用环磷酰胺建立小鼠免疫抑制动物模型
1 材料与方法
1. 1. 2 主要试剂环磷酰胺、RPMI 1640 培养
液( 含L-谷氨酰胺，)、Hanks 液( HyClone)、MTT 试剂、
PBS 缓冲溶液( pH 值7. 2 ～ 7. 4，HyClone)、丝裂霉素C、SA 缓
冲液，绵羊红细胞，补体( 豚鼠血清)、都氏试剂、LDH 基质液、
P815 细胞( 购于协和医科大学基础医学细胞中心)、YAC-1 细
胞、FITC-Anti-CD3、PE-Anti-CD4、PerCP-Anti-CD8
荧光抗体)。
1. 2 动物与分组
Balb /C 小鼠90 只，雌性，6 ～ 8 周龄，体重18 ～ 22g。颗粒饲料，室温(22 ± 2)℃ ，湿度60% ～ 80% 。
动物在实验室条件下检疫1 周后，实验分为3 项处理进
行，(1) 处理一:测定动物体重、脾脏重量及系数;(2) 处理二:
测定NK 细胞活性，细胞毒性T 细胞活性;(3) 处理三:测定血
清半数溶血值。每项处理随机分为空白对照组、CTX-1 组和
CTX-2 组。
1. 3 实验方法和测定指标
1. 3. 1 剂量选择试验前经急性经口毒性试验确定CTX
的LD50为240mg / kg，以1 /4 LD50做为本试验中CTX-1 组的
CTX 剂量，即60 mg / kg 环磷酰胺，用蒸馏水配制，每日经口给
予。CTX-2 组每日经口给予蒸馏水，试验结束前一天经腹腔
注射给予动物200 mg / kg 环磷酰胺［2，3］( 用蒸馏水配制)。另
设空白对照组，蒸馏水代替受试物，每日经口给予。动物灌胃
容积为0. 3ml /10g，每周称量体重调整灌胃量，连续灌胃4 周
后测定各项免疫指标。
1. 3. 2 血液中T、B 淋巴细胞分类计数［4］ 动物处死前眼
眶内眦静脉取血，EDTA-K2抗凝，每只设定3 支流式试管进行
测定，每管加入50μl 抗凝血。分别在3 管中加入CD3 /CD19
，CD3 /CD4 /CD8.不同荧光素标记的单克隆小鼠抗体。每管加
入2ml FACS 红细胞裂解液，室温下避光保存20min。1200r /
min 离心5min，弃去上清液。每管再加入2ml PBS，1200r /min
离心5min，弃去上清液。加入0. 5ml PBS 混匀后上流式细胞仪进行检测。
1. 3. 3 细胞毒性T 淋巴细胞活性试验［5，6］
1. 3. 3. 1 脾细胞悬液的制备( 效应细胞) 无菌取脾，用4 层
纱布将脾磨碎，制成单细胞悬液。用Hank＇s 液洗2 次，每次离
心10min(1000r /min)。弃上清将细胞浆弹起，加入0. 5ml 灭
菌水20s，裂解红细胞后再加入5ml Hank’s 液，混匀后1000r /
min，10min 离心，用1ml 含10% 小牛血清的RPMI1640 完全培
养液重悬，调整细胞浓度为2 × 107 个/ml;加0. 5ml 此细胞悬
液于24 孔培养板，留一孔不加脾细胞作为对照孔。
1. 3. 3. 2 制备刺激细胞1000r /min，10min 离心处于对数生
长期的P815 细胞，用5ml DMEM 培养液悬浮P815 细胞于
15ml 离心管中，计数细胞。加入丝裂霉素C，相当于50μg / (2
～ 5) × 107 个细胞。用锡纸包裹离心管以避光，在37℃ 水浴
30min。用Hank’s 液洗P815 细胞3 次，之后Hank’s 液悬浮 P815 细胞，室温孵育15 ～ 20min 后，离心1 次。将P815 悬浮
于培养液中，计数细胞及活性，调整终浓度为1. 2 × 106 个/
ml，加0. 5ml 此悬液于含有脾细胞悬液的24 孔( 包括对照孔)
板中。37℃、5% CO2孵育5 天。5 天期间，每隔一天换一次液。
1. 3. 3. 3 制备效应细胞收集24 孔培养板中的培养物，用
Hank’s 液洗1 次，200r /min 离心10min，收集细胞，重悬于
RPMI1640 培养液中，计数细胞及活性，调整细胞浓度2 × 107 /
ml。用完全培养液配制3 个系列稀释的细胞悬液，每个稀释
度100μl，做3 个复孔。
1. 3. 3. 4 制备靶细胞离心处于对数生长期的P815 细胞，
重悬于0. 5ml Hank’s 液里，离心后重悬于RPMI1640 完全培
养液，调整细胞浓度为2 × 105 个/ml。
1. 3. 3. 5 CTL 检测按效应细胞和靶细胞比为100∶ 1、50∶ 1、
25∶ 1和12. 5∶ 1( 各加100μl) 在圆孔96 孔培养板的培养孔中
加入细胞，每孔液体总体积为200μl，设3 个复孔。同时设靶
细胞自然释放对照组(0. 1ml 靶细胞+ 0. 1m 培养液) 和最大
释放对照组(0. 1ml 靶细胞+ 0. 1ml 1% NP-40 液) ，效应细胞
对照孔(0. 1ml 效应细胞+ 0. 1ml 培养液) ，用96 孔板水平转
头500r /min 离心5min，37℃、5% CO2
培养4 ～ 6h。1000r /min
离心5min，每孔吸取100μl 上清，加于另一ELISA 反应板的
孔中，每孔中加入新鲜配制的底物液50μl，室温避光反应
30min 后，每孔加入50μl 终止液，终止酶促反应。在酶联检
测仪492nm 波长下读取各孔A 值，CTL 活性用杀伤率表示，
按如下公式计算:CTL 杀伤率(% ) = ( 实验孔A 值－ 靶细胞
对照孔A 值－ 效应细胞对照孔A 值) / ( 靶细胞最大释放孔A
值－ 靶细胞对照孔A 值) × 100% 。
1. 3. 4 NK 细胞活性测定
1. 3. 4. 1 靶细胞传代实验前24h 将靶细胞进行传代培养，
应用前以Hank’s 液洗2 次，用RPMI1640 完全培养液调整细
胞浓度为4 × 105 个_______/ml。
1. 3. 4. 2 效应细胞和靶细胞之比经纯化的小鼠脾细胞，用
RPMI1640 完全培养液调整细胞浓度。效应细胞的数量为
5 × 106 个/ml，效应细胞和靶细胞之比为50∶ 1。
1. 3. 4. 3 NK 细胞活性测定反应孔加靶细胞和效应细胞各
100μl 于96 孔U 形培养板，靶细胞自然释放孔，加靶细胞和
培养液各100μl，靶细胞最大释放孔加靶细胞和1% 的NP40
或2. 5% Triton 各100μl，每样做3 个平行样。37℃、5% CO2
条件下培养4h。培养结束后，96 孔培养板1500r /min 离心
5min，每孔吸取上清100μl 置于平底96 孔板中，同时加入
LDH 基质液100μl，室温避光反应3min，每孔加入1mol /L 的
HCl 30μl，在酶标仪490nm 处测定A 值。用下列公式计算:
NK 细胞活性(% ) = ( 反应孔A 值－ 靶细胞自然释放孔A
值) / ( 最大释放孔A 值－ 靶细胞自然释放孔A 值) × 100% 。
1. 3. 5 半数溶血值的测定(HC50
) 1. 3. 5. 1 制备补体采集豚鼠血，分离出血清( 至少5 只豚
鼠的混合血清) ，将1ml 压积SRBC 加入到5ml 豚鼠血清中，
放4℃ 冰箱30min，经常振荡，离心取上清，分装，－ 70℃ 保存。
用时以SA 液按1∶ 8稀释。
第3 期齐丽娟，等. 用环磷酰胺建立小鼠免疫抑制动物模型315
1. 3. 5. 2 免疫动物及血清分离制备压积绵羊红细胞
( SRBC) ，并用生理盐水配成2% ( V /V) 的细胞悬液，每只鼠腹
腔注射0. 2ml 进行免疫。4 ～ 5 天后，由动物眼眶内眦静脉取
血，2000r /min 离心10min 收集血清。
1. 3. 5. 3 溶血反应取血清用SA 缓冲液稀释( 一般为
200 ～ 500 倍)。将稀释后的血清1ml 置试管内，依次加入
10% SRBC 0. 5ml，补体1ml( 用SA 液按1∶ 8稀释)。另设不加
血清的对照管( 以SA 缓冲液代替)。置37℃ 恒温水浴中保温
15 ～ 30min 后，冰浴终止反应。2000r /min 离心10min。取上
清液1ml，加都氏试剂3ml，同时取10% SRBC 0. 25ml 加都氏
试剂至4ml，充分混匀，放置10min 后，于540nm 处以对照管
作空白，分别测定各管光密度值。按下列公式计算HC50。
HC50 =
样品光密度值
SRBC 半数溶血时的光密度值
× 稀释倍数
1. 4 统计分析
采用SPSS 13. 0 统计软件进行方差分析或非参数检验。
2 结果
2. 1 CTX 不同给药方法对Balb /C 小鼠体重及免疫器官重
量的影响
由表1 可见，CTX-1 组和CTX-2 组小鼠体重较对照组显
著降低(P < 0. 001)。CTX-1 组小鼠脾脏绝对和相对重量较
对照组增高(P < 0. 001) ，CTX-2 组小鼠脾脏绝对和相对重量
较对照组降低(P < 0. 001，P < 0. 05)。
表1 CTX 不同给药方法对Balb /C 小鼠体重及
免疫器官重量的影响
Table 1 The weight and absolute and relative
spleen weight in each group( n = 8，珔x ± s)
组别体重( g)
脾脏
绝对重量( g) 相对重量(% )
对照组22. 36 ± 1. 06 0. 071 ± 0. 007 0. 319 ± 0. 031
CTX-1 组16. 31 ± 2. 05 (3) 0. 081 ± 0. 018 (1) 0. 505 ± 0.
142 (2)
CTX-2 组19. 18 ± 0. 48 (3) 0. 047 ± 0. 009 (2) 0. 243 ± 0.
042 (1)
注:与对照组比较(1) P < 0. 05，(2) P < 0. 001
2. 2 CTX 不同给药方法对Balb /C 小鼠淋巴细胞分类计数
的影响
由表2 可见，CTX-1 组小鼠外周血LYM 和LYM(% )、B
复方天门冬多糖注射液对小鼠免疫功能影响的观察
动物医学进展，２０１３，３４（８）：５０—５５ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
复方天门冬多糖注射液对小鼠免疫功能影响的观察
胡庭俊，施君，潘责珍，赖胜基
（广西大学动物科学技术学院，广西南宁 ，谢丽丽
５３０００５）
摘 要：为研究复方天门冬多糖注射液对小鼠免疫功能的影响，采用环磷酰胺（ＣＴＸ）作为抑制剂建立
小鼠免疫抑制模型，注射不同配比的复方天门冬多糖注射液，测定小鼠胸腺和脾脏脏器指数、血清白细胞介 素２（ＩＬ一２）水平及腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数，并从组织形态上观察胸腺与脾脏的结构变化。
结果表明，复方天门冬多糖注射液对小鼠胸腺指数和脾脏指数无显著影响；复方天门冬多糖Ⅳ组可以极显著
提高小鼠血清中ＩＬ一２的水平（Ｐ＜Ｏ．０１）；复方天门冬多糖Ｉ组、Ⅳ组极显著提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬
能力（Ｐ＜０．０１）；复方天门冬多糖能不同程度地减缓环磷酰胺所致小鼠胸腺和脾脏的萎缩，增加胸腺皮质细
胞数量，保持脾小结完整和增加脾淋巴细胞数量。表明复方天门冬多糖对小鼠的非特异性免疫功能具有一
定的促进作用。
关键词：天门冬多糖注射液；免疫抑制；免疫调节
中图分类号：￥８５３．７５ 文献标识码：Ａ
天门冬具有抗菌、抗肿瘤、抗溃疡、抗腹泻、调节 血糖稳定等功效［１ ］。田七总皂苷能提高机体的免
疫力，促进脾淋巴细胞增殖，增加小鼠腹腔巨噬细胞
的吞噬能力，提高小鼠自然杀伤细胞（ＮＫ）的活力，
还具有抗炎、抗衰老、抗肿瘤和调节中枢神经系统功 能的作用［３ ］。本试验中采用天门冬多糖和三七总
皂苷按照不同的比例组成复方制剂，观察该复方制
剂对小鼠血清细胞因子、小鼠腹腔巨噬细胞、免疫器
官指数和组织形态学的影响，探讨复方天门冬多糖
注射液（ｃｏｍｐｏｕｎｄ ａｓｐａｒａｇｕｓ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｉｎｊ ｅｃ—
ｔｉｏｎ，ＣＡＰ）的免疫药理学作用。 １材料与方法 文章编号：１００７－５０３８（２０１３）０８—００５０—０６
暹罗鳄鱼鳞胶原蛋白多肽对小鼠免疫功能的影响
２０１ １年１２月第１卷第２４期
暹罗鳄鱼鳞胶原蛋白多肽对小鼠免疫功能的影响
王凤林１ 万林春２ 李谨谨３ 张硕峰３
１．武警总医院药剂科，北京１０００３９；２．江西省食品药品检验所，江西南昌３３００２９；３．北京中医药大学，北京１００１０２
【摘要】目的观察暹罗鳄鱼鳞胶原蛋白多肽对小鼠免疫功能的影响。方法采用环磷酰胺为免疫抑制剂，获得免疫功能
低下的小鼠动物模型。比较小鼠服用胶原蛋白前后，小鼠Ｔ淋巴细胞增殖功能、ＮＫ细胞的杀伤功能以及小鼠碳粒廓清
能力。结果胶原蛋白多肽对免疫功能低下小鼠Ｔ淋巴细胞的增殖功能、ＮＫ细胞的杀伤活性，均具有免疫增强作用 （Ｐ＜０．０５），并呈剂量依赖性。结论鳄鱼鳞胶原蛋白多肽具有正向调节小鼠免疫功能的能力。
［关键词】暹罗鳄；胶原蛋白多肽；免疫功能
【中图分类号】Ｒ９６５ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】２０９５—０６１６（２０１１）２４—３４—０２
Ｏｂｓｅｒｖｅ ｓｉａｍｅｓｅ ｃｒｏｃｏｄｉｌｅｓ ｓｃａｌｅ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｎ ｔｈｅ
ｍｉｃｅ ｉｍｍｕｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ
ＷＡＮＧ Ｆｅｎｇｌｉｎ ＷＡＮ Ｌｉｎｃｈｕｎ ＬＩ ｉｎ ＺＨＡＮＧ Ｓｈｕｏｆｅｎｇ
１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｅｏｐｌｅ’Ｓ Ａｒｍｅｄ Ｐｏｌｉｃｅ Ｆｏｒｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００３９，Ｃｈｉｎａ；２．Ｊｉａｎｇｘｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｎａｎｃｈａｎｇ ３３００２９，Ｃｈｉｎａ；３．Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００１２，Ｃｈｉｎａ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｓｉａｍｅｓｅ ｃｒｏｃｏｄｉｌｅｓ ｓｃａｌｅ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ ｏｎ ｔｈｅ ｍｉｃｅ ｉｍｍｕｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｃｙｃｌｏｐｈ０ｓｐｈａｍｉｄｅ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ｇｅｔｔｅｄ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌ ｗａｓ ｌｏｗ ｉｎ ｍｉｃｅ ｂｅｆｏｒｅ ａｎｄ ａｆｔｅｒ ｔａｋｉｎｇ
环磷酰胺免疫抑制机制及在动物模型上的应用
环磷酰胺免疫抑制机制及在动物模型上的应用
钟金凤;方热军
【期刊名称】《中国免疫学杂志》
【年(卷),期】2016(032)010
【摘 要】近年来,环境污染、生态失衡等引发的人与动物免疫抑制性疾病逐年上升。为进一步研究此类疾病,免疫抑制模型的建立显得尤为重要。环磷酰胺（Cyclophosphamide,CTX）是制备动物免疫抑制模型中应用广泛的药物,它最早可追溯到第一次世界大战,耶鲁大学Louis Goodman和Alfred Gilman教授解剖战死于生化武器的士兵时发现芥子气有杀死淋巴组织的效果,由此揭开免疫抑制剂的序幕。
【总页数】6页(P1541-1546)
【作 者】钟金凤;方热军
【作者单位】湖南农业大学动物科技学院，长沙 410128;湖南农业大学动物科技学院，长沙 410128
【正文语种】中 文
【中图分类】R392.33
【相关文献】
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参苓白术散对免疫抑制小鼠免疫功能的影响研究
参苓白术散对免疫抑制小鼠免疫功能的影响研究
袁丕瑞
【期刊名称】《临床合理用药杂志》
【年(卷),期】2011(4)05X
【摘 要】目的观察参苓白术散对免疫抑制小鼠免疫功能的影响。方法采用环磷酰胺诱导小鼠造成免疫抑制动物模型,观察其对小鼠单核巨噬细胞吞噬能力以及迟发型超敏反应的影响。结果参苓白术散能显著提高小鼠单核巨噬细胞吞噬功能及小鼠迟发型超敏反应。结论参苓白术散有增强免疫抑制小鼠免疫功能的作用。
【总页数】2页(P67-68)
【关键词】参苓白术散;免疫抑制小鼠;免疫功能
【作 者】袁丕瑞
【作者单位】浙江省桐乡市中医医院
【正文语种】中 文
【中图分类】R285
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季德胜蛇药对小鼠免疫调节作用的初步研究
季德胜蛇药对小鼠免疫调节作用的初步研究
李阳;汤伟;李慧;汪晓莺
【期刊名称】《交通医学》
【年(卷),期】2009(23)3
【摘 要】目的:研究季德胜蛇药对小鼠免疫功能的调节作用.方法:将BALB-c小鼠48只随机分为4组,分别为正常对照组、环磷酰胺模型组、蛇药1组、蛇药2组.各组均以灌胃给药,2次/天,连续21天,正常对照组和造模组给予同体积的生理盐水,其余实验组分别给予相应剂量的药物治疗.给药第15天起,除正常对照组外各组小鼠均用环磷酰胺30mg/kg皮下注射,连续7天制备免疫功能低下模型.末次用药1小时后,所有动物均摘眼球取血,分离血清;记录小鼠体重,脱颈椎处死后,无菌取脾、胸腺并称湿重,计算脾脏和胸腺指数;以ConA诱导脾淋巴细胞增殖.用MTT法检测并计算淋巴细胞增殖刺激指数(SI).结果:季德胜蛇药治疗组小鼠的体重下降程度低于模型组,胸腺及脾脏指数高于模型组;治疗组SI明显高于模型组.结论:季德胜蛇药可提高免疫抑制小鼠的细胞免疫功能.
【总页数】3页(P233-235)
【作 者】李阳;汤伟;李慧;汪晓莺
【作者单位】南通大学医学院传染病学教研室;南通大学医学院传染病学教研室;南通大学医学院传染病学教研室;免疫学教研室,江苏,226001
【正文语种】中 文
【中图分类】R996.3 【相关文献】
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石金钱龟龟甲粉增强机体免疫力作用研究
石金钱龟龟甲粉增强机体免疫力作用研究
摘要：目的 研究石金钱龟龟甲粉对免疫抑制小鼠的免疫调节作用。方法 构建免疫抑制小鼠模型，将小鼠随机分为5组，即空白对照组、模型对照组及石金钱龟龟甲粉高、中、低剂量组。小鼠以灌胃的方式给予不同剂量石金钱龟龟甲粉溶液后，分别测定各组脾脏指数、脾组织中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、丙二醛（MDA）和总抗氧化能力（T-AOC）水平，MTT法测T、B淋巴细胞增殖，ELISA法测脾细胞上清TNF-α和IL-2含量。结果 与模型组相比，石金钱龟龟甲粉各剂量组均能在一定程度上提高小鼠脾脏指数，T、B淋巴细胞增殖，提升SOD、CAT、T-AOC水平和降低MDA含量；石金钱龟龟甲粉高剂量组在提高TNF-α含量和IL-2含量方面较显著。结论 石金钱龟龟甲粉能有效拮抗环磷酰胺对小鼠免疫功能的抑制作用，提高免疫抑制小鼠的免疫力。
关键词：石金钱龟龟甲粉；免疫调节；免疫力
石金钱龟（Mauremys mutica），又名黄喉拟水龟，隶属爬行动物纲、龟鳖目、龟科、拟水龟属，国内主要分布于南方地区，国外主要分布于越南等地[1]。石金钱龟属于珍稀龟类，具有一定的观赏价值；以其为主要原料与中药配伍，既能起到抗癌解毒的功效，又能作为滋阴壮阳和延年益寿的高级滋补品，可以防治多种疾病和疑难杂症，且无任何副作用，民间常作为“药龟”进行食用，经济价值和营养价值极高[2]。目前，对石金钱龟已经成功进行殖和繁育[3]，但有关其龟肉、龟甲，龟肉深加工产品的生理活性成分的研究尚属空白。再者，人们在食用石金钱龟时也是多其龟甲丢弃。鉴于此，本实验将研究石金钱龟龟甲粉在增强机体免疫力方面的作用，旨在为石金钱龟的精深加工及其综合开发利用提供理论依据。
1 实验材料与方法
1.1实验材料及试剂
环磷酰胺：广东岭南制药有限公司，盐酸左旋咪唑：成都通德药业有限公司，四甲基偶氮唑蓝溶液（MTT）、胎牛血清、RPMI-1640培养基：美国Sigma公司，SD大鼠、大鼠IL-2、ACTH、IL-6、TSH、CORT、TNF-α ELISA试剂盒：南京建成生物工程研究所，超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒、谷胱甘肽（GSH）试剂盒、过氧化氢酶（CAT）测定试剂盒、丙二醛（MDA）测定试剂盒、一氧化氮（NO）试剂盒、总抗氧化能力（T-AOC）测定试剂盒：碧云天生物技术有限公司。
CFSE示踪与流式细胞仪检测法研究环磷酰胺对T淋巴细胞增殖的影响
◇实验方法学◇
CFSE示踪与流式细胞仪检测法
研究环磷酰胺对T淋巴细胞增殖的影响
包晶晶,林海霞,马 璟
(上海医药工业研究院国家上海新药安全评价研究中心,上海 201203)
收稿日期:2009-12-30,修回日期:2010-03-18基金项目:科技部“十一五新药创制”重大专项资助课题(No2008ZX093052006);上海市科委企业技术创新团队项目资助(No08430516200)作者简介:包晶晶(1983-),女,硕士生,E2mail:jjb19831@;马 璟(1963-),女,博士,研究员,博士生导师,通讯作者,Tel:0212508003332106中国图书分类号:R2332;R329.24;R331.125;R979.1;
R979.5
文献标识码:A文章编号:1001-1978(2010)06-0828-05
摘要:目的 利用定量分析羧基荧光素乙酰乙酸(carboxyflu2
oresceindiacetatesuccinimidylester,CFSE)时间系列数据的
方法研究淋巴细胞细胞增殖动力学及免疫抑制剂对淋巴细
胞增殖抑制机制的研究。方法 环磷酰胺造成小鼠免疫抑
制模型,并用CFSE染料给对照组和给药组动物的淋巴细胞
染色,通过数学模型拟合法分析数据。结果 对照组和给药
组淋巴细胞增殖进入第一代分裂的时间分别是27117h和
22188h,每代细胞死亡率分别为20%和40%;进入分裂前的
细胞半衰期分别为31153h和43132h。结论 通过数学拟
合法对CFSE数据进行定量分析,探讨药物对淋巴细胞增殖
影响的机制,该实验中的药物环磷酰胺抑制淋巴细胞增殖的
方式可能是使细胞增殖时每代细胞的死亡率增加所致。
关键词:CFSE;定量分析;数学拟合;流式细胞仪;淋巴细胞
增殖;环磷酰胺
传统的测定淋巴细胞增殖的方法只能通过细胞数量的
变化来反映细胞增殖的的变化,不能更深入的洞察细胞增殖
是如何被改变的。例如3H参入法检测增殖时,一组细胞(假
银杏叶提取物的免疫调节作用研究
银杏叶提取物的免疫调节作用研究
温锐;王俭
【摘 要】目的 研究银杏叶提取物对免疫功能低下小鼠免疫系统的调节作用.方法
分别建立由环磷酰胺诱导的小鼠免疫功能低下碳粒廓清模型、溶血素抗体生成模型和迟发型超敏反应模型,观察银杏叶提取物对免疫功能低下小鼠的κ值、α值、HC50值和耳肿胀度的影响.结果 银杏叶提取物40、20 mg/kg组小鼠的κ值(0.090±0.021、0.083±0.024)、α值(6.23±0.55、6.11±0.55)、HC50值(162.7±62.5、148.1±56.3)及耳肿胀程度[(17.1±6.8)、(14.5±5.2) mg]高于模型对照组[0.072±0.013,5.52±0.62,95.4±38.9,(9.0±3.5) mg],差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05).结论 银杏叶提取物可显著提升环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠的免疫能力,对特异性和非特异性免疫功能均具有较好的调节作用.
【期刊名称】《实用药物与临床》
【年(卷),期】2018(021)010
【总页数】3页(P1109-1111)
【关键词】银杏叶提取物;免疫调节;环磷酰胺;免疫功能低下
【作 者】温锐;王俭
【作者单位】中国医科大学附属盛京医院麻醉苏醒室,沈阳110004;中国医科大学附属盛京医院麻醉苏醒室,沈阳110004
【正文语种】中 文
0 引言
银杏叶性甘、味苦、涩、平，归心、肺经，有敛肺、平喘、活血化瘀、止痛等功效。研究表明，银杏叶所含的药用活性成分较多，包括萜烯酯和黄酮苷等，对多种疾病具有良好的预防和治疗作用[1-3]。近年来，因为环境污染、工作压力激增等因素，临床实践中发现，机体免疫异常的患者数量有逐年增加的趋势。人体免疫功能低下会诱发很多疾病。因此，亟待寻找合适、可有效调节机体免疫功能的药物。目前，银杏叶提取物对免疫功能影响的相关报道很少。 本研究拟通过观察银杏叶提取物对免疫功能低下小鼠免疫功能的影响，为临床实践提供理论依据。
养血升白方对环磷酰胺致小鼠骨髓抑制及免疫抑制的研究
北京中医２００７年７月第２６卷第７期Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ！ ， ， ！： ： ！ ：！
・实验研究・
养血升白方对环磷酰胺致小鼠骨髓抑制
及免疫抑制的研究＊
李 力 张彩霞 曹丽蓉 李 霞
【摘要】 目的探讨中药复方养血升白方对环磷酰胺诱导的骨髓抑制及免疫抑制小鼠的作用及其机理。方法 将小鼠
随机分为５组：正常对照组、模型对照组、养血升白方小剂量组、中剂量组和大剂量组。模型组、中药组腹腔注射环磷酰胺造
模，同时中药组给予不同剂量养血升白方灌胃，对照组、模型组给予生理盐水灌胃，共１Ｏ天。检测小鼠外周血象、骨髓ＣＤ＋细
胞在骨髓有核细胞中的比例、自然杀伤（ＮＫ）细胞活性以及免疫器官指数的变化。结果 养血升白方３个剂量均可升高小鼠
外周血象、提高骨髓ＣＤ；细胞在骨髓有核细胞中的比例、增强ＮＫ细胞活性、增加脾、胸腺指数，与模型组比较均有显著性差
异（Ｐ＜Ｏ．０５或Ｐ＜Ｏ．０１）。结论养血升白方具有改善小鼠骨髓抑制、增强小鼠免疫功能的作用。
【关键词】环磷酰胺；骨髓抑制；免疫抑制；实验研究
化疗作为恶性肿瘤的三大治疗手段之一，在杀
灭癌细胞的同时，存在一定的毒副作用，骨髓抑制及
免疫抑制就是化疗常见的毒副作用。养血升白方为
一临床经验方，具有养血补气、滋补肝肾之功。经多
年临床使用，对肿瘤患者化疗后出现的毒副反应有
较好疗效。本实验利用环磷酰胺使小鼠骨髓造血功
能及免疫功能受到抑制，观察养血升白方对小鼠骨
髓造血功能及免疫功能的影响，以了解养血升白方
对化疗引起的骨髓抑制及免疫抑制的防治作用，为
其临床应用提供实验依据。
１材料
１．１ 动物
８～１０周龄、体重１８－－２２ ｇ昆明种小白鼠，雌雄
各半，共９Ｏ只，由华中科技大学同济医学院实验动
物室提供。实验前雌雄分笼饲养数天。
１．２试剂
ＦＩＴＣ标记的大鼠抗小鼠ＣＤ３ 抗体及对照抗体
（美国Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ公司），四噻唑盐（ＭＴＴ，又称
楮实子对环磷酰胺致免疫功能低下小鼠免疫功能的影响
第26卷 第5期2008年5月中 华 中 医 药 学 刊CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINEVo.l26No.5May2008
1023 中华中医药学刊楮实子对环磷酰胺致免疫功能低下小鼠免疫功能的影响王玉凤,凤良元,鄢顺琴,袁 静(安徽中医学院,安徽合肥230038) 摘 要:目的:研究楮实子对环磷酰胺模型小鼠免疫功能的影响。方法:以环磷酰胺制备小鼠免疫低下模型并结合体外药理实验,测定灌胃给药后小鼠体内巨噬细胞吞噬率、血清溶血素抗体水平,并观察植物血凝素诱导T淋巴细胞的增殖反应。采用含药血清体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,MTT法考察巨噬细胞的活性,并观察体外培养的巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬百分率和吞噬指数。结果:楮实子提高免疫抑制小鼠碳粒廓清率,促进血清溶血素形成。结论:楮实子有提高免疫抑制小鼠免疫功能的作用,但未显示出促进T淋巴细胞增殖的作用。关键词:楮实子;碳粒廓清;巨噬细胞;MTT法;鸡红细胞;溶血素;T淋巴细胞;免疫抑制中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1673-7717(2008)05-1023-03EffectofFructusBroussonetiaeonImmunologicalFunctioninImmunosuppressiveMiceInducedbyCyclophosphamideWANGYu-feng,FENGLiang-yuan,YANShun-qin,YUANJing(AnhuiCollegeofTraditionalChineseMedicine,Hefei230038,Anhu,iChina)Abstrac:tObjective:TostudytheimmunomodulationofFructusBroussonetiaeonimmunosuppressivemiceinducedbycyclophosphamide(CTX).Methods:TheimmunosuppressivemiceinducedbyCTXwereadministratedwithFructusBroussonetiaefor8d.Thecarbonparticleclearanceleve,lserumhemolysinleve,landproliferativeresponseofTlympho-cyteinducedbyphytohemagglutinin(PHA)ingserumcontainingdrugtocultureperitonealmacro-phage(MÆ)invitro,theeffectofFructusBroussonetiaeonactivityofMÆwerestudiedbyMTTassay.ThephagocyticabilityofthephagocytizingofchickenredbloodcellbyMÆculturedinvitrowasmeasured.Results:FructusBroussone-tiaesignificantlystrengthenedthecarbonparticleclearancelevelandthehemolysinleve.lConclusion:FructusBrous-sonetiaeimprovedimmunologicalfunctionofimmunosuppressivemiceinducedbyCTX,butdidnotshowtheeffectofthepromotingofTlymphocyteproliferation.Keywords:fructusbroussonetiae;carbonparticleclearance;macrophage;MTTassay;chickenredbloodcel;lhe-molysin;Tlymphocyte;immunodepression收稿日期:2007-12-26基金项目:安徽省教育厅青年教师/资助计划0项目(2004jq171)作者简介:王玉凤(1974-),女,河南辉县人,讲师,硕士,研究方向:中药药理。 据文献报道,楮实子有提高机体免疫功能的作用[1],但迄今为止笔者尚未见具体实验研究报道。本实验主要研究楮实子对环磷酰胺致免疫功能低下小鼠的免疫功能的影响,并结合含药血清体外培养细胞实验,考察楮实子对体外培养的巨噬细胞活性的影响,以探讨体内外实验的相关性。1 材 料1.1 动物18~22g昆明种小鼠,雌雄兼用,安徽医科大学实验动物中心提供。1.2 药品与主要试剂实验用楮实子药材经安徽中医学院中药教研室凤良元教授鉴定符合2005年版5中华人民共和国药典6规定。将药材用6倍量水微沸煎煮3次,每次0.5h,合并提取液,在水浴上浓缩成1g生药/mL供实验用。环磷酰胺(CTX)粉针剂;左旋咪唑(LMS)片;印度墨汁;4%Giemsa-磷酸盐缓冲液;鸡红细胞(CRBC)悬液;5%豚鼠补体;RPMI1640细胞培养液制备的植物血凝素(PHA)溶液(250Lg/mL);噻唑蓝(MTT)溶液(5mg/mL);Hanks'液等。1.3 主要仪器UV757CRT紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司);318酶标仪(上海SANCO);SW-CJ-1F型净化工作台(上海一恒科技有限公司);HH.CP-TW型二氧化碳培养箱(上海一恒科技有限公司);DL-4000B型冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)等。2 方 法2.1 分组给药及免疫低下模型的制备小鼠按体重随机分为4组,每组10只:(1)正常对照组;(2)CTX模型组;(3)LMS阳性对照组;(4)给药组。给药组按15mL/kgig给药,LMS组按30mg/kgig给药,正常对照组及CTX模型组ig给等量生理盐水,每日1次,连续8天。给药后第3天,除正常组外,每只小鼠均ipCTX30mg/kg,连续3天,制备CTX致小鼠免疫低下模型。DOI：10.13193/j.archtcm.2008.05.128.wangyf.064第26卷 第5期2008年5月中 华 中 医 药 学 刊CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINEVo.l26No.5May2008