中药玄参中哈巴俄苷和肉桂酸的高效液相色谱法测定
中药玄参中哈巴俄苷和肉桂酸的高效液相色谱法测定
中药玄参中哈巴俄苷和肉桂酸的高效液相色谱法测定
中药材玄参中含有多种生物活性成分，其中哈巴俄苷和肉桂酸是其主要有效成分之一。
哈巴俄苷具有降血糖、保护心血管、抗炎等功能，而肉桂酸则具有降血压、清热解毒、抗菌、抗炎等作用。
因此，准确地测定玄参中哈巴俄苷和肉桂酸的含量对于中药的质量控制具有重要意义。
高效液相色谱法是目前测定天然产物中哈巴俄苷和肉桂酸含量最常用的方法之一。
通常采用C18反相色谱柱进行分离，移动相为甲醇-水溶液，流速为1.0ml/min，检测波长为280nm。
具体操作步骤如下：
1.样品制备
取一定量的玄参粉末，粉碎、过筛后称取样品，再加入精密称重的乙醇进行超声提取，离心后用滤纸过滤并调节pH值至7左右。
2.色谱柱及条件
采用反相C18色谱柱，移动相为甲醇-水溶液（60:40），流速为1.0ml/min，柱温为25°C，检测波长为280nm。
3.建立标准曲线
制备一系列不同浓度的标准溶液，通过色谱法测定其峰面积，并作出哈巴俄苷和肉桂酸的标准曲线。
4.样品分析
将处理好的样品注入色谱柱中进行分离，记录其峰面积并根据标准曲线计算出哈巴俄苷和肉桂酸的含量。
此外，为确保分析结果的准确性，必须严格控制分析过程中的各种干扰因素，如避免氧气、水分和光线的干扰。
同时，应根据实际情况调整分离条件和色谱峰的解析度。
总之，采用高效液相色谱法测定玄参中哈巴俄苷和肉桂酸的含量，是一种较为简便、快速、灵敏的方法，有助于加强对中药质量的准确控制和评价。
HPLC法测定复方黑参颗粒中肉桂酸与哈巴俄苷含量-姚东,何静,于凤斌,等
55第16卷 第5期 2014 年 5 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 16 No. 5 May，2014复方黑参颗粒由玄参、麦冬、天冬、射干和北豆根5味中药组成，具有清热解毒、养阴润肺、利咽消肿之功，在我院临床应用多年，安全可靠，疗效显著。
玄参作为处方中的君药，常见于治疗咽喉疾病的复方中药制剂中，如建民咽喉片、玄麦甘桔颗粒等[1]，地方中药书籍和药物志中也记载玄参对咽喉肿痛具有良好效果[2]，其有效成分肉桂酸和哈巴俄苷常被用作玄参及其复方制剂的含量测定指标[3-5]。
为了更好的控制复方黑参颗粒的产品质量，保证临床疗效，本文采用高效液相色谱法建立复方黑参颗粒中肉桂酸和哈巴俄苷的含量测定方法。
1 仪器与试药1.1 仪器Waters 2996高效液相色谱仪，LIBRORAEL-160分析天平，DK-98-1型电热恒温水浴锅。
1.2 试药肉桂酸对照品（供含量测定用，购自中国药品生物制品检定所，批号：110805-200508），哈巴俄苷对照品（供含量测定用，购自中国药品生物制品检定所，批号：111730-200605），甲醇（色谱纯，天津市四友精细化学品有限公司，批号：20101213），甲酸（色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司，批号：20101213）。
复方黑参颗粒（沈阳军区总医院制剂室，批号：20120705、20120929、20121023）2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱Dikma Diamonsil-C 18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：甲醇-0.5%甲酸水溶液（56∶44）等度洗脱，流速1.0 mL ·min -1，柱温25 ℃，检测器波长278 nm，进样量20 μL。
2.2 对照品溶液的制备分别精密称取肉桂酸2.04 mg，哈巴俄苷6.08 mg 对照品于50 mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，既得混合对照品溶液。
HPLC法测定清热解毒口服液中哈巴俄苷的含量
HPLC法测定清热解毒口服液中哈巴俄苷的含量发布时间：2021-12-23T05:28:02.433Z 来源：《中国科技人才》2021年第26期作者：张丹丹[导读] 建立高效液相色谱法测定清热解毒口服液中哈巴俄苷含量的方法。
哈药集团三精制药有限公司黑龙江省哈尔滨市 150069摘要:建立高效液相色谱法测定清热解毒口服液中哈巴俄苷含量的方法。
色谱柱为AgilentZorbaxSB－C18柱，流动相为乙腈－0.1%磷酸溶液(梯度洗脱)，流速为1mL?min－1，柱温为30℃。
检测波长为278nm。
哈巴俄苷在12.24～122.4μg?mL－1范围内呈良好线性关系。
平均回收率为99.52%。
精密度、稳定性、重复性试验中RSD均小于2.0%。
该方法简便、准确、重现性好，可用于清热解毒口服液中哈巴俄苷的含量测定。
关键词:高效液相色谱法；清热解毒口服液；哈巴俄苷；含量测定0引言清热解毒口服液属清热解毒类中成药，收载于《中国药典》2020年版一部。
清热解毒口服液由石膏、金银花、玄参、地黄、黄芩、栀子、连翘等12味中药组成，具有清热解毒之功效，用于热毒壅盛所致的发热面赤、烦躁口渴、咽喉肿痛；流感、上呼吸道感染见上述证候者。
因组成中的主成分哈巴俄苷的测定罕见报道，本实验采用高效液相色谱法测定清热解毒口服液中哈巴俄苷的含量，为清热解毒口服液的质量评价提供参考依据。
1仪器与试剂1.1仪器Waters2695型高效液相色谱仪;BP211S型电子天平(精度为十万分之一);Simplicity－185型超纯水机。
1.2试药清热解毒口服液;哈巴俄苷对照品;乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
2方法与结果2.1色谱条件AgilentZorbaxSB－C18色谱柱(150mm×4.6mm×5μm);流动相:乙腈(A)－0.1%磷酸(B)，梯度洗脱:0～10min97%～90%B，10～20min90%～67%B，20～25min67%～60%B，25～30min60%～50%B，30～35min50%～20%B，40min20%B，40～42min20%～97%B;检测波长:278nm;柱温:30℃;进样量:10μL;流速:1mL?min－1。
HPLC法测定不同产地微波真空干燥玄参中哈巴苷和哈巴俄苷的含量
HPLC法测定不同产地微波真空干燥玄参中哈巴苷和哈巴俄苷
的含量
梁晨;徐思思;聂诗明
【期刊名称】《数理医药学杂志》
【年(卷),期】2012(25)6
【摘要】目的:对4个不同产地微波真空干燥的玄参哈巴苷和哈巴俄苷进行含量测定,考察微波真空干燥工艺对有效成分的影响.方法:采用Themorn C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈和0.03%H3PO4水溶液,梯度洗脱,检测波长为210nm,276nm,柱温为30℃,流速为1.0mL/min.结果:各产地玄参微波真空干燥品哈巴苷和哈巴俄苷的总量范围为1.98%～3.78%.结论:微波真空用于玄参的干燥对于哈巴苷和哈巴俄苷的成分保留优于传统干燥工艺.
【总页数】3页(P688-690)
【作者】梁晨;徐思思;聂诗明
【作者单位】湖北中医药大学药学院,武汉,430065;湖北中医药大学药学院,武汉,430065;湖北中医药大学药学院,武汉,430065
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
1.HPLC法研究不同炮制工艺对玄参中哈巴俄苷和肉桂酸含量的影响 [J], 张发科;吕青涛;张兆旺;孙秀梅;孙永好;徐川
2.HPLC 法测定儿童回春颗粒中哈巴苷和哈巴俄苷的含量 [J], 王海丽;蒙蒙
3.HPLC双波长切换同时测定玄参药材中哈巴苷和哈巴俄苷的含量 [J], 向采芹[1];李希[1,2];冯建安[2];黄嫣[2]
4.HPLC双波长切换同时测定玄参药材中哈巴苷和哈巴俄苷的含量 [J], 向采芹;李希;冯建安;黄嫣
5.15个产地玄参中哈巴苷与哈巴俄苷含量测定 [J], 任丹;齐方圆;黄紫妍;秦路平;朱波
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高效液相色谱法测定清热解毒片中哈巴俄苷的含量
２８ ７ ｍｍ，柱 温：４ ℃ 。结果 ：哈 巴俄苷在 ０１ ．ｍｇ・ 范围 内线性 关 系良好 （ ：１ ０ ０） ０ ．～０３ ｍｌ ｒ ． ０ ；平均加样 回收率为 ０
９ ．１ ９２％。ＲＳ ０７ （ ＝ Ｄ＝ ． ％ ｎ ６ ｏ结论 ：该 方法 简便 易行 ，结果准确可靠 。可适用 于清热 解毒 片的质量控制。
ｊ １ ｎ Ｉ ｓ ｉｕ ｅ ｆ ｒ Ｆ ｏ ｎ ｒ ｇＣ ｎ ｒ ｌ Ｊ ｌｎ Ｊ ｌ ｎ １ ２ ０ ） ｉ ｉ ｎ ｔ ｔ ｔ ｏ ｏ ｄ ａ ｄ Ｄ ｕ ｏ ｔ ｏ ｉ ｉ ｉ ｉ ３ ０ １
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１２ ０ ） ３ ０ １
HPLC双波长切换同时测定玄参药材中哈巴苷和哈巴俄苷的含量
HPLC双波长切换同时测定玄参药材中哈巴苷和哈巴俄苷的含量向采芹[1];李希[1,2];冯建安[2];黄嫣[2]【期刊名称】《中药与临床》【年(卷),期】2017(000)006【摘要】目的：建立以双波长切换方式同时测定玄参药材中哈巴苷和哈巴俄苷的含量的方法。
方法：采用Shimpack VP-ODS C18柱（250 mm×4.6,5μm）色谱柱,以乙腈（A）-磷酸（0.03%）（B）为流动相进行梯度洗脱：0-10 min,3%-10%（A）;10-20 min,10%-33%（A）;20-25 min,33%-50%（A）;25-30 min,50%-80%（A）;30-35 min,80%（A）;35-37min,80%-3%（A）;检测波长：前10 min为278 nm,10-15 min为210 nm,15 min后为278 nm,柱温为30℃,进样量为10μL,流速为1 mL·min^-1。
结果：哈巴苷在0.011824-0.11824 mg·mL^-1范围内与哈巴俄苷在0.00416-0.0416 mg﹒mL^-1范围内线性关系良好。
结论：该检测方法稳定可行,可用于同时测定玄参药材中哈巴苷和哈巴俄苷的含量。
【总页数】3页(P10-12)【作者】向采芹[1];李希[1,2];冯建安[2];黄嫣[2]【作者单位】[1]成都中医药大学药学院中药材标准化教育部重点实验室四川省中药资源系统研究与开发利用重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地四川成都611137;;[1]成都中医药大学药学院中药材标准化教育部重点实验室四川省中药资源系统研究与开发利用重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地四川成都611137;[2]四川省中医药科学院中医研究所四川成都610031;;[2]四川省中医药科学院中医研究所四川成都610031;;[2]四川省中医药科学院中医研究所四川成都610031【正文语种】中文【中图分类】R282.6【相关文献】1.双波长HPLC法同时测定玄麦甘桔颗粒中哈巴苷和哈巴俄苷的含量 [J], 舒柯2.HPLC波长切换法同时测定复方青果颗粒中金丝桃苷、柚皮苷、哈巴苷、哈巴俄苷的含量 [J], 吕仁;李小玲;班小军3.HPLC法测定不同产地微波真空干燥玄参中哈巴苷和哈巴俄苷的含量 [J], 梁晨;徐思思;聂诗明4.HPLC双波长切换同时测定玄参药材中哈巴苷和哈巴俄苷的含量 [J], 向采芹;李希;冯建安;黄嫣5.双波长切换HPLC法同时测定养阴清肺膏中芍药苷、哈巴俄苷和丹皮酚的含量[J], 叶雪兰;李海鹏;彭惠炫因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
中药玄参薄层色谱鉴别法的建立
年 月购自北京市花园北路天衡大药房 经蔡
少青教授鉴定来源分别为肉苁蓉 Χιστανχηε δεσερτι2
χολα ≠ ≤ !黄精 Πολψγονατυ µ σιβιριχυ µ
!地
黄 Ρεη µ αννια γλυτινοσα
∀
112 对照品 哈巴俄苷及哈巴苷系作者从玄参 新
鲜药材切片烘干品 中提取纯制 ∀
2 方法与结果
211 方法
21111 研究方法 先用玄参采集品作为标准生药
配以对照品研究确定适当的薄层色谱系统 再用该
系统鉴定玄参商品并确证该系统的可靠性和可行
性 最后用易混淆的其它角
瓶中 加甲醇 无水硫酸钠干燥
浸泡 后
超声提取
取上清液作为供试品溶液 ∀ 取哈
巴苷与哈巴俄苷对照品适量 加甲醇制成每 含
的溶液作为对照品溶液 ∀硅胶 自制板 厚
度 ∗ Λ ∀ 供试液点样 Λ 对照液点样
Λ ∀展开剂为乙酸乙酯2乙醇 无水 2水 Β Β
展开箱用展开剂预平衡
上行展开 展
距
∀ 喷以 香草醛乙醇溶液与 高氯酸水
溶液的等量混合溶液 热风吹至斑点 红紫色
后变为暗紫色 显色清晰后置日光下检视 ∀
效 用于热病伤阴 !舌绛烦渴 !温毒发斑 !津伤便秘 !
骨蒸劳嗽 !目赤 !咽痛 !瘰疬 !白喉 !痈肿疮毒等症 ∀
5中国药典6≈ 记载玄参来源为玄参科植物浙玄参
Σχροπηυλαρια νινγ ποενσισ
的干燥根 但玄参
的理化鉴别项下仍是空白 ∀ 5中药志6虽记载了玄参
的薄层色谱鉴别法 但是该法操作复杂且无指标成
°
∏≥
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[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ×
HPLC测定脉络宁注射液及玄参药材中肉桂酸的含量
HPLC测定脉络宁注射液及玄参药材中肉桂酸的含量
李文莉
【期刊名称】《华西药学杂志》
【年(卷),期】2007(22)1
【摘要】目的测定脉络宁注射液及玄参中肉桂酸的含量。
方法以甲醇-水-冰乙酸（45：55：0．2）为流动相，采用C18化学键合硅胶为固定相，在273nm测定。
结果肉桂酸在0．027～0．163μg范围内线性关系和精密度良好，平均回收率为97．8％。
结论方法简便、可靠、准确，可用于该制剂的质量控制。
【总页数】2页(P91-92)
【关键词】HPLC;脉络宁注射液;玄参;肉桂酸;含量测定
【作者】李文莉
【作者单位】湖南省药品检验所
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
1.HPLC法同时测定玄参破壁粉粒中哈巴俄苷和肉桂酸的含量 [J], 焦豪妍;杨燕军;徐吉银;张华秀
2.红外光辅助萃取-HPLC法测定玄参中肉桂酸和哈巴俄苷的含量 [J], 黄滔敏;陈念祖;王东蕾;赖永华;闫晶超;顾纪峰
3.HPLC双波长切换同时测定玄参药材中哈巴苷和哈巴俄苷的含量 [J], 向采芹[1];
李希[1,2];冯建安[2];黄嫣[2]
4.HPLC双波长切换同时测定玄参药材中哈巴苷和哈巴俄苷的含量 [J], 向采芹;李希;冯建安;黄嫣
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双波长HPLC法同时测定玄麦甘桔颗粒中哈巴苷和哈巴俄苷的含量
双波长HPLC法同时测定玄麦甘桔颗粒中哈巴苷和哈巴俄苷的含量舒柯【摘要】目的:建立以双波长HPLC法同时测定玄麦甘桔颗粒中哈巴苷、哈巴俄苷含量的方法.方法:色谱柱Dikmaonsil C18(250mm ×4.6mm,5μm);以乙腈(A)-0.1％磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱:0～18min,5％A;18～ 25min,5％～ 29％A;25～55 min,29％A;55 ～ 56min,90％A;56～60min,5％A;检测波长为210nm(哈巴苷)和278 nm(哈巴俄苷),体积流速1ml/min;柱温:30℃.结果:哈巴苷、哈巴俄苷的进样量线性范围分别为0.03931μg～0.4914μg、0.005835μg～0.04862μg,回归方程分别为Y=20.511X+1.0747,r=0.9997、Y=122.46X +0.596,r=0.9997;二者的平均加样回收率分别为96.0％、102.2％,RSD分别为1.3％、1.2％(n=6).结论:所建立的双波长法能方便、快速地对中药中多种成分同时测定,可用于该制剂的质量控制.【期刊名称】《中国民族民间医药》【年(卷),期】2016(025)010【总页数】3页(P31-32,36)【关键词】玄麦甘桔颗粒;哈巴苷;哈巴俄苷;双波长高效液相色谱法;含量测定;质量控制【作者】舒柯【作者单位】贵州省食品药品检验所,贵州贵阳550004【正文语种】中文【中图分类】R286.0玄麦甘桔颗粒由玄参、麦冬、甘草、桔梗四味药材组成，具有清热滋阴，祛痰利咽的功效，用于阴虚火旺，虚火上浮，口鼻干燥，咽喉肿痛。
现行质量标准中除TLC鉴别外，只有甘草中甘草酸和玄参中哈巴俄苷的含量测定项目，对于中药制剂的质量控制尚不全面。
方中玄参具有清热凉血，滋阴降火，解毒散结的功效，玄参中主要的活性化学成分为环烯醚萜类和苯丙苷素类，其中哈巴苷和哈巴俄苷为主要的环烯醚萜苷类成分，且采用双波长HPLC同时测定玄麦甘桔颗中哈巴苷、哈巴俄苷的含量的方法未见报道。
HPLC法测定喉喑清胶囊中哈巴俄苷的含量
［］Ｍｅ ｔ ＳＬ Ｎ． ｎ ａ ｎ ．Ｒ ｇ ｕ ｉ Ｍｏｅ ｕａ ｔ ｇ ｔ ｉ ｅｅ ｒｌ ５ ｈａ ． Ｍａ ｓ ａ ｄ Ｒ ａ ｈ ｂｒ ｈ ｌｃ ｌ ａ ｅ ｎ ｃｒｂ ｒ ｒ ｓ ａ
ｉ ｈ ｍｉ ｆ ｒ ｅ ｅ ｐｎ ｏ ｅ ｔｅａ ｅ ｔ ｓ ］ ｒｉ ｅ ｅ ， ０ ， ４ １： ｓ ｅ ａ ｏ ｖ ｌ ｉｇ ｎ ｖ ｌ ｈ ｒｐ ｕｉ ［ ． ａ Ｒ ｓＲ ｖ ０ ７ ５ （） ｃ ｄ ｏ ｃ ＪＢ ｎ ２
３．６ ４６．
（ 收稿 日期 ：２ １．４ １ ） ０ ００ ．２
删
囊
姻
（ ３ ０ ００ １
※： 倪 艳 施 施 郝旭亮 卢方晋 山西 省 中 医药研 究 院 ：
摘要 ：目的 建 立高效 液相 色谱 法测 定喉 喑清胶 囊 中哈 巴俄苷 含量 的方 法 。方 法
色 谱柱为 Ｓｎ ｅ ｒｍ Ｏ — ｐＣ１ ４ ×２ ０ ｉ ｈｏ ｏ ＤＳＢ ８（ ． ５ ｍｍ，５“ ， ６ ｍ）
脑 血 管疾 病 的治 疗 具 有 重 要 意 义 。本 实验 显 示甘 草 总黄 酮 能 明 显 增加 缺 血半 影 区 的神 经 元 Ｈ Ｐ ０表 达 ，增 高 Ｈ Ｐ ０有 助 于 减 Ｓ７ Ｓ７ 少 细胞 凋 亡 的发 生 ，有 效 保 护缺 血 半 影 区神 经 元 ，从而 改善 缺 血 损伤 引起 的各 种 神 经 功 能缺 失 。
流 动相 以 乙腈一％醋酸溶 液 一元梯 度洗 脱 ：流速 ： １ ｍＬ ｍｉ一 １ ． ・ ｎ ：检测 波长 为 ２０ ｍ。结 果 ０ ８ｎ 重 复性好 ，可用于 新 药喉喑 清胶 囊 的质量 控制 。
关键 词 ： 巴俄 苷 ；喉喑清 胶 囊； 高效 液相色 谱法 ；含 量测 定 哈 ｄ ｉ ０３ ６ ￣ｉ ｎ１ ７ ７ ９２ １ ． ．５ ｏ ：１ ．９ ９ ． ｓ ． ２ ２ ７ ． ０１ １ ９ ｓ ６ ０ ４
HPLC法测定清热解毒口服液中哈巴俄苷的含量
第48卷第18期2020年9月广㊀州㊀化㊀工Guangzhou Chemical IndustryVol.48No.18Sep.2020HPLC 法测定清热解毒口服液中哈巴俄苷的含量∗毛群芳,钟湘云,褚思思,邱艳明,刘颖新(湖南中医药高等专科学校,湖南㊀株洲㊀412000)摘㊀要:建立高效液相色谱法测定清热解毒口服液中哈巴俄苷含量的方法㊂色谱柱为Agilent Zorbax SB -C 18柱,流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(梯度洗脱),流速为1mL㊃min -1,柱温为30ħ㊂检测波长为278nm㊂哈巴俄苷在12.24~122.4μg㊃mL -1范围内呈良好线性关系㊂平均回收率为99.52%㊂精密度㊁稳定性㊁重复性试验中RSD 均小于2.0%㊂该方法简便㊁准确㊁重现性好,可用于清热解毒口服液中哈巴俄苷的含量测定㊂关键词:高效液相色谱法;清热解毒口服液;哈巴俄苷;含量测定㊀中图分类号:R284.1㊀文献标志码:A文章编号:1001-9677(2020)18-0082-02㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀∗基金项目:湖南省中医药科研计划重点课题(No:202029);湖南省教育厅科学研究课题(15B182)㊂第一作者:毛群芳(1983-),女,主管中药师,主要从事中药检测与研究㊂Content Determination of Harpagoside in Qingrejiedu Oral Liquid by HPLC ∗MAO Qun -fang ,ZHONG Xiang -yun ,CHU Si -si ,QIU Yan -ming ,LIU Ying -xin (Hunan Traditional Chinese Medical College,Hunan Zhuzhou 412000,China)Abstract :A HPLC method for the determination of Harpagoside in Qingrejiedu oral liquid was established.The column was Agilent Zorbax SB -C 18,the mobile phase was acetonitrile -0.1%phosphoric acid solution (gradient elution),the flow rate was 1mL㊃min -1,and column temperature was 30ħ.The detection wavelength was 278nm.Harpagoside showed a good linear relationship in the range of 12.24~122.4μg ㊃mL -1.The average recovery was 99.52%.The RSD of precision,stability and repeatability was less than 2.0%.The method is simple,accurate and reproducible,and can be used for the determination of Harpagoside in Qingrejiedu oral solution.Key words :HPLC;Qingre Jiedu oral solution;Harpagoside;content determination清热解毒口服液是由石膏㊁金银花㊁玄参㊁地黄㊁连翘㊁栀子㊁黄芩等12味中药组成的复方制剂,具有清热解毒的功效㊂用于热毒壅盛所致的发热面赤㊁烦躁口渴㊁喉咙肿痛;流感㊁上呼吸道感染见上述证候者[1]㊂现行质量标准为‘中国药典“2015年版一部㊂该标准中,仅对黄芩苷进行了含量测定㊂但处方中成份较多,方中绿原酸㊁连翘苷㊁栀子苷等成份的含量测定早有文献报道[2-6]㊂而方中玄参的主成分哈巴俄苷的测定罕见报道㊂故本研究针对清热解毒口服液中哈巴俄苷的含量进行测定㊂本实验采用高效液相色谱法测定清热解毒口服液中哈巴俄苷的含量,为清热解毒口服液的质量评价提供参考依据㊂1㊀仪器与试剂1.1㊀仪㊀器LC -20A 型高效液相色谱仪(包括二元高压输液泵㊁全自动进样器㊁柱温箱㊁二极管阵列检测器),日本岛津公司;CPA225D 型电子分析天平,德国赛多利斯;KQ -100B 型超声波清洗器,昆山市超声仪器有限公司;UPK -I -10T 型超纯水机,成都优越科技有限公司㊂1.2㊀试㊀药㊀㊀清热解毒口服液(批号1902014㊁1902015㊁1902016),辅仁药业集团有限公司;哈巴俄苷对照品(批号:C100560),贵州迪大科技有限公司;乙腈为色谱纯,水为超纯水,其他试剂均为分析纯㊂2㊀方法与结果2.1㊀色谱条件Agilent Zorbax SB -C 18色谱柱(150mm ˑ4.6mm ˑ5μm);流动相:乙腈(A)-0.1%磷酸(B),梯度洗脱:0~10min 97%~90%B,10~20min 90%~67%B,20~25min 67%~60%B,25~30min 60%~50%B,30~35min 50%~20%B,40min 20%B,40~42min 20%~97%B;检测波长:278nm;柱温:30ħ;进样量:10μL;流速:1mL㊃min -1㊂2.2㊀溶液的制备(1)对照品溶液的制备:精密称取哈巴俄苷对照品适量,加30%甲醇溶解并定容至刻度,制成后每mL 含哈巴俄苷61.2μg㊂(2)供试品溶液的制备:精密量取清热解毒口服液5mL,至25mL 容量瓶中,加50%甲醇溶解并定容至刻度㊂2.3㊀阴性对照试验按照‘中国药典“2015年版一部中该药的处方比例和制备第48卷第18期毛群芳,等:HPLC 法测定清热解毒口服液中哈巴俄苷的含量83㊀方法,制成不含玄参的样品溶液,按 2.2.2 项下的方法制成阴性对照溶液㊂按照 2.1 项下的色谱条件,注入高效液相色谱仪㊂阴性对照溶液的色谱图中,在与哈巴俄苷色谱峰对应的位置上,无干扰峰出现㊂见图1㊂图1㊀高效液相色谱图Fig.1㊀HPLC chromatograms2.4㊀系统适应性试验在 2.1 项中的色谱条件下,分别测定哈巴俄苷对照品溶液和供试品溶液,记录色谱图㊂哈巴俄苷色谱峰的理论板数不低于5000,分离度大于1.5㊂2.5㊀线性关系考察分别精密量取 2.2.1 项下的对照品溶液2μL㊁4μL㊁6μL㊁8μL㊁10μL㊁20μL,依次注入液相色谱仪,按 2.1 项下的色谱条件进行测定,分别记录哈巴俄苷色谱峰的峰面积,并计算其含量㊂以哈巴俄苷含量(X,μg㊃mL -1)为横坐标,相应的峰面积(Y)为纵坐标,得出回归方程:Y =15508X +29816,相关系数R 2=0.9999,表明哈巴俄苷在12.24~122.4μg㊃mL -1范围内线性关系良好㊂2.6㊀精密度试验精密吸取 2.2.1 项下对照品溶液10μL,按 2.1 项下色谱条件连续进样6次,测定㊂结果其峰面积RSD 为0.72%,表明此方法下,仪器精密度良好㊂2.7㊀稳定性试验精密量取清热解毒口服液(批号:1902014)适量,按照 2.2.2 项下方法制得供试品溶液,室温放置,分别于0㊁2㊁4㊁6㊁8㊁12㊁24h 按 2.1 项下色谱条件测定,结果其峰面积RSD 为1.14%,表明供试品溶液24h 内在室温下稳定㊂2.8㊀重复性试验分别精密量取同一批号清热解毒口服液(批号:1902014)适量,按照 2.2.2 项下方法制得6份供试品溶液,按 2.1 项下色谱条件测定,结果其峰面积RSD 为1.36%,表明此方法重复性良好㊂2.9㊀加样回收试验精密量取清热解毒口服液(批号:1902014)5mL,共6份,至25mL 容量瓶中,分别精密加入一定量的对照品溶液,按 2.2.2 项下方法制得供试品溶液,测定峰面积,计算回收率㊂平均回收率为99.52%,RSD 为1.10%㊂2.10㊀样品测定表1㊀清热解毒口服液中哈巴俄苷的含量测定结果表Table 1㊀Determination of Harpagoside in Qingrejiedu oral liquid批号含量/(mg /mL)19020140.21719020150.18719020160.233取3批样品,依法制得供试品溶液,按 2.1 项下色谱条件测定并计算哈巴俄苷的含量,结果见表1㊂3㊀结㊀论通过DAD 扫描得出哈巴俄苷的最大吸收波长为278nm,故将此波长设定为测定波长㊂哈巴俄苷在结构上属于环烯醚萜苷类化合物,易溶于甲醇㊂查阅‘中国药典“及相关文献,哈巴俄苷通常使用甲醇进行提取[7-8]㊂故本实验采用甲醇溶液提取制备供试品溶液㊂对提取溶剂的浓度进行选择时发现,用50%甲醇溶液提取样品,杂质干扰较小,哈巴俄苷含量较高㊂因此选用50%甲醇溶液作为样品的提取溶剂㊂哈巴俄苷具有一定的酸性,流动相中加入适当比例的酸,能改变峰形,有助于哈巴俄苷与干扰峰的分离㊂而实验中发现,甲醇-磷酸水系统的洗脱能力相对较弱,待测峰不能获得很好的分离㊂故采用乙腈-磷酸水梯度洗脱系统㊂本实验所建立的高效液相色谱法,操作简单,结果准确㊁重现性较好,可用于清热解毒口服液中哈巴俄苷的含量测定,为清热解毒口服液的质量评价提供参考依据㊂参考文献[1]㊀国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[S].2010年版.北京:中国医药科技出版社,2015:1552-1553.[2]㊀张振巍,张娜娜,白丹丹,等.一测多评法测定清热解毒口服液中4种成分的含量[J].中国药房,2013,24(28):2676-2678.[3]㊀吕萍,张娜娜,张振巍,等.清热解毒口服液HPLC 指纹图谱及4种主要成分的含量分析[J].中国实验方剂学杂志,2013,19(2):98-101.[4]㊀尤立华,杨秉呼,叶萌,等.清热解毒口服液HPLC 指纹图谱[J].中国实验方剂学杂志,2014,20(14):84-87.[5]㊀陈叶青,蒋丽萍,朱山寅,等.HPLC 测定清热解毒口服液中4个成分的含量[J].华西药学杂志,2016,31(16):644-646.[6]㊀周兰,罗曼,熊慧林.HPLC 法测定清热解毒口服液中栀子苷的含量[J].药物分析杂志,2011,31(11):2168-2170.[7]㊀向采芹,李希,冯建安,等.HPLC 双波长切换同时测定玄参药材中哈巴苷和哈巴俄苷的含量[J].中药与临床,2017,8(6):10-12.[8]㊀梁少雄,孙秋秀.HPLC 同时测定玄参中5种成分的含量[J].临床合理用药杂志,2018,11(7):101-102.。