧化和抗衰老等生理功能[1]。大豆、玉米等蛋白均可在蛋白酶中酶解得到其多肽[2],小麦麸皮作为小麦加工的副产品,含有至少15%以上的蛋白质,是一种潜在的植物蛋白资源[3]。麸皮可减少对人体有害的饱和脂肪酸的摄入,同时可提供一些人体必需的氨基酸和其他的生物活性物质[4]。但由于口味不佳、在实际生产中多被作为动物饲料等,只有小部分麦麸被应用到食品包装或被制成高纤维产品[5-6],很少有大规模的深加工和再利用,造成了资源浪费[7]。近年来对麦麸多肽的研究利用已经越来越多,成为食品、医药和生物研究方面的一大热点。

利用蛋白酶酶解麦麸蛋白可制备麦麸多肽,研究其抗氧化性能和抑菌性等[4,8],但对其吸湿保湿性能的研究目前还未见报道。从麦麸多肽本身结构特点推测其可能具有较好的吸湿保湿性能,再加上多肽类固有的抗氧化能力,有望成为新型化妆品保湿剂。

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