人脐静脉血管内皮细胞体外培养的方研究

中国修复重建外科杂志2011年2月第25卷第2期·139·

人脐静脉血管内皮细胞体外培养的方法研究

蔡维霞1Δ 梁亮2Δ 计鹏1 张万福1 张战凤1 张彦刚1

肖西峰3 白晓智1 朱华宇1 胡大海1 韩骅2

【摘要】目的建立人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）体外高效稳定培养的方法，为组织工程及相关医学基础研究提供稳定的细胞来源。方法取自愿捐赠足月妊娠分娩的新生儿脐带，用自制空针软管静脉注入0.1%Ⅱ型胶原酶，置于37℃培养箱中，消化收集，采用含5% FBS及1%内皮细胞生长因子（endothelial cell growth factor,ECGS）的内皮细胞专用培养基进行培养。将消化前后的脐带标本行HE染色，观察HUVECs脱壁情况；流式细胞仪检测原代细胞纯度；细胞培养期间于倒置相差显微镜下观察细胞形态；取第3代HUVECs

行免疫细胞化学染色观察、MTT检测细胞增殖情况，并将细胞接种于细胞外基质胶Matrigel上培养24 h，观察细胞管腔形成情况。结果经Ⅱ型胶原酶消化后的脐带内HUVECs大量脱落，细胞消化完全。经Ⅱ型胶原酶37℃培养箱中消化15 min后，可获得纯度为 99.56% 的HUVECs；原代HUVECs培养后2～3 d生长最快，呈典型的铺路石或鹅卵石样排列，4～6 d融合成片。 MTT 法检测显示第3代HUVECs培养后3～4 d细胞生长最快，5 d 左右融合；免疫细胞化学染色显示内皮细胞Ⅷ因子相关抗原表达阳性，培养24 h后在细胞外基质胶Matrigel上可见类似于毛细血管的完整闭合管腔形成。结论经自制空针软管静脉注入0.1%Ⅱ型胶原酶，使静脉充分充盈，内皮消化完全，采用含5%FBS和1%ECGS的内皮细胞专用培养基，可迅速获取大量高纯度、高存活率的HUVECs。【关键词】组织工程种子细胞人脐静脉血管内皮细胞细胞培养

EXPERIMENTAL STUDY ON CULTURE METHOD OF HUMAN UMBILICAL VEIN ENDOTHELIAL CELLS/CAI Weixia1, LIANG Liang2, JI Peng2, ZHANG Wanfu2, ZHANG Zhanfeng1, ZHANG Yangang1, XIAO Xifeng3, BAI Xiaozhi1, ZHU Huayu1, HU Dahai1, HAN Hua2. 1Burns Center of Chinese PLA, Xijing Hospital, the Fourth Military Medical University, Xi’an Shaanxi, 710032, P.R.China; 2Department of Medical Genetics and Developmental Biology, the Fourth Military Medical University; 3Department of Gynecology and Obstetrics, Tangdu Hospital, the Fourth Military Medical University. Corresponding author: HAN

Hua, E-mail: huahan@fmmu.edu.cn; HU Dahai, E-mail: burns@fmmu.edu.cn 【Abstract】 Objective To establish an efficient and stable culture method of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) in vitro so as to provide good source of seed cells for tissue engineered vascular grafts and for preclinical research. Methods The umbilical cords were harvested from full-term normal delivered neonates, which were perfused with 0.1% collagenase II by self-made needle and were digested at 37 and 5% CO2 humidified incubator. The HUVECs were cultured in endothelial culture medium (ECM) containing 5% fetal bovine serum (FBS) and 1% endothelial cell growth factor (ECGS). HE staining of the umbilical cords before and after digestion was used to observe the detachment of HUVECs, flow cytometry to detect the purity of primary HUVECs, and inverted phase contrast microscope to observe the morphology of the cultured HUVECs. The growth of the 3rd passage cells was measured by MTT assay; immunocytochemical technique and matrigel-based capillary-like tube formation assay were carried out to identify the function of HUVECs. Results After digestion of 0.1% collagenase II, marked HUVECs detachment was observed with complete digestion. The purity of the HUVECs was 99.56% by digestion of 0.1% collagenase II at 37 and 5% CO2 humidified incubator for 15 minutes. Primary HUVECs showed a cobblestone or pitching stone-like appearance in vitro, forming a confluent monolayer cells after 2-3 days of culture. MTT assay demonstrated that HUVECs showed the fastest growth speed at 3 to 4 days, and showed growth of cell fusion at about 5 days. Immunocytochemistry showed that HUVECs highly expressed endothelial marker factor VIII. Matrigel based capillary-like tube formation assay showed that it could form endothelial-like tube structures after 24 hours of culture. Conclusion Using improved method and ECM could obtain high quantity and high quality primary HUVECs, which might be a kind of promising seed cells for tissue engineering and preclinical research.

℃

作者单位：1 第四军医大学西京医院全军烧伤中心（西安，710032）；2 第四军医大学医学遗传学与发育生物学教研室；3 第四军医大学唐都医院妇产科△为共同第一作者

通讯作者：韩骅，教授，博士生导师，研究方向：血管发生的分子机制，E-mail: huahan@fmmu.edu.cn；胡大海，教授，博士生导师，研究方向：创面愈合与组织修复，E-mail: burns@fmmu.edu.cn网络出版时间：2011-1-6 16:22:41；网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1372.R.20110106.1622.201102.6_001.html

℃Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery, February 2011, Vol. 25, No.2·140·

【Key words】 Tissue engineering Seed cells Human umbilical vein endothelial cells Cell culture

血管内皮细胞具有多种生理功能，可产生和分泌多种生物活性物质，参与机体正常调节，也可因周围环境改变造成功能紊乱。体外血管内皮细胞的成功培养是研究内皮细胞功能及其在各种疾病的发生、发展中所起作用的基础。人脐静脉作为内皮细胞的来源，具有取材容易、来源较充足以及操作简便的特点，同时体外获得的人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）混杂细胞较少，与各种实验动物来源的血管内皮细胞比较，更接近人体内皮细胞生长特点，因此由人脐静脉分离培养的HUVECs是体外研究常用血管内皮细胞之一[1]。目前，关于HUVECs培养方法的报道较多，但还存在一些问题，如细胞消化不彻底、阳性率低、不能反复传代等[2-5]。基于大量HUVECs 培养经验，本实验建立并改良了一套操作性较强、成功率较高以及细胞生长状态佳的HUVECs分离和培养方法。报告如下。1 材料与方法1.1 实验材料及主要试剂、仪器足月妊娠分娩的新生儿脐带10根（离体时间< 3 h），均由第四军医大学唐都医院妇产科产妇自愿捐赠且知情同意。排除早产、妊娠高血压综合征、羊水Ⅲ度污染及产妇伴感染性疾病等。Ⅱ型胶原酶（Sigma 公司，美国）；内皮细胞专用培养基（Sciencell 公司，美国）；兔抗人Ⅷ因子抗原多克隆抗体、免疫组织化学染色试剂盒（北京中衫金桥生物技术有限公司）；细胞外基质胶Matrigel（BD公司，美国）；APC标记抗人CD31 抗体（Bioscience 公司，美国）。荧光倒置相差显微镜（Olympus 公司，日本）；BHC- 1300ⅡA/B型生物洁净安全柜（苏州净化设备有限公司）；Model 680型酶标仪（Bio-Rad公司，美国）；CO2 培养箱（Thermo 公司，美国）；高速低温冷冻离心机（Heraeus 公司，德国）；自制空针软管（将一次性静脉输液针保留前端软管套，另一端连于20 mL注射器）。1.2 HUVECs分离培养1.2.1 原代培养 ①表面消毒：于取脐带3 h内进行细胞培养。将脐带置于0.25%洗必泰溶液浸泡10 min，无菌生理盐水冲洗3次，去除脐带外周残留血，剪去有血肿、钳痕以及较弯曲部分，选择一段长约20 cm较直的脐带，修剪两端齐平备用。另剪取长约1 cm脐带，4%多聚甲醛固定，石蜡包埋、切片后，HE染色，倒置相差显微镜下观察。②管腔冲洗：从备用的脐带一端找到脐静脉后，将自制空针软管一端插入静脉内，用含肝素的生理盐水反复冲洗脐静脉至流出液清亮无色为止。③消化细胞：将脐带两端抬起成U形，一端通过自制空针软管将约10 mL预热的0.1% Ⅱ型胶原酶注入脐静脉，直到气体排尽、管腔完全充盈且另一端有Ⅱ型胶原酶流出时，用止血钳回折后夹住两端，置于37℃预热的PBS缓冲液中，于37℃、5%CO2

合集下载

四妙勇安汤对缺氧人脐静脉内皮细胞的影响

ＥｆｃｆＳｍｉｏｏｇｎａｇｏｍａｆｅｔｏｉａｙｎａｔｎｎＨｕｎＵｍｂｌａｉｄｔｅｉｌＣｅｌＩｊｒｄｂｐｘａｉｃｌＶｅｎＥｎｏｈｌｌｎｕｅｙＨｙｏｉｉａｓ
ＬＵＺｅ，ＥＹｎｘａｇＹＨｕ—ｉｇｅａ（ｈｉｚｕｎＩｈｎＷＩｕ —ｉ，Ｕｎｉｎ，ｔｌＳＵａｈａｇＨｏｐｔｌｆＴＭ，ｈｉｈａｇ００５，ｈｎ）ｑｓｉｏＣＳｉａｕｎ５０１ＣｉａａｊｚＡｂｔａｔｓｃ：ＯｂｅｔｅＴｔｙｔｅｅｅｔｏｉａｙｎａｔｎｎｈｍａｍｂｌａｅｎｅｄｔｅａｅｓｒｊｃｉｏｓｕｄｆｃｆｍｉｏｏｇｎａｇｏｕｎｕｉｃｌｉｎｏｈｌｃＵｖｈＳｉｖｉｌ
ＣｎｌｔｎＳｍａｙｎａｔｎａｒｔｃｖｆｃｎｈｐｘａｉｕｒｄＨＵＶｏｃｕｉｉｏｏｇａｇｈｓｐｏｅｔｅｅｅｔｙｏｉｏｉｎｉｏｊｎｅＥＣｓｗｈｃｙｂｅａｅｏｉ，ｉｈｍａｅｒｌｔｄｔｓｔｅｅｔｆｃｅｓｇｔｅｃｌｖｂｌｙｒｄｉｇｔｅｉｊｒｄｃｄｂｙｏｉ，ｐｒｇａｎｘｒｓｉｎｆｆｃｒａｉｅｌｌａｉｔ，ｅｕｃｎｕｙｉｕｅｈｐｘａｕ —ｅｕｌｔｇｅｅｓｏｓｏｏｉｎｎｈｓｉｉｈｎｎｙｉｐ
摘要：目的
观察四妙勇安汤对体外培养的人脐静脉内皮细胞（ＵＥ）ＨＶＣ缺氧损伤模型的影响。方法

汉防己甲素对人脐静脉内皮细胞VEGF mRNA和Flk1蛋白的影响

汉防己甲素对人脐静脉内皮细胞VEGF mRNA和Flk1蛋白的影响（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【摘要】目的观察汉防己甲素对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells , HUVEC)中血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor , VEGF)mRNA 和血管内皮生长因子受体-2(Fetal liver kinase，Flk1)蛋白表达的影响,探讨其可能的作用机制。

方法应用MTT法测定不同浓度(10-3、10-4、10-5、10-6M)Tet对HUVEC的抑制作用，用免疫组织化学和原位杂交方法分别检测血管内皮生长因子受体-2(Flk1)蛋白和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA在血管内皮细胞中的表达。

结果(1)Tet 能抑制HUVEC增殖且具有量效依赖关系;(2)Flk1蛋白、VEGF mRNA在1640对照组、Tet实验组中的表达率分别为(0.742±0.057，0.445±0.066)，(0.596±0.047，0.324±0.049)。

Tet明显降低Flk1蛋白、VEGF mRNA在内皮细胞中的表达(P0.05)。

结论汉防己甲素下调人脐静脉内皮细胞中VEGF mRNA和Flk1蛋白的表达，从而抑制人脐静脉内皮细胞增殖。

【关键词】汉防己甲素;人脐静脉内皮细胞;血管内皮生长因子受体;血管内皮生长因子Flk1 protein and VEGF mRNA in tetrandrine on human umbilical vein endothelial cellsLI Dai,LI Qing-chun.Department of Ophthalmology,Xianning College, Xianning 437100,China[Abstract] Objective To investigate the inhibitory effect of tetrandrine (Tet) on the VEGF mRNA and Flk1 in the third passage human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) in vitro and discuss the drug effects of Tetrandrine in anti-angiogenesis.Methods Cultured HUVEC were exposed to different concentrations of Tet solution(10-3、10-4、10-5、10-6M) and investigated by MTT assay. Using immunochemistry to observe the expression of Flk1 and VEGF mRNA was examined by utlizing in situ hybridization (ISH) in cultured HUVEC.Results (1)Tet (10-3、10-4、10-5、10-6M) significantly suppressed the proliferation of HUVEC in vitro and showed a dose-dpendent tendency. (2)The rate of the expression of Flk1 and VEGF mRNA in Tet-treated group was 0.445±0.066，0.324±0.049, respectively and that in control group was 0.742±0.057, 0.596±0.047，respectively.Conclusion Tetrandrine at some concentrations can suppress the expression of Flk1 and VEGF mRNA in cultured HUVEC, and inhibit HUVEC’s proliferativeactivity. Tetrandrine is a potent antiangiogenic agent.[Key words] Tetrandrine; human umbilical vein endothelial cell; Flk1; VEGF眼部新生血管是许多种眼科疾病的常见并发症之一,常导致视力减退或盲，而血管内皮细胞生长因子(VEGF)在血管生成过程中起着重要作用[1],因此近年来,新生血管研究的体外实验大多都集中在防治血管内皮细胞生长因子和其特异性受体的相关研究上。

胶原酶脐带灌注消化法在人脐带静脉内皮细胞的原代分离培养中的作用

胶原酶脐带灌注消化法在人脐带静脉内皮细胞的原代分离培养中的作用谢明斌;刘梅林【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2009(049)051【摘要】目的探讨人脐带静脉内皮细胞原代分离培养方法,为血管内皮功能及其相关疾病的研究奠定基础.方法采用0.1%Ⅰ型胶原酶脐带静脉灌注消化法,分离得到血管内皮细胞后,加入M199混合培养液,置于37 ℃、5%CO2培养箱中培养,以0.25%胰蛋白酶进行消化传代培养.细胞鉴定采用形态学方法、透射电镜法以及细胞Ⅷ因子免疫化学法.结果原代人脐静脉内皮细胞约24 h后完全贴壁,第3～4天融合成单层,呈铺路石状镶嵌排列;细胞透射电镜观察可见特征性Weibel-Palade小体以及细胞表面大量微绒毛;细胞Ⅷ因子抗原免疫组化以及荧光显示均呈阳性反应,证实所分离培养细胞为人脐带静脉内皮细胞.结论采用胶原酶脐带静脉灌注消化法可分离得到较为纯化的内皮细胞,并可在体外连续大量增殖传代,5代内的细胞均可用于研究.【总页数】3页(P10-12)【作者】谢明斌;刘梅林【作者单位】北京大学第一医院,北京100034;北京大学第一医院,北京100034【正文语种】中文【中图分类】R714.56【相关文献】1.人脐带静脉内皮细胞的分离及长期培养 [J], 周少元;郭辉至2.人脐带间充质干细胞的条件培养基对炎症因子致人脐静脉内皮细胞凋亡的保护作用 [J], 段辉3.人脐带间充质干细胞培养上清液对甲状腺乳头状癌细胞诱导人脐静脉内皮细胞血管形成的影响 [J], 丁超; 董利阳; 郑婷婷; 刘佳梦; 康萍; 张助; 毛朝明4.胶原酶消化刮取再消化法分离培养犬静脉内皮细胞的实验研究 [J], 李刚;萧晗;唐军建;王峰;游庆军5.翻转消化法和灌注消化法分离培养兔耳缘静脉内皮细胞的比较 [J], 陈娟;王廷华;黄桂琴;易伟斌;徐岩泽;罗哲文;胡竹林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

微囊化人血管抑素基因工程细胞对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

ａｎｖｌｌｅｐｏｅｎｒｍＵ．ｉｄｃｓｍｅｉｔｄｙｏｅｇｙｏｒｔｉｆｏｎｉａｉｄａｅｈＮＦ — ＫａｄＢｎ
４
ＨｏｍａｎＡ，ＣｕｕｉｒｎｈａｄｒＢ．ＤＮＡｎｉｇｐｏｅｔｓｆｔｅｂｉｄｎｒｐｒｉｏｈｍａｉｅｅｒｎ
６
ｒｎａｄｆＢ．ＤＮｂｎｉｇｐｏｅｔｓｏｅｍａｉｅｓｏｇｉＡｉｄｎｒｐｒｅｆｔｒｎｐｎｅｉｈｌＨｏｍａｎＡ，Ｃｈｕｕ１
ＳｂａｎａｕｒｍａｉｎＢ，ＮａｅｋｆＡ，Ｔｎｅ，ｅ１ＡｎｗｐｒｄｇｆｒｔｅｅｎｙＫｔａ．ｅａａｉｍｏｈ
ｃｏ— ｃｔｒｄｗｉｈＨｕｃ３ｎｄｆｅｅｔｃｌｃｎｅｔａｉｎ．Ａｆｅｕｌｕｅｔｅｖ０４ｉｉｒｎｅｌｏｃｎｒｔｏｔｒ０
，
２，４ｎｄ７４８ａ２ｈ，ｔｒｌｆｒｔｏｆＨｕｖ０４ｈｅｐｏｉａｉｎｏｅｅ３ｗａｅｕｅｔｅｓｍａｓｒｄｗｉｈ
的基因工程细胞（Ｐ — Ａ／９ＡＡｈＳ２３细胞微囊）空载体转染的基因工程细胞（Ｐ一／９或ＡＡ０２３细胞微囊）。分别将上述两种细胞微囊
以不同浓度与人脐静脉内皮细胞Ｈｅｖ０ｕｃ３４细胞共培养，培养０２、８及７ｈ时，ＭＴ于、４４２以Ｔ法测定Ｈｅｖ０ｕｃ３４细胞的增殖情况。

高糖诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤及盐酸贝那普利对其保护作用的实验研究

人脐静脉血管内皮细胞株分别培养在含５５ｍｏＬ葡萄糖（．ｍｌ／Ａ组）３３ｍｏＬ葡萄糖（、３．ｍｌ／Ｂ组）３３ｍｏＬ葡萄、３．ｍｌ／糖＋．ｍｌＬ盐酸贝那普利（０１￣ｏ／ｃ组）３３ｍｌＬ葡萄糖＋１０￣ｏＬ盐酸贝那普利（、３．ｍｏ／．ｍｌ／Ｄ组）３３ｍｏＬ葡萄、３．ｍｌ／糖＋１．ｍｌＬ盐酸贝那普利（００￣ｏ／Ｅ组）的培养基中培养２，倒置相差显微镜观察细胞形态，并分别进行细胞活力、４ｈ
【关键词】高糖；内皮细胞；盐酸贝那普利；抗氧化【中图分类号】Ｒ５１Ｒ５７１【．４４８．文献标识码】Ａ【文章编号】１０ — ５２（０８８１４ — ３０７９７２０）０Ａ一３５０
ＰｏｅｔｅＥｅｔｆｅａｅｒｄｏｈｏｉｅｏｅＩｊｒｆｍａｍｂｉｌｓｕａｎｏｈｌｌｅｓｎｕｅｙｒｔｃｉｆｃｎｚｐｉＨｙｒｃｌｒｎｔｕｙｏｖｏＢｌｄｈｎＨｕｎＵｉｃｃｌｒＥｄｔｅａＣｌｄｃｄｂｌａＶａｉｌＩ
ｌｉｈＧｌｏｅＹＮＪａｎＨｈｎＩｕｓＡｉｎ一ｇ，ＥＳｅｇ—ｈ，ＡｇｃｕＹＮ
ＪａｇｕＰｏｉｃ，ａｇｈｕ２５０１ＣｉａｉｎｓｒｖｎｅＹｎｚｏ２０，ｈｎ
一ｄ，１ｐｒｅｔｆＣｒｉｌｙＳｂｉｅｐｅＳｏｉｌｉｅａ．ａｔｎｏａｄｏｏ，ｕｅＰｏｌｓｔｔＤｅｍｇＨｐａｏｆ

复方血塞通滴丸对血管内皮细胞增殖作用的研究

复方血塞通滴丸对血管内皮细胞增殖作用的研究王建明;宋鸽;刘春凤【期刊名称】《中医药信息》【年(卷),期】2011(028)002【摘要】目的:研究复方血塞通滴丸对体外培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)增殖的影响.方法:制备含不同浓度的复方血塞通滴丸药液的细胞培养液(30mg·L-1,100mg·L-1,300mg·L-1)分别作用于培养的HUVEC细胞24h,48h.通过细胞形态学、MTT法检测复方血塞通滴丸对HUVEC的增殖的影响.结果:复方血塞通滴丸组光密度(OD)值明显高于对照组;48h 的OD值明显高于24h的OD值.结论:复方血塞通滴丸能够明显地促进HUVEC细胞增殖,且对浓度和时间有一定的依赖性.提示复方血塞通滴丸能够有效地改善血液循环,起到活血化瘀的作用.【总页数】4页(P68-71)【作者】王建明;宋鸽;刘春凤【作者单位】黑龙江中医药大学中医药研究院,黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学,黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学,黑龙江哈尔滨150040【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.碘促进血管内皮细胞增殖作用与MEK1相关性及碘对血管内皮细胞表达VEGF 影响的实验研究 [J], 李鹏飞;腾飞;庄银萍;祖茂衡;张庆桥2.MiR-495通过下调PCNA抑制人血管内皮细胞增殖的作用研究 [J], 郑华峰;陶晶;张斌;王纯;吴淳3.黄芪甲苷与阿魏酸合用调控JAK-STAT通路促进血管内皮细胞增殖作用的研究[J], 李玉梅;鲍慧玮;王楚盈;张亚杰;韩冬;潘建衡;方晶;黄金秋;刘仲康4.神经纤毛蛋白-1调控血管内皮细胞增殖迁移的功能作用和潜在机制研究 [J], 张煜;张洪伟;杨鹏;卢晨;黄尧;刘宇;胡佳5.养正祛瘀中药干预对子宫肌瘤患者组织中血管内皮细胞生长因子受体、雌孕激素受体表达水平的影响及细胞增殖中的作用机制研究 [J], 蔡卉;刘艺;徐静静因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

Parthenolide对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的作用研究

０ｔｎｏｇｕ，ａｈｎｌｅｔｈｏｎｅｔｔｎｏ１ｒ／ｏＬｈｓｏｆｃｏｈｔｉＨＶＣＰ＞Ｏ０）ｗｅａｆｈｃｔｌｒｐｐｒｅｏｄｔｅｏｒｏｔｉａｅｃｃｎｒｏ５ｎｌａｅｔｎｔｖａｔｏＵＥｓ（ａｉｆｏａ／ｎｅｅｉｌｙｆ．，ｈｒｓ５ｅ
・
基础研究・
Ｐｒｅｏｄ对人脐静脉内皮细胞增殖和ａｈｎｌｅｔｉ凋亡的作用研究
任
［摘要］目的
琦，晓晟，雪艳，胡姚陶谦民，张
力
３０３１０）０胶原酶
（浙江大学医学院附属第一医院，浙江杭州
观察Ｐｒｅｌｅａｈｏｄ对体外培养的人脐静脉内皮细胞（ａｃ的增殖和凋亡的影响。方法ｔｎｉｍｒ）Ｅ
１２ｖｏＬｐｒｅｏｄａｎｉｉｐｌｒｔｎｏＨＶＣａＰ＜００ｗｔｏ－ｎｉｅｄｐｎｅｔＴｌ￣．ｈｏｔ。Ｏ一０．］ａｔｎｌｅｎｉｂｒｉａｏｆＵＥｓ（ｌｍ／ｈｉｃｈｔｏｆｉｅｌ．１）ｉｄｓａｄｔ－ｅｅｄｎＩｑｒＴｅａｐｔｈｅｍｌＦａｐｏ
Ｏ０）１、５ｎｏＬＰｒｅｏｄ组在６、２、４．，０１ｔｌａｈｎｌｅ５ｎ／ｔｉｈ１ｈ２ｈ各个时间段的凋亡指数均高于对照组（Ｐ＜Ｏ０）且Ｐｒｅｏｄ均．１；ａｈｎｌｅｔｉ
１ｔｎｌ０ｎｏＬ和１ｔｎｌＬ组在１２ｈ的凋亡指数均高于６（／５ｏｎ／２和４ｈＰ＜００）但１２ｈ上述两组相比无统计学差异（．１，２和４Ｐ＞Ｏ０）．５。结论一定浓度范围内的Ｐｒｅｏｄ对内皮细胞的增殖和凋亡无明显影响，ａｔｎｌｅｈｉ而高浓度时可同时抑制细胞增殖

黄芪提取物对人脐静脉内皮细胞的促血管新生作用

黄芪提取物对人脐静脉内皮细胞的促血管新生作用张燚;胡光;洪思佳;刘倩青;李铭源;王一涛【期刊名称】《中药药理与临床》【年(卷),期】2007(023)002【摘要】目的:研究黄芪提取物(RAE)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的促血管新生作用.方法:以体外培养HUVEC为模型,XTT法及细胞计数法检测不同剂量黄芪提取物对细胞增殖的影响;细胞迁移实验检测加药后细胞迁移能力;采用Transwell chamber进行细胞侵入实验检测黄芪提取物对细胞侵入能力的影响;管形形成实验观察加入黄芪提取物后细胞分化情况.结果:XTT法检测HUVEC在黄芪提取物浓度为12.5μg/ml时产生最大增殖效应,增殖率为42.04%.细胞计数法测得在黄芪提取物浓度为25μg/ml时细胞数目比对照组增多124.64%.同时发现在黄芪提取物浓度为25μg/ml时能够最大能力地诱导细胞侵入和管形形成,其侵入率为66.68%,管形分枝点增值率为44.38%;而在浓度为12.5μg/ml时能够最大限度地诱导细胞迁移,迁移率为74.94%.结论: 黄芪具有促进血管新生的作用.【总页数】4页(P34-37)【作者】张燚;胡光;洪思佳;刘倩青;李铭源;王一涛【作者单位】澳门大学中华医药研究院,澳门;澳门大学中华医药研究院,澳门;澳门大学中华医药研究院,澳门;澳门大学中华医药研究院,澳门;澳门大学中华医药研究院,澳门;澳门大学中华医药研究院,澳门【正文语种】中文【中图分类】R2【相关文献】1.三七总皂苷对人脐静脉内皮细胞的促血管新生作用 [J], 洪思佳;万建波;张庆文;张燚;胡光;刘倩青;李铭源;王一涛2.葛根素对人脐静脉内皮细胞的促血管生成作用及机制的研究 [J], 张杰;龚妙添3.重组人促红细胞生成素体外诱导人脐静脉内皮细胞血管新生作用的实验研究 [J], 姚晓艳;李红戈4.重组人促红细胞生成素对人脐静脉内皮细胞及鸡胚尿囊绒毛膜促血管生成的作用[J], 周乾毅;袁新初;程桂荣;张伟;杨逢春5.从调控血管内皮生长因子及其受体激活Notch信号通路角度探讨生地梓醇促血管新生及神经功能重塑作用 [J], 孙立平;周霞;刘炬;张佳乐;王祥煜;郭炳杉;刘伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

α-硫辛酸预处理对人脐静脉内皮细胞缺氧复氧损伤的保护作用

α-硫辛酸预处理对人脐静脉内皮细胞缺氧复氧损伤的保护作用张晶晶;邓后亮;季爱民【期刊名称】《实用医学杂志》【年(卷),期】2014(000)007【摘要】目的：观察α-硫辛酸（lipoic acid， LA）预处理对缺氧复氧损伤的血管内皮细胞的保护作用，并初步探讨其作用机制。

方法：体外培养人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell，HUVEC）。

分为正常对照组、缺氧复氧模型组以及LA预处理组。

倒置相差显微镜观察各组内皮细胞形态；MTT 法检测细胞活力；不同试剂盒分别检测细胞内总抗氧化能力（total antioxidant capacity，TAOC）、一氧化氮（nitric ox-ide， NO）含量、丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性；流式细胞仪检测细胞凋亡；Western blot检测cleaved caspase-3凋亡蛋白表达。

结果：缺氧复氧模型组的细胞存活率、TAOC、SOD活性及NO浓度显著低于正常对照组（P＜0．05），MDA水平、凋亡率及凋亡蛋白水平显著高于正常对照组（P＜0．05）。

LA能剂量依赖性地提高缺氧复氧血管内皮细胞的存活率、TAOC、SOD活性及NO浓度（P＜0．05），降低MDA水平、减少细胞凋亡（P＜0．05）。

结论：LA对血管内皮细胞缺氧复氧损伤具有明显的保护作用，而抗凋亡是其可能的作用机制之一。

%Objective To observe the protective effect of α-lipoic acid (LA) pretreatment on hypoxia/reoxyg-enation injury in vascular endothelial cells and preliminary explore its mechanism. Methods HUVEC were cultured intro and devided into controlgroup,hypoxia/reoxygenation model group and LA group. Cell morphology was observed under inverted phase contrast microscope,cell viability was detected by MTT,total antioxidant capacity (TAOC),nitric oxide(NO),malondialdehyde (MDA),superoxide dismutase (SOD) activity or level were measured by various commercial kits respectively. Apoptosis of HUVEC in each group were detected by flow cytometry , cleaved caspase-3 level was measured by western blot. Results As compared to control group, the survival rate, TAOC, SOD, NO activity were significantly lower(P<0.05), and MDA level, apoptosis rate and apoptosis protein levels were significantly higher (P < 0.05) in model group. However,LA can increase the survival rate,TAOC, SOD,NO activity (P < 0.05),reduce MDA level and cell apoptosis (P < 0.05)in a dose dependent manner. Conclusion LA pretreatments provide protection against hypoxia/reoxygenation injury in HUVEC. LA exerts protective effects through inhibition of HUVEC apoptosis.【总页数】4页(P1053-1056)【作者】张晶晶;邓后亮;季爱民【作者单位】510282 广州市，南方医科大学珠江医院;510282 广州市，南方医科大学珠江医院;510282 广州市，南方医科大学珠江医院【正文语种】中文【相关文献】1.PEP-1-CAT预处理对H9c2细胞缺氧复氧损伤的保护作用 [J], 魏双;王家宁;唐俊明;黄永章;郭凌郧;张蕾;郑飞;孔霞2.七氟醚预处理对大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及相关分子机制的探究[J], 李治秋;赵正兰;李琴芳3.卡托普利晚期预处理对人内皮细胞缺氧复氧损伤保护作用机制的研究 [J], 徐慧;文薏;谭虹4.丹参三七不同配比对缺氧复氧损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用 [J], 曾桂凤;刘建勋;李澎;付绍平;肖红斌;梁鑫淼5.五甲基槲皮素预处理对大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤保护作用的机制研究 [J], 万青;彭易安;刘丹;黄璜;刘季春;何明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

丹红注射液滴注液保护内皮细胞免受氧化损伤的体外研究

丹红注射液/滴注液保护内皮细胞免受氧化损伤的体外研究 满永* 丁莉* 国汉邦王蕾王抒黎健△ (卫生部北京医院老年医学研究所，北京100730) [摘要] 目的：分析低密度脂蛋白（low density lipoprotein, LDL）和无血清培养刺激人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)时细胞内活性氧（reactive oxygen species, ROS）、NADPH氧化酶4（NADPH oxidase 4, NOX4）mRNA水平和细胞凋亡的变化；研究丹红注射液/滴注液保护内皮细胞免受氧化损伤的作用及机制。方法：以MTT法观察丹红液对HUVECs生长的影响；应用RT-PCR检测NOX4的mRNA水平；用流式细胞仪分析细胞凋亡率；并以DCFH-DA法检测细胞内ROS生成量。结果：高LDL和无血清培养等刺激HUVECs时，NOX4的mRNA表达上调，细胞内ROS生成增加，细胞凋亡增加。用丹红液预处理HUVECs可以拮抗LDL和无血清培养时的作用，降低NOX4 mRNA水平，抑制细胞内ROS生成和凋亡的发生。结论：丹红液可以保护内皮细胞免受由LDL和缺血引发的氧化损伤。 [关键词]：人脐静脉内皮细胞 NADPH氧化酶活性氧丹红注射液

引言：业已证明，血液中大量低密度脂蛋白（low density lipoprotein, LDL）在内皮下的沉积可导致内皮细胞损伤。LDL进入血管内皮细胞后可刺激细胞产生活性氧（reactive oxygen species, ROS），引起氧化修饰LDL（oxidized low density lipoprotein, oxLDL）的形成，诱导内皮细胞凋亡[1]。在正常生理情况下，由于血液中存在抗氧化酶系统如超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）、过氧化氢酶（catalase, CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase, GPx），内皮细胞产生的ROS维持在较低水平，一旦大量LDL进入内皮细胞，则导致高水平ROS的产生和oxLDL的形成，并刺激内皮细胞产生ICAM-1和VCAM-1等粘附因子，造成炎症细胞浸润，加重血管内皮的炎症损伤。Lee[2]等发现无血清培养可增加ROS生成，导致细胞凋亡。这些研究提示ROS在动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)的发生过程中起重要作用。因此，探寻具有抗氧化作用的药物用于防治心脑血管病具有重要的临床意义和广阔的应用前景。本实验建立血管内皮细胞损伤模型，研究丹红注射液/滴注液保护内皮细胞的作用，侧重研究丹红液的抗氧化作用。

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。