猪血浆蛋白粉中IgG含量的酶联免疫检测方法研究
纯化及鉴定实验报告
纯化及鉴定实验报告
1. 实验目的
本实验旨在提取、纯化和鉴定人类血浆中的抗体IgG。
2. 实验步骤
1. 血浆样本制备：
- 收集人类血浆样本，并离心去除细胞成分。
2. 抗体IgG的提取：
- 使用亲和层析技术，将血浆样本加入与IgG特异性结合的柱中，洗脱非特异性蛋白质。
3. 抗体IgG的纯化：
- 将柱中特异性结合的IgG洗脱并收集。
4. 抗体IgG的鉴定：
- 使用免疫学技术（如ELISA或免疫印迹），检测提取的IgG 的纯度和特异性。
3. 实验结果
经过上述步骤，实验成功提取和纯化了人类血浆中的抗体IgG。
通过免疫学技术的鉴定，确定提取得到的IgG具有较高的纯度和特
异性。
具体的实验结果表明人类血浆中存在丰富的抗体IgG。
4. 结论
本实验成功地提取、纯化和鉴定了人类血浆中的抗体IgG。
这
对于进一步研究和应用抗体在医学和生物学领域具有重要意义。
5. 讨论和展望
本实验采用了亲和层析技术和免疫学技术，成功实现了对人类
血浆中抗体IgG的提取、纯化和鉴定。
然而，未来的研究可以探索
更有效的提取和纯化方法，以及进一步验证抗体的功能和应用，扩
展该实验研究的深度和广度。
参考文献
[1] 张三, 李四. 血浆抗体IgG的提取与纯化[J]. 实验生物学杂志, 20XX, XX(X): 123-456.。
猪肺炎支原体不同蛋白抗原检测疫苗诱导IgG产生规律的研究_杜改梅
ＤＵ Ｇａｉ－ｍｅｉ １，２，ＬＩＵ Ｍａｏ－ｊｕｎ１，ＷＥＩ Ｙａｎ－ｎａ１，ＧＡＮ Ｙｕａｎ１，ＭＡ Ｑｉｎｇ－ｈｏｎｇ１，ＳＨＡＯ Ｇｕｏ－ｑｉｎｇ１＊ （１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｊｉａｎｇｓｕ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｒｒｉｎｇ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ／Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｂｉｏ－ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００１４，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ
１ 材 料 与 方 法
１．１ 材 料 Ｐ３６、Ｐ４６、Ｐ９７Ｒ１ 和 ＤｎａＫ 原 核 表 达 产 物 均 由
本 实 验 室 制 备 。 酶 标 二 抗 （Ｇｏａｔ ａｎｔｉ－ｐｉｇ ＩｇＧ－ＨＲＰ） 购自 ＢＥＴＨＹＬ 公司。
猪肺炎支原体活疫苗（１６８株）为 南 京 天 邦 生 物 有限公司产品，瑞倍 适 （猪 支 原 体 肺 炎 灭 活 疫 苗）为
猪肺炎支原体 （Ｍｈｐ）是 猪 支 原 体 肺 炎 （又 名 猪 气 喘 病 ）的 病 原 体 ，也 是 猪 呼 吸 道 疾 病 综 合 征 的 一 种 重要的原发性病原 。 ［１－２］ Ｍｈｐ感染 机 体 后 主 要 影 响 猪的生长发育和饲 料 转 化 率，或 者 破 坏 黏 膜 － 纤 毛 屏障，易继发其他 致 病 菌 的 感 染，提 高 致 死 率，因 而 给养猪业造成巨大的经济损失 。 ［３］ 有效的疫病 检 测 和疫苗评２０１３，４４（６）：９２５－９３０
猪血小板衍生生长因子(PDGF)酶联免疫分析
猪血小板衍生生长因子(PDGF)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E06528p检测范围：0.625 ng/ml - 40 ng/ml最低检测限：0.156 ng/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的猪PDGF，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定猪血清、血浆或其它相关生物液体中PDGF 含量。
说明1.试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2.浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3.中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗PDGF抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗PDGF抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的PDGF呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。
2.标准品（Standard）：2瓶(冻干品)。
3.样品稀释液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）。
7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）。
8.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
IGE ELISA试剂盒说明书
IgE elisa试剂盒说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T10µg/ml-250µg/ml使用目的：本试剂盒用于测定猪血清、血浆及相关液体样本中免疫球蛋白E(IgE)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中猪免疫球蛋白E(IgE)水平。
用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入免疫球蛋白E(IgE)，再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB 在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白E(IgE)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中猪免疫球蛋白E(IgE)浓度。
试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（480µg/ml）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
240µg/ml5号标准品150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液120µg/ml4号标准品150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液60µg/ml3号标准品150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液30µg/ml2号标准品150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液15µg/ml1号标准品150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
猪血G型免疫球蛋白稳定性研究
猪血G型免疫球蛋白稳定性研究
罗磊;武涛;丁霄霖
【期刊名称】《食品与机械》
【年(卷),期】2006(022)006
【摘要】研究了酸性环境和加热对猪血IgG活性的影响.结果显示:猪IgG热变性的温度范围为70.265～72.162℃,吸热量为338.4 J/g.室温时,pH降低到4以下IgG开始变性,其活性损失随pH的下降而增加.pH为7时,60℃后IgG开始变性,随温度升高活性损失越来越大.酸性条件下免疫球蛋白对于温度更为敏感,较低的温度就会造成IgG的变性.
【总页数】3页(P20-22)
【作者】罗磊;武涛;丁霄霖
【作者单位】河南科技大学食品与生物工程学院,河南,洛阳,471003;河南科技大学食品与生物工程学院,河南,洛阳,471003;江南大学食品学院,江苏,无锡,214036【正文语种】中文
【中图分类】TS2
【相关文献】
1.紫外分光光度法测定猪血中提取免疫球蛋白IgG含量的可行性研究 [J], 梁美莲;顾玉珠;任一丹;于洋
2.猪血免疫球蛋白提取条件的优化研究 [J], 张效荣;于福满;程瑜茗
3.蛋氨酸铬对猪血液生化指标和激素水平及免疫球蛋白的影响 [J], 田耀耀;张丽英;朱琳;彭楚才;于贵平;蒋民;龚利敏
4.复方中药对早期断奶仔猪血清免疫球蛋白及肠黏膜免疫细胞的影响 [J], 孟冬霞;马政禹;曹日亮
5.猪血清免疫球蛋白IgG的分离纯化及抗大肠杆菌作用 [J], 孟腾飞;韩愈杰;王敬;魏萌;吴国江
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食物igg抗体检测14项标准
食物igg抗体检测14项标准一、食物IGG抗体检测概述食物IGG抗体检测是一种检测人体内是否存在针对特定食物抗原的免疫球蛋白G（IGG）抗体的方法。
这种检测方法可以帮助患者了解自己对某种食物是否产生过敏反应，为饮食调整和预防过敏症状提供依据。
在近年来的临床应用中，食物IGG抗体检测得到了广泛关注和认可。
二、IGG抗体检测的14项标准1.检测方法：食物IGG抗体检测方法主要有酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫层析法（LFIA）等。
选择适合实验室和临床需求的检测方法至关重要。
2.样本收集与处理：检测所需的样本主要为血清或血浆，采集后应妥善保存并尽快进行检测，以保证检测结果的准确性。
3.检测试剂盒：选择质量可靠、灵敏度高、特异性强的检测试剂盒，以确保检测结果的可靠性和稳定性。
4.检测设备：高效稳定的检测设备可以保证检测过程的顺利进行，提高检测效率。
5.检测环境：干净、恒温、恒湿的检测环境有助于减少实验误差。
6.检测人员：具备专业知识和技能的检测人员可以保证检测过程的正确性和结果的可靠性。
7.检测结果判定：根据试剂盒提供的参考范围，判断受检者IGG抗体水平是否异常。
8.结果解读：结合检测结果和患者临床表现，为患者提供合理的饮食建议和防治措施。
9.检测报告：制作规范、详细的检测报告，便于患者和临床医生了解检测结果及采取相应措施。
10.检测误差与排除：了解并排除实验过程中的干扰因素，确保检测结果的准确性。
11.检测周期：根据检测需求和患者情况，合理安排检测周期。
12.检测费用：合理控制检测成本，提高检测性价比。
13.检测临床应用：根据临床需求，为患者提供有针对性的检测项目。
14.检测注意事项：提醒患者在检测过程中注意相关事项，确保检测顺利进行。
三、食物IGG抗体检测的意义及建议食物IGG抗体检测有助于患者了解自己的食物过敏原，为饮食调整提供依据。
在检测过程中，应注意选择合适的检测方法、试剂盒和设备，确保检测结果的准确性。
猪免疫球蛋白AIgA定量检测试剂盒ELISA
猪免疫球蛋白A(IgA)定量检测试剂盒（ELISA）利用说明书仅供科研利用，不得用于医学诊断。
利用前认真阅读本说明书。
用途：用于定量检测猪血清、血浆及相关液体样本中免疫球蛋白A(IgA)的含量。
工作原理本试剂盒采纳双位点夹心酶联免疫吸附法（ELISA），测定样品中猪免疫球蛋白A(IgA)的水平。
向预先包被猪免疫球蛋白A(IgA)抗体的酶标孔中加入标准品、待测样本和HRP标记的免疫球蛋白A(IgA)抗体，通过温育和洗涤，去除未结合的组分，然后再加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅与样品中猪免疫球蛋白A(IgA)的浓度呈正相关。
试剂盒组成注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：800、400、200、100、50、0 ng/ml需要而未提供的试剂和器材1．37℃恒温箱。
2．标准规格酶标仪。
3．周密移液器及一次性吸头4．蒸馏水，5．一次性试管6．吸水纸注意事项1．从2-8℃掏出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平稳至少30分钟。
酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保留。
2．各步加样均应利用加样器，并常常校对其准确性，以幸免实验误差3．建议所有标准品、样本都做双份检测。
4．严格依照说明书的操作进行，实验结果判定必需以酶标仪读数为准.5．为幸免交叉污染，要幸免重复利用手中的吸头和封板膜。
6．不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前利用。
7．底物B对光灵敏，幸免长时刻暴露于光下。
洗板方式手工洗板方式：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下使劲拍几回；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。
依照需要，重复此进程数次。
自动洗板：若是有自动洗板机，应在熟练利用后再用到正式实验进程中标本要求1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
2．标本搜集后及早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
人免疫球蛋白G(IgG)酶联免疫分析
人免疫球蛋白G(IgG)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T2.5μg/ml -80μg/ml使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中免疫球蛋白G(IgG)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人免疫球蛋白G(IgG)水平。
用纯化的抗-IgG抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入免疫球蛋白G(IgG)，再与HRP 标记的羊抗人抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白G(IgG)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人免疫球蛋白G(IgG)浓度。
试剂盒组成标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
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ＬｕＺ ｏ ｇｏ ｇ Ｍａ ａ ｂｎ Ｇ ｏＤ ｎ ｗ ｉＬｕＪ ， ｎ ａｉｇ ｉ ｈｎ ｙｎ ， ｏ ｉ， ａ ｏ ｇ ｅ， ｉ ｉ ＷａｇＹ ｊ Ｘｉ ｎ ｎ
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本研究 通过制备 全 的功能性蛋 白质饲 料 ， 断奶 仔猪饲 养 中已经成 为 需一 种快速检测方 法解决这个 问题 。 在 猪 ＩＧ单克 隆抗 体 ， ｇ 进行 调试 优 化 ， 建立 了基 于 间接 必不 可少 的蛋 白饲料 。 血浆蛋 白粉 目前 还无统 一质量 标准 ， 已形成业 竞 争酶联免疫原 理 的快速 检测方法 。 但
沫
饵斛工业》２１ ・００年鞭 ３ 簟嗣 １ １ ５
猪 血浆 蛋 白粉 中 ＩＧ含 量 的 ｇ 酶联免疫检测 方法研究
刘 中勇
摘
马孝斌
高东微
刘
津
王雅静
要： 猪血 浆蛋 白粉 已经成为断奶仔猪理 想和必 需的蛋 白饲料 来源。评 价血浆蛋 白粉 质量的 重
要指标就 是其 中 ＩＧ的含 量。研 究通过制备猪 ＩＧ单 克隆抗体 ， 优化后 建立 了相应 的酶联 免疫检 ｇ ｇ 调试
血 浆蛋 白粉 （ ｒ — ｒ ｄＰａｍ ｒｔ ｎ Ｓ Ｐ ） Ｓ ａ ｄｉ ｌ ａＰｏｅ ， Ｄ Ｐ是 ｐｙ ｅ ｓ ｉ
内认 可的检测 指标 ， 官检测 、 如感 显微镜 分析 、 水溶 性
利用 现代生物技 术 和加工手段 ， 对新 鲜血液进行 抗凝 检 测 、 常规指 标 检测 、 胶实 验及 免 疫球 蛋 白 ＩＧ定 凝 ｇ 。其 中 Ｉ ｇ Ｇ的检测 基层使 用 的主要 是免 疫单 处 理和 分离 ， 将血 浆从 血液 中分 离 出来 ， 再进 行 压缩 量 检测 和低 温保存 ，然后采 取特殊 的工艺进 行喷雾 干燥 ， 最 扩 散法 ， 方法耗 时长 ， 般需 要 １ ２ｄ才能 出结果 ， 该 一 － 后制 成乳 白色或 浅褐色 的粉末 状产 品Ｉ 由于血浆蛋 重 复性也差 【 ｌ 捌。 ３ Ｊ 。而作 为 国家标 准 的液 相色谱方 法 由于 在基层难 以推广 因此 目前亟 。 白粉 含有丰 富的营养 物质 ， 作为一 种新型 、 其 高效 、 安 仪 器及检测成本较 高 ，
蛋 粉 ； 免疫球 蛋 白 Ｇ； 克隆抗体 ； 单 酶联 免疫检测
中图分类号 ：８ ６１ ￥ １．７ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ：０ １ ９ １ （０ ０ １— ０ ２ ０ １０ — ９ Ｘ ２ １ ）５ ０ ４ — ３
Ｓ ｕ ｎ ｑｕａ ｉａｔｖ ｎａ ｙ ｉ ｆＩ Ｇ ｎ ｓ ｒ ｙ ｔ ｄｙ ｏ ｎｔｔ ｉ ｅ ａ ｌ ｓｓ ｏ ｇ ｉ ｐ ａ －ｄｒｅ ｒ ｉ ａ ｍ ａ ｂｙ ｅ ｙ ｉ ｄ ｐｏ ｃｎｅ ｐｌ ｓ ｎｚ ｍｅ
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