简易胶原酶消化法提取兔原代肝细胞及培养

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ｎｏｍｉｃｌａｍｅｔｈｏｄｏｆｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎ．ＭｅｈｏｔｄｓＲａｂｂｉｔｐｉｍａｒｙｒｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓｗｅｒｅｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｌｉｖｅｒｔｉｓｓｕｅｐｉｅｃｅｓｏｆｎｅｗ—
Ⅳ 型胶原酶对新生免肝脏组织小块进行消化以提取兔原代肝细胞，体外进行单层培养，并对提取的兔肝细胞的细胞数量、
细胞活力和细胞增殖能力进行检测。结果提取的肝细胞主要呈类圆形，排列整齐，细胞透亮有光泽，立体感好．细胞界限清晰。１ｇ肝组织可分离１．１２ｘｌ０６个肝细胞，成活率为７７％。细胞增殖能力呈先升后降趋势，细胞生长曲线较符合原代细胞生长的一般规律。结论该实验方法简单、 Leabharlann Baidu操作，无需特殊设备，适合一般实验室开展原代肝细胞的提取、分离与培养
【关键词】原代肝细胞；ｌＶ型胶原酶；细胞提取；细胞培养；新生兔ｄｏｉ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１００９ — ５５１９．２０１７．１２．００２文献标识码：Ａ文章编号：１００９ — ５５１９（２０１７）１２．１７６４－０２
现代医药卫生２０１７年６月第３３卷第１２期ＪＭｏｄＭｅｄＨｅａｌｔｈ，Ｊｕｎｅ２０１７Ｖ０１．３３，Ｎｏ．１２
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论著・
简易胶原酶消化法提取兔原代￣ｌｑ：ｌｆｔｔ胞及培养
唐靓，罗涛，杨亚冬２７张文元（１．浙江省医学科学院保健食品研究所，杭州３１００１３；２．浙江省医学科学院生物工程研究所，杭州３１００１３）
【摘要】目的探讨简易、经济的 Ⅳ型胶原酶消化法提取分离新生兔原代肝细胞及体外培养。方法采用０．１％
ＹｎｇａＹａｄｏｎｇ２，ＺｈｎｇａＷｅｎｙｕｎ２ａ △（．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＨｅａｌｔｈＦｏｏｄ，ＺｈｅｊｉｎｇａＡｃａｄｅｍｙｆＭｅｏｄｉｃｌａＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１００１３，Ｃｈｉｎａ；２．ＩｓｔｎｉｔｕｔｅｆＢｏｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＺｈｅｊｉｎｇａＡｃａｄｅｍｙｆＭｅｏｄｉｃｌａＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈｎｇａｚｈｏｕ３１００１３，Ｃｈｉｎａ）【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｉｔｖｅＴｏｅｘｐｌｏｒｅｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｏｆｐｒｉｍａｒｙｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓｆｒｏｍｎｅｗｂｏｒｎｒａｂｂｉｔｂｙａｓｉｍｐｌｅａｎｄｅｃｏ —
ＩｓｏｌａｉｔｏｎａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｏｆｒａｂｂｉｔｐｒｉｍａｒｙｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓｕｓｉｎｇｓｉｍｐｌｅｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄＴａｎｇＬｉｎｇａｓ，ＬｕｏＴａｏ，
ｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｂｉｌｉｔｙｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄ．ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅｐｒｉｍａｒｙｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓｗｅｒｅｒｏｕｎｄ－ｌｉｋｅ，ｎｅａｔｒｏｗｓ，ｂｉｒｇｈｔｌｕｓｔｅｒ，ｗｉｔｈｇｏｏｄｓｔｅｒｅｏｓｅｎｓｅ，ａｎｄｃｌｅａｒｃｅｌｌｌｉｎｅｓ．１．１２ｘ１０ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓｃｏｕｌｄｂｅｅｘｔｒａｃｔｅｄｒｆｏｍ１ｇｌｉｖｅｒ，ａｎｄｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅｏｆｔｈｅｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓｗａｓ７７％．Ｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｃａｐａｃｉｔｙｓｈｏｗｅｄａｔｅｎｄｅｎｃｙｏｆｉｒｓｉｎｇｆｉｒｓｔａｎｄｆａｌｌｉｎｇｌａｔｅｒ，ａｎｄｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈｃｕｒｖｅｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｓｔｏｇｅｎｅｒａｌｒｕｌｅｏｆｐｉｒｍａｒｙｃｅｌｌｓｇｒｏｗｔｈ．ＣｏｎｃｌｓｉｕｏｎＴｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅ，ｅａｓｙｔｏｏｐｅｒａｔｅ，ａｎｄｎｏｎｅｅｄｓｐｅｃｉａｌｅｑｕｉｐｍｅｎｔ，ｗｈｉｃｈｉｓｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｇｅｎｅｒａｌｌａｂｏｒａｔｏｙｒｔｏｃａｒｒｙｏｕｔｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｏｆｐｉｒｍａｙｒｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ．