白血病小鼠模型的建立及鉴定
白血病小鼠模型的建立及鉴定
pMSCV-BCＲ/ABL1-IＲES-GFP逆转录病毒上清感染6～10周龄C57BL/6供者小鼠的骨髓细胞，移植给致死量射线照射的同种同型受者小鼠，建立BCＲ-ABL1+粒细胞白血病小鼠模型;监测移植小鼠的体质量，生存率;流式细胞仪检测小鼠外周血有核细胞GFP表达(代表有核细胞表达BCＲ/ABL1)和细胞分型;观察小鼠脾脏、肺脏和肝脏等器官大体形态和HE染色变化．结果：移植20d后，移植小鼠表现弓背、活动性减少、精神萎靡的状态，体质量明显降低;流式细胞仪检测外周血中出现GFP+细胞，并且随着移植时间的延长，GFP+粒细胞明显增多．移植小鼠的生存率较对照组明显降低．移植小鼠发病后表现脾脏显著增大、肺出血、肺脏及肝脏出现白色结节和HE染色表现大量细胞浸润，且小鼠脾脏中有核细胞的80%为GFP+Gr-1+细胞，即BCＲ-ABL1+粒细胞白血病细胞．结论：利用此方法成功建立了BCＲ-ABL1+粒细胞白血病小鼠模型，为研究慢性粒细胞白血病机制和治疗提供了平台．
【关键词】BCＲ-ABL1+粒细胞白血病;BCＲ-ABL1;小鼠;生存率;逆转录病毒载体
0引言
慢性粒细胞白血病(chronicmyeloidleukemia，CML)是一种以粒细胞失去分化水平，过度增殖为特征的骨髓增生性疾病，是一种伴有t(9;22)(q34;q11)染色体易位的恶性增生性疾病［1］．该易位染色体由位于9号染色体的原癌基因ABL1部分序列从其正常位置易位至22号染色体的BCＲ区(breakpointclusterregion，BCＲ)形成［2］，其编码的蛋白具有高度异常酪氨酸激酶活性，造成了CML细胞对酪氨酸激酶抑制剂的抵抗［3］．所以，研究CML的发病机制和治疗药物显得尤为重要，而一个良好的实验平台是研究机制和药理的基础．研究［4－5］发现，虽然我们能够利用将CML患者的白血病细胞移植给NOD/SCID小鼠构建的小鼠模型来研究白血病细胞是否导致并维持了CML，但是这种模型不能造成致死性CML且耗时较长;而BCＲ-ABL转基因小鼠模型因为不能完全发展成为髓系增生性疾病且具有潜伏期长的局限性，不利于治疗药物的研究［4－5］．逆转录病毒感染骨髓细胞的移植模型则是一种稳定高效的诱导方式［6］，能够为研究CML的发病机制和治疗药物提供协助．本研究在逆转录病毒感染骨髓细胞移植模型的基础上建立了更加省时、高效且易于监测病程和鉴定疾病类型的方式，成功建立了容易监测及鉴定的BCＲ-ABL1+粒细胞白血病小鼠模型，为CML的机制和药物研究提供了一个良好的平台．
1资料和方法
1．1材料
1．1．1载体和试剂
pMSCV-BCＲ/ABL1-IＲES-GFP、pkat-ampac逆转录病毒包装载体由本实验室保存．5-Fluorouracil(5-Fu，Cat#6627)、HEPES和polybrene来自Sigma．抗小鼠Gr-1-APC(Cat#553129)流式抗体来自BD．SCF、IL-3、IL-6来自Peprotech．
1．1．2实验动物
6～10周龄的C57BL/6小鼠购买并饲养于西安交通大学医学部SPF级动物房．
1．2方法
1．2．1pMSCV-BCＲ/ABL1-IＲES-GFP逆转录病毒的制备
用293T细胞培养基(DMEM培养液含有10%FBS、1%青链霉素，200mM谷氨酸和1%MEMnon-essential氨基酸)将293T细胞于10cm培养皿培养至密度为80%时，利用pMSCV-BCＲ/ABL1-IＲES-GFP逆转录病毒载体转染293T细胞，48h后收集pMSCV-BCＲ/ABL1-IＲES-GFP逆转录病毒上清液立即使用或储存－80．
1．2．2采集和体外培养供者小鼠骨髓细胞
要求供者和受者小鼠属于同一品系．通常情况下，10只供者小鼠可提供2～3107骨髓细胞．第1天，取6～10周龄SPF级C57BL/6小鼠20只，尾静脉注射0．6mL5-Fu/只，按200mg/kg计算．第4天时，处死小鼠获取4～6107骨髓细胞，将供者骨髓细胞分为两等分，即实验组和对照组，用48mL骨髓细胞刺激培养基(含有77%DMEM，20%FBS，1%青链霉素，200mM谷氨酸，18ng/mL小鼠重组IL-3，20ng/mL小鼠重组IL-6以及100ng/mL小鼠重组SCF)分别悬于两个六孔板中，在CO2培养箱内培养24h．
1．2．3pMSCV-BCＲ/ABL1-IＲES-GFP逆转录病毒感染供者小鼠骨髓细胞
第5天，向实验组的六孔板加入pMSCV-BCＲ/ABL1-IＲES-GFP逆转录病毒第一次转染骨髓细胞培养基(含有50%pMSCV-BCＲ/ABL1-IＲES-GFP逆转录病毒上清，18ng/mL小鼠重组IL-3，20ng/mL小鼠重组IL-6，100ng/mL小鼠重组SCF，1%HEPES和20μg/mLpolybrene)，每孔2mL，对照组的六孔板加入骨髓细胞刺激培养基，每孔2mL，轻柔混匀后，室温2300rpm离心90min，继续在CO2培养箱中培养3～4h．室温下1500rpm离心10min，丢弃上清液，各加入24mL骨髓细胞刺激培养基，过夜培养．第6天，向实验组的六孔板加入pMSCV-BCＲ/ABL1-IＲES-GFP逆转录病毒第二次转染骨髓细胞培养基(含有50%pMSCV-BCＲ/ABL1-IＲES-GFP逆转录病毒上清，18ng/mL小鼠重组IL-3，20ng/mL小鼠重组IL-6，100ng/mL小鼠重组SCF，1%HEPES和20μg/mLpolybrene)，每孔2mL，悬浮第一次转染后的骨髓细胞，向对照组的六孔板加入骨髓细胞刺激培养基，每孔2mL，轻柔混匀后，室温2300rpm离心90min，CO2培养箱培养3h．最后用Hank's缓冲液悬浮两组骨髓细胞，准备注射受者小鼠．
1．2．4致死量射线照射受者小鼠并实行骨髓移植
第6天，采用医用电子直线加速器(英国Eiekta)照射6～10周龄SPF级的C57BL/6小鼠12只，辐射剂量920cGy．将上述pMSCV-BCＲ/ABL1-IＲES-GFP逆转录病毒感染后的供者小鼠骨髓细胞，尾静脉注射给6只受照射后的受者小鼠作为实验组，同样，将未使用逆转录病毒感染后的供者小鼠骨髓细胞，尾静脉注射给6只受照射后的受者小鼠作为对照组，细胞用量为1106/0．4mL/只．SPF级动物房饲养移植后小鼠．每隔一天观察小鼠存活情况、称取体质量;每周采用流式细胞仪检测受者小鼠外周血GFP阳性细胞数量，即代表表达BCＲ-ABL1的细胞．大约15～20d可建立BCＲ-ABL1+粒细胞白血病小鼠模型．
1．2．5BCＲ-ABL1+粒细胞白血病小鼠模型的鉴定
1．2．5．1移植小鼠体质量和生存率监测
每隔一天称取并记录实验组小鼠和对照组小鼠的体质量，计算实验组小鼠和对照组小鼠的生存率．
1．2．5．2流式细胞仪检测
每周取移植受者小鼠内眦血于抗凝剂中，经红细胞裂解液裂解8min去掉红细胞后，1PBS洗2次，检测外周血有核细胞中GFP+白血病细胞的百分比并计数．将濒死的移植受者小鼠处死后观察小鼠脾脏，尽快收集病鼠的骨髓细胞及脾脏细胞，经红细胞裂解液裂解5min去掉红细胞后，1PBS洗2次，利用抗小鼠Gr-1抗体对移植受者小鼠的骨髓和脾脏细胞避光孵育20min，1PBS洗2次，1PBS悬起后流式细胞仪检测实行免疫分型．以Gr-1+GFP+表示粒细胞白血病细胞．
1．2．5．3移植受者小鼠肺脏和肝脏HE染色
将濒死的移植受者小鼠处死后观察小鼠肺脏和肝脏，将肺脏和肝脏组织标本经石蜡包埋，切片和HE染色后，显微镜下观察白血病细胞的浸润情况．
2结果
2．1移植小鼠体质量和生存率变化
将pMSCV-BCＲ/ABL1-IＲES-GFP逆转录病毒感染后的C57BL/6供者小鼠骨髓细胞，尾静脉注射给受照射后的C57BL/6受者小鼠作为实验组，以接受同样剂量照射并移植未感染病毒的供者骨髓细胞的C57BL/6受者小鼠作为对照组，每隔一天称取体质量，监测小鼠体质量变化．因为致死量照射，移植后的C57BL/6小鼠体质量表现照射性降低，随后在一周之内恢复体质量并且持续平稳，在移植后3周时，实验组小鼠体质量连续降低，而对照组小鼠体质量保持平稳(图1A)，C57BL/6实验组小鼠与C57BL/6对照组小鼠的体质量变化比较，差异具有统计学意义(P＜0．05)．
2．2移植小鼠外周血白血病细胞监测情况
C57BL/6受者小鼠接受供者的小鼠骨髓细胞后，每周取移植受者小鼠内眦血，监测受者小鼠外周血中GFP+白血病细胞的水平．通过流式细胞仪检测后发现，C57BL/6实验组小鼠7d后外周血中即出现GFP+细胞(图2A)，并且随着移植时间推移，GFP+粒细胞明显增多(图2B)．至白血病细胞占外周血有核细胞80%时，小鼠迅速死亡．C57BL/6对照组小鼠外周血中始终未出现GFP+细胞．
2．3移植小鼠粒细胞白血病建模成功
骨髓移植20d左右时，实验组小鼠表现弓背、活动性减少、精神萎靡、进食减少的状态(图3A)．当实验组小鼠体质量连续减轻且外周血白血病细胞持续增高时，处死实验组小鼠和对照组小鼠，观察肺脏、脾脏及肝脏，发现实验组小鼠脾脏较对照组体积增大显著，且出现肉眼可见大小不一数个白色突起(图3B)，实验组小鼠肺脏表现出血、粗糙且布满白色点状结节(图3C)，肝脏布满白色结节(图3D)．将肺脏和肝脏实行HE染色，观察到实验组小鼠肺脏和肝脏有大量白细胞浸润(图3E、3F)．将脾脏实行HE染色，同样观察到实验组小鼠脾脏有大量
小鼠dic实验报告
小鼠dic实验报告
小鼠DIC实验报告
导言：
DIC（弥散性血管内凝血）是一种严重的凝血异常疾病，常见于感染、创伤、肿瘤和妊娠等情况下。为了深入研究DIC的发病机制以及寻找有效的治疗方法，本实验选用小鼠作为模型，进行了一系列的实验研究。
实验一：DIC模型建立
为了建立DIC小鼠模型，我们采取了以下步骤：
1. 注射LPS：将小鼠分为两组，一组注射LPS（脂多糖），另一组注射生理盐水作为对照组。
2. 观察症状：观察小鼠注射LPS后的症状变化，包括体温变化、行为活动等。
3. 采集血液样本：在一定时间内，定期采集小鼠的血液样本，用于后续的实验分析。
实验二：凝血功能检测
为了了解DIC小鼠的凝血功能变化，我们进行了以下实验：
1. 凝血酶原时间（PT）检测：使用凝血酶原时间试剂盒，按照说明书进行检测，记录PT值的变化。
2. 活化部分凝血活酶时间（APTT）检测：使用APTT试剂盒，按照说明书进行检测，记录APTT值的变化。
3. 血小板计数：使用血小板计数仪，对DIC小鼠的血液样本进行计数，了解其血小板数量的变化。
实验三：炎症因子检测 为了研究DIC小鼠体内炎症反应的变化，我们进行了以下实验：
1. 白细胞计数：使用血细胞分析仪，对DIC小鼠的血液样本进行计数，了解其白细胞数量的变化。
2. 炎症因子ELISA检测：采集DIC小鼠的血液样本，使用ELISA方法检测炎症因子（如TNF-α、IL-6等）的浓度变化。
实验四：病理学观察
为了进一步了解DIC小鼠组织的病理学变化，我们进行了以下实验：
1. 组织切片制备：将DIC小鼠的组织（如肝脏、肺等）取出，进行固定、包埋和切片制备。
2. HE染色：对组织切片进行HE染色，观察组织的病理学变化，如出血、血栓形成等。
结论：
通过以上实验，我们成功建立了小鼠DIC模型，并对其凝血功能、炎症反应以及病理学变化进行了全面的研究。实验结果表明，在DIC小鼠中，凝血功能异常，炎症因子水平升高，并伴有组织病理学变化。这些结果为进一步研究DIC的发病机制和寻找治疗方法提供了重要的实验依据。然而，仍需进一步研究才能更深入地了解DIC的发病机制以及寻找更有效的治疗方法。
建立小鼠肿瘤模型的研究进展
建立小鼠肿瘤模型的研究进展
摘要：建立一种理想的肿瘤动物模型对研究肿瘤的发病、治疗和预防有重大的意义。其中小鼠肿瘤模型具有生长周期快、易获得、易操作等优点被基础实验研究所广泛采用，如何选择和建立一个合适的小鼠肿瘤模型对肿瘤的整个研究有着举足轻重的作用。
关键字：肿瘤，动物模型，小鼠
肿瘤，是一种严重威胁人类健康的多发病和常见病。对肿瘤的研究一般都是在人类疾病动物模型的基础上展开的。建立一个完全反映人类疾病的动物模型比较困难，但可依据不同的实验目的选择相应的动物实验模型。
1.实验动物的选择
可用作肿瘤模型的动物有很多，小鼠肿瘤模型作为其中一种常用模型主要因为有以下几个优点。（1）易获得，常用的肿瘤模型小鼠通常采用SPF级小鼠，SPF级小鼠一般医学院校及研究所都能买到。（2）生长周期短，一般小鼠肿瘤模型两周左右就能长大，能大大缩短实验周期。（3）易操作，小鼠的动物实验操作一般简便，因此可适当增加组内样本数量，使实验数据更具说服力。
2.理想的建立肿瘤模型应具备的条件
（1）肿瘤生长的过程应与人类肿瘤生长过程相似，做到尽可能复制出与人类肿瘤相同的模型。
（2）制作模型的方法简单易行。
（3）动物模型的重复性要好，要能满足实验的多次重复试验结果稳定性好。
（4）采用的建模方法对实验人员和环境无危害或危害较小。
3.肿瘤来源的选择
现在世界上保有近500种的动物移植瘤，但常用于筛药的不到40种，多数为小鼠肿瘤，其次是大鼠和仓鼠移植瘤，包括小鼠L1210淋巴白血病，P1534淋巴白血病，艾氏腹水瘤，Friehd病毒白血病，肉瘤180，白血病P388，Lewis肺癌，腺癌755，白血病615，Walker-256，吉田肉瘤，肉瘤45，Liol淋巴瘤，Dunning 白血病，Ｗagner癌肉瘤，白血病L5170Y，P1798淋巴肉瘤，LPC-1浆细胞瘤，淋巴瘤8，B16或Cloadman黑色素瘤，Ridaway骨肉瘤，Gardner淋巴肉瘤，肉瘤37，P315白血病，Mur hy-sturm淋巴肉瘤，Jensen肉瘤，Geurin氏癌，仓鼠十二指肠腺癌和人体肉瘤HSL第1代杂交鼠移植。它们对抗癌药作用的敏感性大致可分为敏感，中度敏感，低敏感和不敏感瘤株四类，同样敏感株对抗癌药的疗效水平也不相同。
建立BCR-ABL逆转录病毒介导的小鼠慢性粒细胞白血病模型的实验条件优化
・ ５２６・ 国际检验医学杂志２０１０年６月第３１卷第６期Ｉｎｔ Ｊ Ｌａｂ Ｍｅｄ，Ｊｕｎｅ ２０１０，Ｖｏ１．３１，Ｎｏ．６
建立ＢＣＲ—ＡＢＬ逆转录病毒介导的小鼠慢性
粒细胞白血病模型的实验条件优化 ・ｓ．－Ｅ著・
张文萍 ，韩红星 ，杨 燕 ，陈荣贵 ，单万水
（１．广东省深圳市第三人民医院检验科 ５１８０２０；２．广东省深圳市观澜人民医院检验科 ５１８１１０）
【摘要】 目的探讨构建ＢＣＲ ＡＢＩ 逆转录病毒介导的小鼠慢性粒细胞白血病模型最佳实验条件，以简化实验过程、节约成 本并提高建模成功率。方法 不同剂量５一氟脲嘧啶（５－ＦＵ）注射受体鼠后观察骨髓中原始细胞占有核细胞百分比；纤维连接蛋白
（ＦＮ）铺板后观察逆转录病毒感染效率的变化；分别用不同数量的骨髓细胞（Ｏ．２～０．６）×１０ 个进行移植后通过形态学观察和荧
光原位杂交技术（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）鉴定移植小鼠成模状况。结果 研究剂量范围内５－ＦＵ量不影响骨髓 原始细胞相对数量；纤维连接蛋白铺板后可使活细胞数量增加３ｏ ～５ｏ ，感染效率提高ｌＯ ～２ｏ ；移植０．５×１０ 个成功感
染了ＢＣＲ—ＡＢＩ 逆转录病毒的供体鼠骨髓细胞入受体小鼠即可成功建模。结论优化后的实验条件简化了程序，节约了成本，大
大提高了建模成功率，为相关研究提供了良好的实验参考。
【关键词】白血病，髓样，慢性； 纤连蛋白类； 原位杂交； 小鼠；模型，动物
中图分类号：Ｒ７３３．７２；Ｒ７３ ３５４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３—４１３０（２Ｏ１０）０６—０５２６—０３
Ｂｅｓｔ Ｍｏｔｈｅｄ ｏｆ Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＢＣＲ／ＡＢＬ ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｍｏｕｓｅ ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｍｏｄｅｌ
ＺＨＡＮＧ Ｗｅｎ—ｐｉｎｇ ，ＨＡＮ Ｈｏｎｇ—ｘｉｎｇ ，ＹＡＮＧ Ｙａｎ ，ｅｔ ａ１．
小鼠L1210白血病微小残留病模型化疗药物造模剂量的选择
１００２ 武警医学院学报 Ａｃｔａ Ａｃａｄｅｍｉａｅ Ｍｅｄｉｃｉｎａｅ ＣＰＡＦ 第１９卷第１２期２０１０年１２月 ｖｏ１．１９ Ｎｏ．１２ Ｄｅｃ．２０１０
小鼠Ｌ１ ２１ ０白血病微小残留病模型化疗药物造模剂量的选择
焦 丽 ，蔡学瑜 ，陈彩平。（１．武警陕西总队医院儿科，陕西西安７１００５４；２．福建漳浦县医院内科，福建漳
州３６３２００；３．第四军医大学西京医院儿科，陕西西安７ｌ００３２）
摘要：【目的】探讨构建小鼠Ｌ１２１０白血病微小残留病模型所需注射的化疗药物的剂量。【方法】将不同数量Ｌ１２１０白血病细 胞接种清洁级近交系ＤＢＭ２ｔ］￣鼠（ｎ＝１０），观察接种的白血病细胞数量与小鼠存活时间之间的关系；将一定数量的Ｌ１２１０白血 病细胞接种ＤＢＭ２小鼠（ｎ＝１０），接种后第３天静脉注射不同剂量的环磷酰胺（ｃＴＸ），观察药物注射剂量与小鼠存活时间之间 的关系；将接种Ｌ１２１０白血病细胞数量与ＤＢＡ小鼠存活时间关系图和ＣＴＸ注射剂量与白血病小鼠存活时间关系图相结合，确 定构建小鼠Ｌ１２１０白血病微小残留病模型所需注射的化疗药物的剂量。【结果】小鼠存活时间随接种细胞数量增加而缩短，接 种５００个白血病细胞小鼠的存活时间约为２８ ｄ；白血病小鼠存活时间随药物剂量增加而延长，存活时间约２８ ｄ时，需要静脉注 射ＣＴＸ １２５ ｍｇ＆ｇ。【结论】构建小鼠Ｌ１２１０白血病微小残留病模型，可于ＤＢＡ／２ｄｘ鼠接种Ｌ１２１０白血病细胞１ Ｘ １ ０６个，只后第３ 天，给予ＣＴＸ １２５ ｍｇ／ｋｇ静脉注射。
关键词：ＬＩ２１０细胞；ＤＢＭ２ｔ］￣鼠；微小残留病；环磷酰胺 【文章编号】１００８—５０４１（２０１０）１２—１００２—０３ 【中图分类号】Ｒ７２５ 【文献标识码】Ａ
Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｄｏｓｅ ｏｆ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｄｒｕｇｓ ｉｎ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｎｉｍａｌ ｒｅｓｉｄｕａｌ ｌｅｕｋｅｍｉａ
骨髓嵌合体小鼠实验原理
骨髓嵌合体小鼠实验原理
骨髓嵌合体小鼠实验是一种重要的实验手段，它可以用来研究人体免疫系统和肿瘤细胞之间的相互作用。其基本原理是将人类白血病细胞注射到小鼠内，使其形成人与小鼠骨髓嵌合体，从而研究肿瘤细胞在宿主体内的行为和免疫反应。
骨髓嵌合体小鼠实验的基本流程如下：
1.选择移植小鼠：通常使用NOD/SCID小鼠，这种小鼠具有先天性免疫功能严重缺陷，可以在体内容纳大量人类细胞而不会发生排斥反应。
2.收集人类白血病细胞：采用外科手术从患者骨髓中采集白血病细胞。
3.准备小鼠除去原有的骨髓细胞：使用较强的放射线或化疗药物来杀死小鼠原有的骨髓细胞，并预留空间让白血病细胞存活和繁殖。
4.将白血病细胞注射到小鼠体内：通过静脉注射或骨髓注射的方式将白血病细胞注射入小鼠体内。
5.观察移植小鼠并记录数据：观察移植小鼠的生理指标和肿瘤细胞繁殖情况，记录数据并分析结果。
骨髓嵌合体小鼠实验的优点：
1. 它可以用于研究肿瘤细胞的发展和治疗方法的探索。
2. 可以研究人类免疫系统和肿瘤细胞之间的相互作用。
3. 小鼠的容易操作和成本较低。
4. 可以利用此方法研究许多特定的疾病例如白血病、淋巴瘤等。
骨髓嵌合体小鼠实验的缺点：
1. 危险性较大，实验操作需要专业技术支持。
2. 由于其体内环境与人类体内环境存在差异，因此其结果可能不完全反映人体内的情况。
3. 对小鼠造成短时间甚至永久性的伤害，导致其成活率降低。
虽然骨髓嵌合体小鼠实验存在一些缺点，但在现代医学研究领域中，这种实验技术被广泛应用，它提供了一种研究人体免疫系统和疾病的反应和治疗方法的重要工具。 骨髓嵌合体小鼠实验对于深入研究人类免疫系统和疾病的发生机理、治疗方法的探索等方面具有重要意义。在研究白血病的治疗方法时，可以利用骨髓嵌合体小鼠模型，评估不同治疗方法的疗效和安全性，并找到最适合的治疗方案。
小鼠肿瘤模型 (1)
肿瘤模型我们一般常用的就是小鼠模型和人肿瘤裸小鼠移植瘤模型。其中用得最多的是皮下模型，另外还有腹水（或者尾静脉注射）以及原位模型，其他的模型很少用，就不提他们了。
小鼠模型分三大类：第一类是以S180、EAC、H22等为代表的，他们的宿主小鼠多选用KM，可产生腹水，也可在皮下成瘤。多以腹水传代，实验时抽取腹水，经过一定稀释后皮下接种构建模型，接踵后第二天开始给药，给药7到10天，接种10天后结束试验，剥取肿瘤称瘤重。
1. 关于构建瘤种
可以用体外细胞株培养后，用PBS悬浮至1~3×106/mouse，接种即可，最好用6号左右的针头，就是常用的2ml一次性注射的针头。
2. 关于腹水传代
观察到第一代的种鼠肚子较大后（一般约8~9天左右），可以传代，传代时取1ml注射器，用2ml注射器的针头，种鼠腹部消毒后直接将针头插入抽取腹水即可，注意不要把针头插得很深，尽量浅一点，还可以把老鼠拎起来，利用重力，让腹水集中在某处便于抽取，一般抽个就可以了，不用离心，直接用PBS3~6倍稀释后，接种到新的老鼠腹腔，腹水颜色为白色或者略有发黄都是正常的，但是血性腹水说明不好，需要注意调整，第二代以后，尽量6~7天的时候传代，不要等的时间太久，否则腹水容易血性。三代后可用于试验。
3. 关于接种进行试验
这个时候抽取的腹水需要量比较多，一般需要处死种鼠后，小心地用消毒眼科剪刀镊子剥开腹部皮肤，注意不要弄破肌肉，然后，用镊子（最好是哪种前面有倒勾的镊子，学名好像是唇型镊）拎起腹部的肌肉，用剪刀剪开一个小口，然后用玻璃滴管或者去掉针头的注射器吸取腹水。然后进过一定的稀释后，接种到小鼠的腋下。关于稀释量，各个实验室的情况都不一样，最好摸索一下，开始的时候可以适当的计数，但是要用台盼兰染色后计活细胞数。接种部位在小鼠腋下，但是不要深入到腋窝里面，会给以后的操作带来麻烦。接种时的进针处离接种处远一点，让针头在皮下多走一段，不容易污染。有的人接种的时候喜欢针头向上用力，紧贴着表皮往里走，然后注射的时候感觉阻力较大，打出来的皮丘又紧又圆，这样的接种，会使肿瘤与皮肤严重粘连，不利于最后肿瘤的剥取。也不要紧靠肌肉，肿瘤会与肌肉严重粘连。应该在两者之间，进针的感觉轻松自如，针头很自由，虽然打出来的肿瘤不会很圆很漂亮，但是相对好剥取一些。
131I标记GM—CSF治疗急性髓系白血病SCID小鼠模型的实验研究
２００７年１月第２８卷第ｌ期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ，Ｊａｎｕａｒｙ ２００７，Ｖｏｌ ２８，Ｎｏ．Ｉ
１３１ Ｔ １ 标记ＧＭ—ＣＳＦ治疗急性髓系白血病
ＳＣＩＤ小鼠模型的实验研究
邓扬嘉娄世峰徐诣芝
【摘要】 目的观察”‘Ｉ标记粒．巨噬细胞集落刺激因子（”‘Ｉ・ＧＭ・ＣＳＦ）对急性髓系白血病小鼠
模型的治疗作用，并探讨其剂量与疗效的关系。方法用重症联合免疫缺陷小鼠（ＳＣＩＤ）建立ＨＬ－６０
细胞白血病动物模型，用氯胺－Ｔ法制备 ‘Ｉ－ＧＭ・ＣＳＦ。ＳＣＩＤ白血病小鼠随机分为６组，Ｉ、Ⅱ、Ⅲ治疗
组分别经尾静脉注射９．２５×１０ ，２２．２０×１０ ，３７．００×１０ Ｂｑ的” Ｉ－ＧＭ—ＣＳＦ，ＩＶ、Ｖ两对照组分别给予
未标记的” Ｉ及” Ｉ、ＧＭ—ＣＳＦ混合物，Ⅵ为空白对照组。给药后监测外周血和骨髓ＨＬ－６０细胞及外周
血白细胞、红细胞、血小板变化，观察生存时间。结果治疗组外周血和骨髓ＨＬ－６０细胞、外周血白细
胞计数较对照组明显降低，以Ⅱ、Ⅲ组降低明显；治疗后２周Ⅱ、Ⅲ组血小板显著上升［分别为
（９ｏ１．ｏｏ±１０２．７７）×１０ ／Ｌ，（４９４．６３ ４－１３０．３８）×１０ ／Ｌ］，与对照组【Ｖ组（１０９．Ｏ０±１９，６１）×１０ ／Ｌ，
Ⅵ组（１０６．４４ ４－１６．３４）×ｌ０９／Ｌ］相比，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）；小鼠最长生存时间为６０ ｄ，治疗
组生存时间较对照组明显延长（Ｐ＜０．０１）。结论 Ｉ－ＧＭ—ＣＳＦ可提高ＳＣＩＤ小鼠存活率；低、中剂量
的” Ｉ－ＧＭ—ＣＳＦ与疗效之间可能存在剂量依赖关系；”‘Ｉ－ＧＭ．ＣＳＦ可用于放射免疫治疗。
【关键词】 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子；碘放射性同位素； 白血病； 小鼠，ＳＣＩＤ；ＨＬ－６０
细胞；放射免疫疗法
Ｅｘｌｍｒｉｍｅｎｔｕｌ ｓｔｕｄｙ ｏｆ” Ｉ－ｌａｂｅｌｅｄ ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｏｌｏｎｙ・ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ＳＣＩＤ ｍｏｕｓｅ－
白血病MIC分型法鉴定SCID-人白血病模型
江西医学院学报２００７年第４７卷第３期 ＡｃｔａＡｃａｄｅｍｉａｅ Ｍｅｄｉｃｉｎａｅ ｄｉａｎｇｘｉ ２００７。Ｖｏｌ ４７，Ｎｏ３
白血病ＭＩＣ分型法鉴定ＳＣＩＤ一人白血病模型
舒琦，徐诣芝 （重庆市第三人民医院血液肿瘤科，重庆４０００１４） ・ ５ ・
摘要：目的运用白血病ＭＩＣ分型法鉴定ＳＣＩＤ－人白血病模型，探求ＳＣＩＤ－人白血病模型建立的适宜条件。方法 ①按接种方式和鼠龄的不同将ＳＣＩＤ小鼠平均分为４组。Ｉ、ＩＩ组鼠龄小于５周，ＩＩＩ、ＩＶ组鼠龄大于５周。分别以 静脉接种、腹腔接种（６～１０）×１０ ＨＬ一６０细胞／鼠建立ＳＣＩＤ－人白血病模型。不能发生白血病者用予 。Ｃ０外照射 后再接种。②运用白血病ＭＩＣ分型法鉴定ＳＣＩＤ－人白血病模型：形态学检查包括外周血、腹水涂片的细胞学检查 和组织的病理学检查；免疫学检查采用流式细胞分析组织中ＣＤ３３阳性率；分子遗传学检查骨髓细胞染色体。结果 ①鼠龄小于５周的Ｉ、ＩＩ组的ＳＣＩＤ小鼠接种ＨＬ一６０细胞后４周，外周血白细胞上升至（１０．土２．２）×１０。／Ｌ；２周 时小鼠外周血中开始出现ＨＬ一６０细胞，４周时比例达到（８．７土３．０） ，全部发生白血病。而鼠龄大于５周的ＩＩＩ、 Ｉｖ组小鼠小部分发病，未发病者予 。Ｃｏ ２００ ｃＧｙ／鼠，再接种２×１０ ＨＬ一６０细胞／鼠，也能全部发病。②腹腔接种者 实体瘤的发生更为多见，大量腹水，恶病质明显；病理学检查和免疫学检查发现静脉接种者表现为脏器浸润较腹腔 接种： 广泛、明显，其全身弥漫性扩散的特点与人白血病的临床特点较为一致。③ＩＩＩ组小鼠经照射后再接种后发
生的白血病在全身的广泛浸润程度较同样静脉接种的Ｉ组更为明显。④鼠龄小于５周的静脉接种组（Ｉ组）中一发 病小鼠给予某不过血脑屏障的药物治疗后，发生了中枢白血病。结论 在适当控制ＳＣＩＤ小鼠剩余的免疫防御系 统后．．采用静脉接种，数量为（６～１０）＞之１０。／鼠，能发生全身弥漫性扩散性白血病，且还能模拟出化疗后庇护所白血 病的：发生。ＳＣＩＤ－人白血病模型是一个体内研究人类白血病治疗良好的模型。
不同接种方法建立小鼠L1210白血病模型的比较研究
１１２ 实验动物与比较医学Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｊｕｎ．２００７，２７（２）
不同接种方法建立小鼠Ｌ１ ２１ ０
白血病模型的比较研究
何宏星－，吴正财ｔ，张望平 ，陈彩平
（福建医科大学１．实验动物中心，２．协和医院，福州３５０００４）
【摘要】目的探讨不同接种方式制备的小鼠白血病模型的生物学特性。方法常规培养小鼠急性
淋巴细胞白血病细胞系Ｌ１２１０，调整浓度至１×１Ｏ，个／ｍｌ，每只ＤＢＡ／２小鼠注射细胞悬液Ｏ．１ ｒｎｌ，
分别给以静脉、皮下及腹腔注射。观察小鼠成瘤情况，定期计数各组小鼠外周白细胞数量及观察 细胞形态改变，取濒死小鼠的肝、脾、肺、肾等脏器称重并制作病理切片。结果各组小鼠成瘤
率均为１００％，成瘤天数分别为：１４、７和１４ ｄ；平均存活天数分别为：２４．４±３．０５，２４．８±１．７９，１８、８± １．７９ ｄ。接种后２周外周血白细胞数目分别增加至１８．４５±１．８４、２２．０±４．１１、２８．４８±６．７４×１０札，
接种后３周外周血白细胞数目分别增加至２２．３１±１２．０８×１０礼（Ａ组）和６８．１８±２．８２×１０９／Ｌ（Ｂ 组）；外周血涂片中均可见白血病细胞；各组濒死小鼠肝、脾有弥漫性白血病细胞浸润，主要为幼
稚淋巴细胞，正常组织结构破坏，肺和肾内有少量白血病细胞浸润，正常组织结构破坏不明显，
肺脏有明显出血。结论静脉、皮下、腹腔注射体外培养的Ｌ１２１０细胞于ＤＢＡ／２小鼠构建肿瘤动
物模型的方法均是可行的方式，各种方法有不同的生物学特性和优缺点，可根据研究目的的不同，
选用不同的接种方式。 【关键词】白血病细胞；成瘤性；动物模型；接种方式
【中图分类号］Ｑ９５—３３ 【文献标识码］Ａ 【文章编号］１００４—８４４８（２００７）０２—０１ １２—０４
利用小鼠急性淋巴细胞白血病细胞系Ｌ１２１０￣ＩＩ
近交系ＤＢＡｄｘ鼠建立的Ｌ１２１０白血病模型是进行化 疗药物筛选、药物的疗效分析、药代动力学分析 的理想的动物模型。美国国家癌症研究所１９５５年
Fr. MuLV小鼠红白血病模型的建立及叠氮胸苷抗病毒作用的研究
中国药理学通报Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ２００８ Ｎｏｖ；２４（１１）：１４８９－９１ ’１４８９・
Ｆｒ．ＭｕＬＶ小鼠红白血病模型的建立
及叠氮胸苷抗病毒作用的研究
姜晶 ，崔晓兰 ，时宇静 ，宋美艳 ，高英杰 ，王意忠
（１．北京大学航天临床医学院，北京１０００４９；２．中国中医科学院中药所药理室，北京１００７００）
中国图书分类号：Ｒ一３３２；Ｒ ３２９．２４；Ｒ ３６３—３３２；Ｒ ３７３．９； Ｒ ３９４．２：Ｒ ７３３．７３０．２２；Ｒ ７３３．７３０．５；Ｒ ９７８．７ 文献标识码：Ａ文章编号：１００１—１９７８（２００８）１１—１４８９—０３ 摘要：目的应用Ｆｒｉｅｎｄ鼠白血病病毒（Ｆｒｉｅｎｄ ｍｕｒｉｎｅ ｌｅｕｋｅ— ｍｉａ ｖｉｒｕｓ．Ｆｒ．ＭｕＬＶ）建立小鼠红白血病模型，并在此模型上 观察抗逆转录病毒药物叠氮胸苷（Ｚｉｄｏｖｕｄｉｎｅ，ＡＺＴ）的治疗 作用。方法用Ｆｒ．ＭｕＬＶ感染ＢＡＬＢ／ｅ小鼠。以ＲＴ—ＰＣＲ 法测定脾脏病毒载量；血常规分析白细胞（ＷＢＣ）、血红蛋白 （Ｈｂｇ）及血小板（ＰＬＴ）变化；镜检计数外周血及骨髓有核细 胞。结果与正常对照组相比，模型组小鼠脾脏病毒载量、 ＷＢＣ和Ｈｂｇ明显升高；外周血及骨髓中红系和非红系均出 现大量原始和幼稚细胞，骨髓中非红系原始细胞（ＮＥＣ）计数 ≥０．３０，有核红细胞≥０．５０；ＡＺＴ治疗组上述指标明显改 善。结论用Ｆｒ．ＭｕＬＶ感染ＢＡＬＢ／ｃ小鼠成功建立小鼠红 白血病模型，ＡＺＴ在此模型上显示出良好的抗病毒作用。
关键词：Ｆｒｉｅｎｄ鼠白血病病毒；红白血病；逆转录病毒；叠氮 胸苷
目前认为白血病的发生除与遗传和环境等因素 有关外，还与病毒感染密切相关。例如逆转录病毒
科中成人Ｔ淋巴细胞白血病病毒（ｈｕｍａｎ Ｔ—ｃｅｌｌ ｌｅｕ．
ｋｅｍｉａ ｖｉｒｕｓ，ＨＴＬＶ）可引起人类Ｔ淋巴细胞白血 病…。为了进一步研究病毒感染与白血病的关系，