补肾活血化瘀方上调雄激素致不孕大鼠脂肪组织中胰岛素受体底物1及其酪氨酸磷酰化
补肾化痰方对多囊卵巢综合征模型大鼠FSHLH及T的影响_姜晓琳
199多囊卵巢综合征(Polycystic Ovary Syndrome,PCOS)是妇产科内分泌最常见的疾病，因涉及下丘脑、垂体、卵巢、肾上腺、胰腺以及遗传等诸多因素，生化改变，发病机制及临床表现有高度特异性，日益成为妇产科内分泌研究热点之一。
本实验研究采用孕激素和HCG 联合造模法制备多囊卵巢综合征大鼠模型，比较用药前后血清激素水平变化，以期为中西医结合治疗PCOS 提供实验数据及效验方药。
现报道如下。
1 实验材料1.1 实验动物 24日龄未成年SD 雌性大鼠，体重30~40g，由中国医科大学动物实验室提供。
1.2 药品与试剂 补肾化痰方：由辽宁中医药大学附属医院制剂室协助制备，按比例称取优质中药材，配成高、低两种剂量，按人鼠体重比换算后给药。
二甲双胍：用蒸馏水溶解，按人鼠体重比换算后，以0.018g/d 剂量给药。
试剂盒：生产厂家：北京北方伟业发展有限公司·上海办事处，生产批号：Lot#RT110371。
2 实验方法2.1 实验分组 将60只大鼠随机分为补肾化痰方治疗(简称治疗组)高、低剂量组，二甲双胍对照组，二甲双瓜加中药组，模型对照组(简称模型组)和阴性对照组，共6组，每组10只大鼠。
2.2 实验方法 0.5mg18-甲基炔诺酮日一次皮下注射，在27日龄时，加用HCG1.5IU 日两次皮下注射，共注射21天。
造模成功后，补肾化痰方高剂量组：补肾化痰方1.8g/d；补肾化痰方低剂量组：1.2g/d；二甲双胍组：0.018g/d。
每日1次灌胃，连续给药15天。
3 实验结果各组动物血清中FSH,LH,T 浓度检测结果见表1。
从结果可以看出，阴性对照组与模型对照组的血清FSH，LH 和T 的含量均有显著差异（P <0.05）,提示造模成功。
治疗后，二甲双胍加中药组和阴性对照组中血清FSH、LH 及T 的含量无显著性差异（P >0.05）,提示二甲双胍加中药治疗可以影响PCOS 患者的FSH、LH 及T 的水平，使其接近正常，而单独用中药或是二甲双胍的效果则不佳。
中药补肾调冲方对卵巢早衰大鼠性激素水平及SCF、Cx-37蛋白表达的影响
中药补肾调冲方对卵巢早衰大鼠性激素水平及SCF、Cx-37蛋白表达的影响发表时间：2018-03-14T16:18:29.013Z 来源：《心理医生》2018年4期作者：李欣捧1 高慧2(通讯作者) 徐文君1 崔亚萌1 张[导读] 卵巢早衰指40岁以下的女性持续闭经且性器官出现萎缩，LH、FSH升高，E2降低的综合征。
(1华北理工大学河北唐山 063000)(2承德医学院附属医院中医科河北承德 067000)(3河北省中西医结合肝肾病证重点实验室河北石家庄 050091）【摘要】目的：观察补肾调冲方对大鼠卵巢早衰模型LH、FSH、E2、AMH水平及Cx-37、SCF蛋白表达的影响。
方法：70只SD 雌性大鼠随机分为：对照组,模型组,补肾调冲方低、中、高剂量（以生药计24、12、6g/kg）组,坤泰胶囊组（6g/kg）,结合雌激素片（阳性药）组。
除对照组以外,其他各组均连续应用ig雷公藤多苷片造模14d,在造模结束24h后,分别给予各组相应药物36d。
给药后,应用Elisa法检测血清FSH、LH、E2、AMH水平,免疫组化法检测Cx-37、SCF蛋白的表达。
结果：与对照组比较,模型组FSH、LH水平、SCF蛋白的表达均显著升高,E2、AMH水平、Cx-37蛋白的表达显著降低（P＜0.05）;与模型组比较,各给药组 FSH、LH水平、SCF蛋白表达均显著降低,E2、AMH水平、Cx-37蛋白表达显著升高（P＜0.01）。
结论：补肾调冲方可增强卵巢早衰大鼠的卵巢储备能力,促进卵泡发育,对卵巢早衰可能有治疗作用。
【关键词】中药补肾调冲方;卵巢早衰;卵泡刺激素、促黄体生成素、雌激素、抗缪勒管激素、卵巢干细胞因子SCF、缝隙连接蛋白Cx-37【中图分类号】R28 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2018）04-0036-03 【Abstract】 Objective To observe Bushen Tiaochong Decoction on premature ovarian failure model rats serum FSH and LH, E2, AMH levels and SCF, Cx-37 protein expression influence.Methods 70 female SD rats were divided into 7 groups. Excpt the control group, the other groups were ig tripterygium glycosides tablets 14 d, the mold finished 24h, given the corresponding drug treatment 36d. After administration, Elisa was used to detect FSH, LH, E2 and AMH levels in rats, the expression of SCF and Cx-37 protein was detected by immunohistochemistry.Results Compared with the control group, the expression levels of FSH, LH and SCF protein levels were increased, the expression of E2, AMH, Cx-37 protein level was lower (P < 0.05); compared with the model group, the expression of each group FSH, LH and SCF protein levels were decreased, the expression of E2 and AMH and Cx-37 protein increased(P < 0.01).Conclusion The recipe of Bushen and punching can improve the ovarian reserve capacity, promote development of follicle, and may have therapeutic effect on premature ovarian failure.【Key words】Traditional Chinese medicine Bushen recipe; Premature ovarian failure; follicle stimulating hormone, luteinizing hormone, estrogen, anti Mueller hormone, ovarian stem cell factor SCF, gap junction protein Cx-37 卵巢早衰指40岁以下的女性持续闭经且性器官出现萎缩，LH、FSH升高，E2降低的综合征。
心脑肾轴理论补肾活血方对慢性心衰大鼠心肌线粒体能量代谢PGC-1α、NRF-1、mtTFA mRNA
第23卷 第5期 2021 年 5 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 23No. 5May，2021基于“心脑肾轴”理论探究补肾活血方对慢性心衰大鼠心肌线粒体能量代谢及PGC-1α、NRF-1、mtTFA mRNA表达影响刘诗瑶1，张艳2，孔繁达1（1.辽宁中医药大学，辽宁 沈阳 110847；2.辽宁中医药大学附属医院，辽宁 沈阳 110032）摘要：目的 旨在基于“心脑肾轴”理论通过该实验探讨补肾活血方对心肌梗死后慢性心衰（chronic heart failure，CHF）大鼠心肌线粒体能量代谢及PGC-1α、NRF-1、mtTFA mRNA和蛋白表达的影响。
方法 从80只健康雄性大鼠中，随机选取20只大鼠，作为空白对照组，其余大鼠经结扎法配以节食、力竭式游泳以建立慢性心衰大鼠模型，将造模成功的60只大鼠随机分为中药组、西药组以及模型对照组。
中药组（9.2 g·kg-1·d-1）、西药组（1.5 mg·kg-1·d-1），灌胃予以相应药物，空白对照组、模型对照组予以等量的去离子水，对每组大鼠行灌胃处理，每日1次。
予以灌胃处理28 d后，通过酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠外周血中ATP、ADP、NT-proBNP浓度；采用实时荧光定量PCR和免疫蛋白印迹法（Western blot）检测大鼠心肌组织中PGC-1α、NRF-1、mtTFA mRNA 和蛋白表达量。
结果 与空白对照组比较，心衰模型对照组、中药组、西药组大鼠的ATP浓度明显下降，ADP、NT-proBNP浓度显著升高（P<0.01）；与模型对照组比较，中药组和西药组大鼠ATP表达升高，ADP、NT-proBNP表达下降（P<0.05）。
与空白对照组比较，心衰模型对照组、中药组、西药组大鼠的PGC-1α、NRF-1、mtTFA mRNA 和蛋白表达水平降低，组内之间的差异均有统计学意义（P<0.05）；与模型对照组比较，中药组和西药组大鼠PGC-1α、NRF-1、mtTFA mRNA和蛋白表达水平升高，组内之间的差异均有统计学意义（P<0.05）。
【国家自然科学基金】_胰岛素受体底物1_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140730
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rna干扰 pparγ ph结构域相互作用蛋白 ph结构域 irs2 bax app5肽类似物p165 3t3-l1脂肪细胞 2型糖尿病 2,4二硝基酚
推荐指数 6 3 2 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2008年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38
科研热词 推荐指数 胰岛素抵抗 6 酪氨酸 2 黑米 1 高雄激素血症和胰岛素抵抗大鼠模型 1 高血糖症 1 针刺 1 酪氨酸磷酸化 1 酪氨酸磷酰化 1 解偶联蛋白2 1 血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1 1 花色苷 1 胰岛素受体底物1 1 胰岛素受体底物 1 胰岛素 1 胰岛β 细胞 1 胰岛α 细胞 1 罗格列酮 1 系膜细胞 1 糖尿病,妊娠 1 糖尿病 1 粒层细胞 1 磷酰化 1 磷蛋白类 1 游离脂肪酸 1 氧化应激 1 果糖 1 恶性转化 1 实时荧光定量pcr 1 子宫内膜肿瘤 1 多囊卵巢综合症 1 吡格列酮 1 免疫印迹法 1 乳腺癌 1 乳腺发育 1 n-乙酰半胱氨酸 1 cyp17 1 c-jun氨基端激酶 1 31p nmr 1
2010年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52
补肾活血化痰汤对多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢血供及形态的影响
补肾活血化痰汤对多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢血供及形态的影响王瑞杰;李晖;邱方;王自闯【期刊名称】《中国药房》【年(卷),期】2017(028)004【摘要】目的：探讨补肾活血化痰汤对多囊卵巢综合征（PCOS）模型大鼠卵巢血供及形态的影响。
方法：取SD大鼠（♀）50只随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组[罗格列酮，3 mg/（kg·d）]和补肾活血化痰汤低、高剂量组[5.0、7.5 g/（kg·d）]，每组10只。
除正常对照组外，其余各组大鼠均采用Poresky法复制PCOS模型。
成模后，各给药组大鼠ig相应药物，正常对照组和模型组大鼠ig 生理盐水[10 mL/（kg·d）]，每天1次，连续22 d。
给药结束后处死大鼠，记录微血管密度（MVD），检测大鼠卵巢组织血管内皮生长因子（VEGF）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）1型受体（AT1）和2型受体（AT2）以及G蛋白偶联受体MAS mRNA的表达，并观察卵巢形态变化。
结果：与正常对照组比较，模型组和各给药组大鼠MVD均升高，AT1、AT2、MAS mRNA表达均下调（P＜0.05）；模型组大鼠卵巢组织可见囊性窦卵泡、颗粒细胞层减少，卵母细胞消失，黄体组织数量减少等明显病理变化。
与模型组比较，各给药组上述指标均得到显著改善，且补肾活血化痰汤低、高剂量组作用均强于阳性对照组（P＜0.05）；各给药组大鼠的卵巢组织病理变化均得到一定改善。
结论：补肾活血化痰汤可增加PCOS模型大鼠卵巢组织血供，促进血管生成，促排卵，有助于改善卵巢形态。
%OBJECTIVE:To explore the effects of Bushen huoxue huatan decoction on ovarian blood supply and form in model rats with polycysticovarian syndrome(PCOS). METHODS:50 SD female rats were randomized into normal control group,model group,positive control group [rosiglitazone,3 mg/(kg·d)],Bushen huoxue huatan decocti on low-dose and high-dose groups [5.0, 7.5 g/(kg·d)],with 10 rats in each group. Except for normal control group,PCOS model was induced in the other groups by Poresky method. After modeling,treatment groups were given relevant medicine intragastrically. The normal control group and mod-el group were given normal saline [10 mL/(kg·d)] intragastrically,once a day,for 22 days. After the end of administration,the rats were sacrificed. The microvessel density (MVD) was recorded. mRNA expression of vascular endot helial growth factor (VEGF), ovarian angiotensin Ⅱ receptor(Ang Ⅱ)type 1(AT1)and type 2(AT2),G-protein coupled receptor MAS were all detected in ovarian tissue of rats. The ovarian form was observed. RESULTS:Compared with normal control group,MVD of mod-el group and treatment groups were all increased,while mRNA expression of AT1,AT2 and MAS were down-regulated (P<0.05);cystic sinus sollicle,the decrease of granular cell layer,egg mother cells disappearance,the decrease of luteal tissue and other obvious pathological changes could be found in ovarian tissue of rats in model group. Compared with model group,above in-dexes of treatment groups were improved significantly,and the effects of Bushen huoxue huatan decoction low-dose and high-dose groups were better than that of positive control group (P<0.05). The pathological changes of ovarian tissue in treatment groups were all improved to certain extent. CONCLUSIONS:Bushen huoxue huatan decoction can improve ovarianblood supply,angio-genesis and ovulation in PCOS rats. It is beneficial to improve ovarian form.【总页数】4页(P479-482)【作者】王瑞杰;李晖;邱方;王自闯【作者单位】河南中医药大学第二临床医学院，郑州 450002;河南中医药大学第二附属医院生殖医学科，郑州450002;河南中医药大学第二附属医院生殖医学科，郑州 450002;河南中医药大学第二临床医学院，郑州 450002【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.补肾调经汤对多囊卵巢综合征模型大鼠胰岛素及脂联素的影响 [J], 赵莉娜;韩亮;胡晓华2.补肾调经汤联合二甲双胍对多囊卵巢综合征模型大鼠的影响 [J], 赵莉娜;胡晓华3.补肾活血化痰方对多囊卵巢综合征模型大鼠的治疗作用机制研究 [J], 王瑞杰;李晖;王自闯4.补肾促排卵汤对多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢形态及性激素的影响 [J], 郭银华;谈勇;邹奕洁5.补肾活血化痰汤对多囊卵巢综合征患者不孕疗效和内分泌代谢的影响 [J], 孙莺;沈维增;陈云霞;陈兆鑫;张海艇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
补肾活血方对去卵巢胶原诱导性关节炎大鼠垂体雌激素受体αmRNA表达的影响
补肾活血方对去卵巢胶原诱导性关节炎大鼠垂体雌激素受体αmRNA表达的影响耿丽芬;刘坤申;马华;焦保权;李振彬【期刊名称】《中国组织工程研究与临床康复》【年(卷),期】2009(13)28【摘要】背景:药理学研究显示,补肾活血方中的补肾中药如熟地、葛根等含有黄酮类物质,具有植物雌激素的作用特点,其中异黄酮具有雌激素受体调控剂的作用。
目的:观察自拟补肾活血方对胶原诱导性关节炎大鼠血清雌二醇水平及垂体雌激素受体αmRNA表达的影响。
设计、时间及地点:随机分组设计、对照动物实验,于2006-05/2008-05在白求恩国际和平医院中心实验室完成。
材料:健康Wistar雌性大鼠60只,随机分为2组:假手术组(n=10)和手术组(n=50)。
手术组在卵巢切除术后2周复制胶原诱导性关节炎模型,选取关节炎指数≥5的大鼠再随机分为4组,每组10只:模型组、补肾活血方、甲氨蝶呤组和补肾活血方+甲氨蝶呤组。
补肾活血方所用中药骨碎补、红花、熟地、仙灵脾、丹参、葛根等购自石家庄乐仁堂药店。
常规煎煮,离心去杂,浓缩为1.3kg/L的水煎液,密封分装,4℃冷藏备用。
方法:假手术组和模型组灌胃给予生理盐水,2mL/d;补肾活血组:补肾活血方煎液2mL/d灌胃;甲氨蝶呤组按2.6mg/kg剂量灌胃1次/周,体积为2mL,其余时间生理盐水灌胃2mL/d;补肾活血方+甲氨蝶呤组按甲氨蝶呤2.6mg/kg剂量灌胃1次/周,体积为2mL,另外补肾活血方煎液2mL/d;各组均持续6周。
主要观察指标:腹主动脉采血用磁分离酶联免疫法检测血清雌二醇水平,同时取大鼠垂体采用反转录-聚合酶链反应检测大鼠垂体雌激素受体αmRNA的表达。
结果:与模型组比较,甲氨蝶呤组雌激素受体αmRNA表达增加,但差异无显著性意义;补肾活血方+甲氨蝶呤组表达明显增加(P<0.01);补肾活血方表达量高于甲氨蝶呤组,低于补肾活血方+甲氨蝶呤组(P<0.05);补肾活血方、补肾活血方+甲氨蝶呤组与假手术组差异无显著性意义。
补肾益冲方对卵巢储备功能减退大鼠卵巢组织形态及性激素的影响
补肾益冲方对卵巢储备功能减退大鼠卵巢组织形态及性激素的影响简晓莉;刘志承;徐汉明;常瑞萍【期刊名称】《天津药学》【年(卷),期】2024(36)1【摘要】目的:研究补肾益冲方对卵巢储备功能减退(DOR)模型大鼠卵巢功能的影响。
方法:选取雌性未孕SD大鼠40只,随机分为空白组、模型组、补肾益冲方组、补佳乐组。
除空白组外,其余大鼠采用雷公藤多苷片混悬液灌胃制备DOR大鼠模型,造模成功后分别给予补肾益冲方及补佳乐进行相应的治疗干预。
药物干预结束后,采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测大鼠血清中抗苗勒管激素(AMH)、促卵泡生成素(FSH)、雌二醇(E_(2))、促黄体生成素(LH)的水平;HE染色观察大鼠卵巢组织的病理学形态变化。
结果:与空白组比较,模型组大鼠血清FSH和LH水平升高(P<0.05),AMH和E_(2)水平降低(P<0.05);卵巢中原始卵泡和生长卵泡的数量减少,闭锁卵泡增加;卵巢间质增生并纤维化。
补肾益冲方干预后,DOR大鼠血清中FSH 和LH激素水平降低(P<0.05),AMH和E_(2)激素水平升高(P<0.05);卵巢组织形态得到改善,原始卵泡和生长卵泡增多,闭锁卵泡减少。
结论:补肾益冲方对DOR大鼠卵巢组织形态、卵母细胞的数量和质量具有改善作用,能调节AMH、FSH、E_(2)和LH从而提高DOR大鼠的卵巢储备功能。
【总页数】4页(P1-4)【作者】简晓莉;刘志承;徐汉明;常瑞萍【作者单位】广州中医药大学第四临床医学院深圳市中医院;深圳市医院中药制剂研究重点实验室;北京大学深圳医院【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.补肾调冲方对半乳糖致卵巢早衰大鼠性激素水平和卵巢组织形态学的影响2.补肾益气和血方对卵巢储备功能下降大鼠血清性激素和卵巢组织VEGF及其受体蛋白表达的影响3.补肾调冲方对卵巢早衰大鼠性激素水平和卵巢组织形态学的影响4.加减益经汤对卵巢功能减退大鼠性激素与卵巢组织形态学的影响5.基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨益肾疏肝汤对卵巢储备功能减退大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴及卵巢颗粒细胞凋亡的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
电针联合补肾活血方对PCOS大鼠促排卵后子宫内膜容受性的影响及机制研究
电针联合补肾活血方对PCOS大鼠促排卵后子宫内膜容受性的影响及机制研究电针联合补肾活血方对PCOS大鼠促排卵后子宫内膜容受性的影响及机制研究引言多囊卵巢综合症（PCOS）是一种常见的妇科内分泌疾病，其主要特征为多囊卵巢、月经紊乱和高雄激素水平。
PCOS患者常伴有卵巢功能障碍、不孕和容受性下降等问题，给患者的生活和生育带来了巨大的困扰。
研究目的本研究旨在探讨电针联合补肾活血方对PCOS大鼠促排卵后子宫内膜的容受性的影响及其机制，为改善PCOS患者的子宫内膜容受性提供科学依据。
材料与方法1. 实验动物：选取健康雌性Sprague-Dawley（SD）大鼠，共60只，体重180-200g。
2. 建立PCOS模型：采用高脂饮食联合注射大鼠黄体生成素（PMSG）和人绒毛膜促性腺激素（hCG）建立PCOS大鼠模型。
3. 分组与处理：将被成功建立PCOS模型的大鼠随机分为3组（每组20只）：模型组、电针组和电针联合补肾活血方组。
电针组和电针联合补肾活血方组分别进行电针和电针联合药物治疗。
4. 观察指标：采用免疫组化、组织病理学方法观察大鼠子宫内膜容受性，并检测相关生化指标。
结果1. 子宫内膜厚度：与模型组相比，电针联合补肾活血方组子宫内膜厚度明显增加（P<0.05）。
2. 子宫内膜腺体数量：电针联合补肾活血方组子宫内膜腺体数量显著增加（P<0.05）。
3. 血清雌二醇水平：与模型组相比，电针联合补肾活血方组血清雌二醇水平明显下降（P<0.05）。
4. 血清黄体生化指标：电针联合补肾活血方组血清黄体生成素、黄体生成素酶水平显著上升（P<0.05）。
讨论本研究结果表明，电针联合补肾活血方可以提高PCOS大鼠促排卵后子宫内膜的容受性。
可能的机制是通过增加子宫内膜厚度和腺体数量，调节雌激素水平和黄体生成素酶活性等方式实现。
结论电针联合补肾活血方可以改善PCOS大鼠促排卵后子宫内膜容受性，可能通过调节子宫内膜厚度、腺体数量、雌激素水平和黄体生成素酶活性等机制。
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补肾活血化瘀方上调雄激素致不孕大鼠脂肪组织中胰岛素受体底物1及其酪氨酸磷酰化（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）作者：李喜莲, 王针织, 俞超芹【摘要】研究雄激素致不孕大鼠（androgen sterilized rat, ASR）胰岛素受体底物1的表达及其酪氨酸磷酸化程度，探讨胰岛素抵抗（insulin resistance, IR）的分子机制和补肾活血化瘀方的作用机制。
方法：ASR大鼠随机分为模型组、溶媒组（注射中性茶油）和补肾活血化瘀方组，各组均为15只大鼠。
观察大鼠体质量和胰岛素曲线下面积，并检测大鼠脂肪组织中胰岛素受体底物1（insulin receptor substrate1，IRS1）的表达及其酪氨酸磷酸化程度。
结果：模型组大鼠体质量和胰岛素曲线下面积高于溶媒组和补肾活血化瘀方组（P0.05）。
模型组脂肪组织中IRS1及其酪氨酸磷酸化程度低于溶媒组（P0.05），补肾活血化瘀方组IRS1的表达及其酪氨酸磷酸化程度上升，与模型组比较有统计学差异（P0.05）。
结论：补肾活血化瘀方能促进IR大鼠脂肪组织IRS1蛋白的表达及其酪氨酸磷酸化水平，这可能是其提高组织对胰岛素敏感性从而改善IR的机制之一。
【关键词】多囊卵巢综合征; 胰岛素抵抗; 胰岛素受体底物1; 酪氨酸; 磷酰化; 大鼠Objective: To investigate the expression of insulin receptor substrate1 (IRS1) and phosphorylation of tyrosine in androgen sterilized rats (ASRs) and the effects of Bushen Huoxue Huayu Recipe (BHHR), a compound Chinese herbal medicine for tonifying kidney and activating blood, on the ASRs, and to analyze the possible mechanism.Methods: ASR models were established by means of testosterone injected subcutaneously at the age of 9 days. The model rats were randomly divided into BHHR group (n=15) and untreated group (n=15); the rats in normal group (n=15) were injected with oil. The rats in the BHHR group were treated with BHHR for 30 days, and the rats in model group and normal group were treated with distilled water for 30 days.Body weight and area under the curve (AUC) of insulin were measured after treatment. Expression of IRS1 and phosphorylation of tyrosine in adipose tissue in ASRs were analysed by immunohistochemical method.Results: The body weight and insulin AUC in the untreated group were increased and more than those in the BHHR group and the normal control group (P0.05). Expression of IRS1 andphosphorylation of tyrosine in normal group were significantly higher than those in the untreated group (P0.05), and those in BHHR group were improved and significantly different from those in the untreated group (P0.05).Conclusion: BHHR can increase the expression of IRS1 and phosphorylation of tyrosine in adipose tissue in IR rats, which may be one of its mechanisms in improving insulin sensitivity of the target tissues.Keywords: polycystic ovary syndrome; insulin resistance; insulin receptor substrate1; tyrosine; phosphorylation; rats 多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome, PCOS）是生育年龄妇女常见的内分泌疾病之一，临床上主要表现为闭经、月经稀发、不孕、多囊卵巢、高雄激素血症和持续不排卵，其发病机制不明。
近来研究发现，胰岛素抵抗（insulin resistance, IR）在PCOS的发病中起重要作用［1］。
胰岛素受体底物1（insulin receptor substrate1, IRS1）作为胰岛素受体后信号重要转导分子之一，在PCOS合并IR 患者发病中起关键作用。
因PCOS发病原因复杂，临床表现多样化，目前尚无治疗该综合征的特效药。
中药补肾活血化瘀方（Bushen Huoxue Huayu Recipe, BHHR）为临床经验方，对PCOS有良好的疗效［2］。
王莉等［3］观察到雄激素致不孕大鼠（androgen sterilized rat，ASR）成年后具有高雄激素、高胰岛素、低促性腺激素、无排卵和多囊卵巢等表现，与PCOS有许多共同点。
本实验通过建立ASR 大鼠模型，检测大鼠脂肪组织中IRS1的表达及其酪氨酸磷酸化的程度，分析BHHR对ASR大鼠IRS1蛋白表达及其酪氨酸磷酸化程度的影响，以期阐明其治疗PCOS的可能分子生物学作用机制。
1 材料与方法1.1 实验动物32只3月龄雌性成年SD大鼠和8只3月龄雄性成年SD大鼠由上海斯莱克实验动物有限公司提供，许可证号为SCXK（沪）20030003，由第二军医大学长海医院动物中心饲养。
合笼饲养［4］分娩8 d后选出雌性幼鼠105只用于实验。
1.2 药品和试剂丙酸睾酮注射液、中性茶油（上海通用药业股份有限公司，批号050503）；BHHR（当归15 g、赤芍10 g、白芍10 g、桑椹20 g、枸杞子20 g、瓦楞子15 g、制首乌18 g、麦冬12 g等）由第二军医大学长海医院中药房提供，自制成浓度相当于含生药2.56 g/ml的水溶液，制备方法见前期报道［4］；大鼠胰岛素试剂盒（美国LINCO Research）；兔抗鼠IRS1单克隆抗体（美国Santa Cruz公司）；兔抗鼠磷酸酪氨酸多克隆抗体（美国Thermo公司）；EnVision试剂盒（美国DaKo公司）；显色剂二氨基联苯胺（北京中山生物技术公司）。
1.3 ASR动物模型制备及分组模型建立方法同前期报道［4］，并予中性茶油注射作为溶媒对照组。
模型组中制模成功的30只大鼠进入后续实验，剔除60只仍有性周期的大鼠。
将成模的30只ASR随机分为BHHR组和模型组，每组15只。
溶媒对照组大鼠15只，70日龄后连续阴道脱落细胞涂片呈现动情周期。
各组大鼠在接受处理前体质量差异无统计学意义。
1.4 给药方式及剂量各组大鼠断奶后均喂以颗粒饲料，80日龄起，按动物与人体表比换算法换算相应剂量，BHHR组灌服BHHR 10 ml/(kg·d)；模型组及溶媒对照组每天灌服同容积蒸馏水。
每天早、晚各1次，连续30 d。
1.5 ASR大鼠胰岛素曲线下面积测定用药结束后参考大鼠性周期取材：有规律性周期的大鼠于110日龄后第一个动情前期取材；无规律性周期的大鼠于113日龄取材。
将大鼠称取体质量，当晚8点禁食，次日上午8点予50%葡萄糖溶液3 g/kg灌胃，在灌胃后0、0.5、1和2 h分别取眶静脉血，利用放射免疫法测定各时间点胰岛素水平。
药盒质量控制指标均符合要求，灵敏度0.1 ng/ml，批内和批间变异系数5.5％。
测定步骤严格按照说明书操作，计算大鼠血胰岛素曲线下面积（area under the curve, AUC）。
大鼠血胰岛素AUC＝1/4×空腹值＋3/4×60 min值＋1/2×120 min值。
1.6 各组大鼠IRS1及其酪氨酸磷酸化程度测定处死各组大鼠后，取腹膜下脂肪组织，4%多聚甲醛固定，制成石蜡切片，将标本置于58 ℃恒温干燥箱中烘烤24 h后，分别用兔抗鼠IRS1单克隆抗体、兔抗鼠磷酸酪氨酸多克隆抗体按EnVision 法进行免疫组化染色。
用PBS代替一抗作为阴性对照组，细胞质或（和）细胞膜呈现棕黄色颗粒反应者为阳性，无棕黄色颗粒反应者为阴性。
采用上海求为生物科技有限公司MIQAS医学图像定量分析系统、医学图像定量分析软件进行免疫组化染色结果分析，计算阳性区域面积、阳性比率和光密度值。
IRS1表达及其酪氨酸磷酸化均以免疫组化阳性指数表示。
免疫组化阳性指数＝阳性面积×光密度值/总面积。
每张切片分析3个视野，每组数据至少18个。
1.7 统计学方法采用SPSS 11.0软件进行统计分析。
计量资料数据用x±s表示，采用单因素方差分析（q检验），各组之间方差齐者用最小显著差异t 检验。
相关数据分别采用非参数符号等级检验（Wilcoxon检验）及非参数两样本等级秩和检验。
计数资料进行χ2检验。
2 结果2.1 各组大鼠体质量情况模型组大鼠体质量高于溶媒对照组（P0.05）；BHHR组大鼠体质量与模型组比较，差异有统计学意义（P0.05）。
见表1。
表1 3组大鼠体质量和血胰岛素曲线下面积（略）2.2 各组大鼠胰岛素曲线下面积模型组大鼠血胰岛素曲线下面积大于溶媒对照组（P0.05）；BHHR组血胰岛素曲线下面积与模型组比较，差异有统计学意义（P0.05）。