小鼠胚胎成纤维细胞制备
小鼠胚胎成纤维细胞制备
一． 取得小鼠胚胎
1. 性成熟母小鼠与种公鼠按1公（♂）:2母（♀）比例合笼。
2. 每天早上观察母小鼠阴道口。有乳白色或蛋黄色冻胶状物(阴道栓)即确定为怀孕。见栓当天上午定为怀孕的0.5d。
3. 取怀孕12.5～14.5d母鼠,断颈处死，无菌条件下暴露子宫。
4. 用镊子提起近子宫颈端,分离子宫系膜,剪断子宫角。
5. 取出整个子宫,置于有PBS的平皿内。用PBS洗涤三次,弃除表面残余血迹。
6. 沿子宫系膜侧剪开子宫,取出带有胎膜的胚胎,置于另一盛有PBS的平皿内,充分洗涤,弃除表面红细胞。
7. 用小镊子撕破胎膜,取出胎鼠,弃除胎膜,用PBS洗涤三次。
8. 去除胚胎头部、内脏和四肢，将躯干部置于另一盛有PBS的平皿内,用PBS至少洗涤三次,充分弃除红细胞。
二． 取得小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）
1. 用无菌眼科小剪刀或刮胡刀片将鼠胚躯干剪(切)成1mm3以下的碎块, 吸置于离心管内。
2. 加适量胰酶，将离心管置于培养箱中10-20分钟
3. 取出离心管，反复吹打，加足量培养液终止消化
4. 离心1000转，5分钟
5. 弃掉上清，加适量培养液，反复吹打20次
6. 分装到T75中，一般每2个胚胎可以制成一个T75的原代细胞
7. 置37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱培养
8. 待细胞长3-7天细胞互相重叠爬满整个培养瓶底时即可1：3-1：6传代
9. 吸弃培养液上清
10. PBS（不含钙镁）冲洗两次
11. 加0.25%胰酶-0.02EDT消化 12. 在显微镜下观察，当少量细胞漂浮，贴壁的细胞层出现裂隙时，用移液管吹打冲洗瓶底5-6次
13. 即刻加MEF培养液终止消化
14. 1000转，5分钟离心。吸弃上清
15. 加足培养液，吹打制成单细胞悬液，分装到各T75中。完成传代
16. 原代细胞中还有少量组织块未被充分消化，在以后的每次传代过程中要尽量制成单细胞悬液，组织块会逐渐消失
17. 原代细胞中混有一些杂细胞，一般传到第3代时,杂细胞逐渐减少。小鼠胚胎成纤维细胞为梭状；但连成片时,细胞互相交联，形态不典型。
三．MEF的冻存
1. 当细胞 90%-100% 融合时,尤其细胞少量堆聚可冷冻。
2. 处理方法同二的9－14，每75 cm2 的细胞 加3ml 冻存液重悬细胞。
3. 每个冻存管编号加1ml细胞悬液。
4. 置入程序降温盒-800C过夜，放入液氮长期保存。
四．灭活MEF制备饲养层细胞
1. 取新的培养瓶，加0.1％Gelatin溶液覆盖预处理30分钟，用前吸掉Gelatin溶液。
2. 取需要处理的MEF细胞，以10ug/ml浓度加丝裂霉素（Mitomycin C）混匀。
3. 置培养箱中3小时。
4. 吸弃废液。
5. 用DPBS洗5遍。
6. 处理方法同二11－14。
7. 处理过的MEF加适量培养液重悬计数，以3.0×104/ cm2（MEF）铺在Gelatin处理过的培养瓶上
8. 置培养箱中静置过夜，使其贴壁
9. 铺好的饲养层在1-7天内有效，都可以支持mES生长并维持其全能性
小鼠胰腺干细胞饲养层条件下的连续传代培养
－６＿． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇｕａｎｇｘｉ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ２００８，Ｖｏ１．１１ Ｎｏ．１
小鼠胰腺干细胞饲养层条件下的连续传代培养
岑妍慧
（广西中医学院，广西南宁 ５３０００１）
关键词：胰腺干细胞；胚胎成纤维细胞；饲养层；连续传代
中图分类号＂Ｒ３９４．２文献标识码：Ａ文章编号：１００８—７４８６｛２００８）０１—０００６—０３
自１９８１年Ｅｖａｎｓ等【１ Ｊ和Ｍａｒｔｉｎ【 Ｊ利用胚胎成纤维细胞
饲养层的培养体系，首先成功建立小鼠胚胎干细胞系后，胚
胎成纤维细胞饲养层广泛应用于胚胎干细胞的克隆化培养
研究，本研究使用经丝裂霉素Ｃ作用的小鼠胚胎成纤维细胞
作为饲养层，观察在饲养层条件下胰腺干细胞体外连续传代
的生长状况，希望建立一种体外获得单一性和富集度均较高
的胰腺干细胞的技术和方法。
ｌ材料与方法
１．１材料
１．１．１试验动物 ）Ｆ级的新生昆明小鼠（雌雄均可），购 自广西中医学院实验动物中心，合格证号为：桂医动字第
１１００４号。
１．１．２主要试剂Ｄ氏改良Ｅａｇｌｅ培养基（ｄｕｌｂｅｅｅｏ’ｓ ｍｏｄｉ—
ｆｌｅｄ ｅａｇｌｅ ｍｅｄｉｕｍ，ＤＭＥＭ）、巢蛋白Ｎｅｓｔｉｎ、胰十二指肠同源
盒基因一１（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ａｎｄ ｄｕｏｄｅｎａｌ ｈｏｍｅｏｂｏｘ一１，ＰＤＸ一１）和碱
性磷酸酶（ａｌｋａｋｉ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ， （Ｐ）均购自美国Ｈｙｃｌｏｎｅ公
司。碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，
ｂＦＧＦ）和角质细胞生长因子（ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，
ＥＧＦ）购自美国ｓｉｇｍａ公司。 １．２研究方法
１．２．１胰腺干细胞的分离培养取ＳＰＦ级新生昆明小鼠的
胰腺，用眼科弯剪将胰腺组织剪成约１舢 大小的组织块，
按ｌｍｌ／ｇ胰腺组织（湿重）的比例，加入浓度为ｌｍｇ／ｍｌ的Ｖ
家畜繁殖新技术
家畜繁殖新技术
繁殖新技术产生的源由：动物繁殖学为动物科学的专业基础课程
动物繁殖学三大组成部分
繁殖生理：生殖激素 生殖生理 配种 受精 妊娠 分娩
繁殖技术：人工授精 同期发情 胚胎移植 体外受精等
繁殖疾病：不育 不孕 生殖障碍
影响繁殖技术发展的因素
繁殖学是整个畜牧学科应用技术与理论研究发展最快的一门学科，繁殖技术又是现代生物工程技术(Biotechnology)的基础。前者体现在生殖内分泌的研究进展—下丘脑对生殖的调控作用，后者突出表现在核移植技术的成功
六次革命人类作出了三大创举：曼哈顿计划 阿波罗登月计划 人类基因组计划
生物工程技术的概念：利用生物体系应用先进的生物学和工程技术加工或不加工底物原料以提供所需的各种产品或达到某种目的的一门新型的生物科学技术。
生物工程技术的作用：可大大提高动物的繁殖效率 提高生长速度降低生产成本 可改变畜产品的结构 可培育人们需要的新的动物品种 可用动物代替生物反应器
繁殖新技术的内容——生物工程技术在家畜繁殖上的应用
基因重组利用技术 —— 转基因
细胞融合利用技术 —— 嵌合体
胚胎与核移植技术 —— 核移植
组织培养利用技术 —— 体外受精
细胞大量培养技术 —— 胚胎干细胞
生物反应堆与酶技术 —— 酶工程
胚胎分割的生理基础：胚胎发育早期的卵裂球具全能性即发育成一完整个体的能力
胚胎分割的意义在于：可使可用胚胎数成倍生长、可获得遗传上几乎完全相同的后代、
可作为生物学研究模型
胚胎分割的方法归纳为四种：
1、Willadsen的分割法
程序： 分割——移入空透明带——双层琼脂包埋——中间受体——同种受体
2、Williams的分割法
程序： 分割——移入空透明带——同种受体
3、玲木分割法
程序： 透明带内分割——注入大分子物质溶液——同种移植
人类小鼠原代肺成纤维细胞分离方法
⼈类⼩⿏原代肺成纤维细胞分离⽅法
Primary human/mouse lung fibroblast isolation
⼈类/⼩⿏原代肺成纤维细胞分离⽅法
参考⽂献(H: 1.Katharina Heinzelmann et al. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2018; 2. Claudia A Staab-Weijnitz et al. AmJ Respir Crit Care Med. 2015. FK506-Binding Protein 10, a Potential Novel Drug Target for Idiopathic Pulmonary Fibrosis; M:Isolation and characterization of mouse fibroblasts, Benjamin L. Edelman and Elizabeth F. Redente)
Materials:
材料：1. Digestion solution: a).Liberase TM (5401119001, Merck) solution,
2.5mg/ml (HBSS);
b).DNAse (D4263-5VL, Sigma), 2000U/ml(PBS)
消化液：a) Liberase TM 溶液（5401119001, Merck）：溶于HBSS（终浓度2.5mg/ml）b) DNAse溶液（D4263-5VL, Sigma）：溶于PBS（终浓度2000U/ml）
2. Nylon filters 40/70 µm
3. Complete medium (Mouse: DMEM/F12 + 20% FBS + 1% Penicillin/Streptomycin + 0.1% Amphotericin B + 1% Glu;Human: DMEM/F12 + 20% FBS + 1%
高中生物第章细胞工程.1动物细胞培养学案选择性3
22.13
- 1 - 动物细胞培养
必备知识·素养奠基
一、动物细胞培养概念
从动物体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。
二、动物细胞培养的条件
1。营养条件:
(1)合成培养基：将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成。
（2)天然成分：血清等.
（3）一般使用液体培养基,即培养液。
2。无菌、无毒的环境：
(1）培养液和培养用具灭菌处理。
(2）无菌环境下操作.
（3）培养液定期更换的目的：清除代谢物,防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。
3。温度、pH和渗透压:
(1)适宜的温度：哺乳动物多以36。5±0。5 ℃为宜。
(2）适宜的pH:多数细胞生存的适宜pH为7.2～7.4。 22.13
- 2 - (3)适宜的渗透压。
动物细胞培养能否体现动物体细胞的全能性？说明你的理由。
提示:不能。动物细胞培养只是细胞的增殖，没有体现细胞的全能性。
4.气体环境：95％空气和5%CO2。
（1)O2作用：细胞代谢所必需的。
(2）CO2的主要作用：维持培养液的pH。
三、动物细胞培养的过程
填一填：基于动物细胞培养的过程，完成下面的问题:
（1)过程①处理方法有:机械法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理的方法.
(2）过程②为原代培养,培养的动物细胞有两类:
①悬浮在培养液中生长增殖;
②贴附于某些基质表面生长增殖。 22.13
- 3 - (3）进行过程③时,悬浮培养的细胞直接用离心法收集;贴壁细胞需要使用胰蛋白酶等处理，然后用离心法收集.
（4)过程③为传代培养，进行过程③的原因主要有:细胞密度过大、有害代谢物积累、营养物质缺乏和接触抑制等。
四、干细胞培养及其应用
1。干细胞分布：早期胚胎、骨髓和脐带等。
2.种类：胚胎干细胞和成体干细胞。
3.判一判：基于干细胞的类型和应用,判断下列说法的正误。
(1)胚胎干细胞和成体干细胞都具有形成机体的所有组织和器官,甚至个体的潜能. (×)
小鼠胚胎神经干细胞的分离及贴壁培养方法
小鼠胚胎神经干细胞的分离及贴壁培养方法
杨骐昌;宋晓峰;韩平
【摘 要】Objective To develop a modified method of adherent culturing
NSCs to replace the traditional suspension culturing method.Methods
Neural stem cells(NSCs)were isolated from brain of fetal mouse at 15.5-day
fetal age.In culture bottle which had been pre-coated with poly-L-ornithine
hydrochloride/fibronectin(PO/FN),the cells were adherently cultured and
passaged.The cell morphology was observed under inverted
microscope.NSCs and their differentiated cells were identified by
immunofluorescence.Results NSCs obtained in this study were successfully
adherently cultured and expressed specific markers.Conclusion NSCs are
successfully adherently cultured in this study.As compared with the
traditional suspension culturing method,adherent culturing is simpler and
has lower wastage of passage.It is easy to observe cell morphology and
新生小鼠皮肤成纤维细胞的分离培养与鉴定
２０１１年１Ｏ月第８卷第２９期 ・专家论坛・
新生小鼠皮肤成纤维细胞的分离培养与鉴定
胡素贤 ，倪晓妍 ，王嘉逊 ，高丰光
１．厦门大学附属第一医院呼吸内科，福建厦门 ３６１００３；２．厦门大学医学院基础医学部免疫学实验室，福建厦门３６１００５
【摘要】目的：建立一种简单易行的自新生小鼠皮肤分离培养成纤维细胞的方法，并对分离细胞进行鉴定。方法：无菌
取新生Ｂａｌｂ／ｃ小鼠背部皮肤，剪碎呈１ ｍｍ 大小，组织块均匀放置于培养皿并以ＤＭＥＭ（含１０％胎牛血清）培养基对
组织块进行培养；以胰蛋白酶消化分离细胞一重新贴壁法对分离培养细胞进行纯化；以ＮＩＨ３Ｔ３细胞为对照，免疫荧
光、流式细胞术、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测波形蛋白表达情况以对培养的成纤维细胞进行鉴定。结果：新生小鼠背部皮肤组
织培养３ ｄ时可见细胞呈细长梭形或呈多角形，组织培养５ ｄ后可见大量细胞自组织块游离生长．组织培养７ ｄ后
可见细胞呈单层漩涡状排列或纵横交错。贴壁细胞团呈放射状生长。免疫荧光、流式细胞术、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测发现
分离细胞和ＮＩＨ３Ｔ３细胞均表达波形蛋白：流式细胞术证实分离的成纤维细胞波形蛋白表达阳性率和平均荧光密
度分别为１３．３３％和９．８９，而ＮＩＨ３Ｔ３细胞波形蛋白阳性率和平均荧光密度分别为２８．１１％和１４．１６。结论：分离培养
的细胞具有成纤维细胞的形态学特征，并表达成纤维细胞的特征分子波形蛋白。以组织块直接培养法成功自新生小
鼠皮肤分离培养成纤维细胞，为建立肿瘤体外模拟微环境提供实验材料和研究基础。
【关键词１新生小鼠；成纤维细胞；体外培养；波形蛋白
【中图分类号１ Ｒ３９２．１ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１６７３—７２１０（２０１１）１０（ｂ）一００５—０４
Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｎｅｗｂｏｒｎ ｍｉｃｅ ｓｋｉｎ
关于诱导性多能干细胞
诱导性多能干细胞
【关键词】 干细胞; 细胞分化; 转录因子
诱导性多能干细胞（induced pluripotent stem cells, iPS）是通过基因转染技术(gene
transfection)将某些转录因子导入动物或人的体细胞, 使体细胞直接重构成为胚胎干细胞（embryonic stem cell, ES）细胞样的多潜能细胞。iPS细胞不仅在细胞形态、 生长特性、
干细胞标志物表达等方面与ES细胞非常相似, 而且在DNA甲基化方式、 基因表达谱、 染色质状态、 形成嵌合体动物等方面也与ES细胞几乎完全相同。iPS细胞的研究受到人们广泛的关注, 是目前细胞生物学和分子生物学领域的研究热点。iPS细胞技术诞生还不到2年, 却为干细胞的基础研究和临床疾病治疗研究带来了前所未有的希望, iPS细胞技术的出现使人们从ES细胞和治疗性克隆等激烈的伦理学争论中解脱出来。但是, 目前制备iPS细胞的方法在安全性方面还存在一定问题, 因此探索一种高效、 安全的iPS细胞的制备方法显得十分必要。
1 iPS细胞的制备方法
2006年Takahashi等［1］研究小组利用分别携带Oct4、 Sox2、 Myc和Klf4转录因子的4种逆转录病毒载体感染小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts, MEFs),
经过G418药物筛选成功获得第1批iPS细胞。但是这批iPS细胞系中DNA甲基化的方式与自然存在的ES细胞不同, 而且这批iPS细胞不能形成畸胎瘤。Okita等［2］研究小组报道了第2批iPS细胞的产生。他们采用与制备首批iPS细胞相同的方法, 但是采用了不同的筛选基因。第2批iPS细胞系DNA甲基化的方式与自然存在的ES细胞的甲基化方式相同, 并且能形成畸胎瘤。2007年末, Takahashi和Yu等［3, 4］两研究小组分别在细胞和科学杂志上报道关于iPS研究里程碑的实验结果, 他们都成功获得了人的iPS细胞系。Yamanaka采用与诱导小鼠iPS相同的方法, 成功将人成纤维细胞诱导成多干细胞。Thomson研究小组采用与Yamanaka不同的方法, 他们利用慢病毒载体运输Oct4、 Sox2、 Nanog和Lin28转录因子转染IMR90胚胎成纤维细胞, 并且成功地获得了人iPS细胞。2008年1月Nakagawa等［5］研究小组报道他们可以利用Oct4、 Sox2和Klf4 3种转录因子将小鼠和人的成纤维细胞成功诱导出iPS细胞。Aoi等［6］研究小组将小鼠肝细胞和胃上皮细胞成功诱导为iPS。Stadtfeld等［7］实验小组利用Oct4、 Sox2、 cmyc和Klf4 4种转录因子将胰岛 细胞诱导为iPS细胞。
不同分离方法对鼠胚胎成纤维细胞生长影响的比较
维普资讯 课题背景：课题
为２００３年辽宁
省自然科学基金
项目．由秦书俭
教授、梅晰凡博
士和郑德宇博士
共同主持．目前
课题已经基本完
成。课题组建立
大鼠脊髓半切模
型的制备．成功
培养出胚胎大鼠
神经干细胞，并
在动物实验中获
得成功：现在于
小鼠胚胎千细胞
领域取得突破，
已经获得多个单
克隆小鼠胚胎干
细胞株，正在进
行鉴定和建系工
作。课题完成单
位辽宁医学院解
剖实验室是辽宁
省重点实验室，
参照国际实验室
设计修建．拥有
全套的细胞培养
仪器 ＩＳＳＮ １６７３－８２２５ ＣＮ ２１－１５３９／Ｒ
张海锋，等．不同分离方法对鼠胚胎成纤维细胞生长影响的比较¨ ２ 。 ！
５４．１２％，单细胞悬液法、组织块培养法细胞增殖指数分别为５３．５２％和５３．１５％，３种方法差异无显著性意义（尸 ０．０５），表明
其细胞周期基本相同。
结论：滤网过滤改良法可以在较短时问内培养出优质高采的鼠胚胎成纤维细胞。
关键词：成纤维细胞；胚胎；细胞分离；细胞培养技术
张海锋，单伟，秦书俭．不同分离方法对鼠胚眙成纤维细胞生长影响的比较【Ｊ】．中国组织工程研究与临床康复，２００７，１１（１１）：２００１—２００４
［ｗｗｗｚｇｌｃｋｆｃｏｍｌｚｇｌｃｋｆｌｅｊｏｕｒｎａｌｌｕｐｆｉｌｅｓｌ０７－１１『１ｌｋ－２００１（ｐｓ）．ｐｄｔｌ
０ 引言
胚胎干细胞是从早期胚胎内细胞团或原
始生殖细胞分离出来的、能在体外长久培养
的、具有多方向分化潜能和种系嵌合能力的细
胞系。１９８１年，Ｅｖａｎｓ等【’】和Ｍａｒｔｉｎ［ 】分别从
小鼠囊胚内细胞团和鼠胚中分离出小鼠胚胎
干细胞，胚胎干细胞已成为当今生物学最热门
和最为前沿的研究课题之一。
饲养层细胞对于胚胎干细胞的增殖与维
持未分化状态具有重要作用【３１，尽管某些分化
抑制因子，如白血病抑制因子等也可以保持
胚胎干细胞的未分化状态【 ，但多数研究表
小管形成实验的原理和目的及操作流程
小管形成实验的原理和目的及操作流程
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一、实验原理
小管形成实验主要是通过观察小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）与人类诱导多能干细胞（iPSC）的相互作用，从而验证诱导多能干细胞的能力。在实验中，将iPSC和MEF混合后培养在培养皿中，观察其形成小管的情况，通过观察小管的形成情况来验证iPSC的多能性。小管形成实验是生物医学研究中的重要手段，能够验证细胞的再生能力和多能性，对于研究干细胞、组织再生等方面具有重要意义。
小分子化合物组合将人胚胎成纤维细胞体外编程为神经前体细胞
细胞替代疗法已成为治疗神经性疾病一项非常有前途的措施，研究表明，神经细胞移植能有效治疗神经退行性病变［1-3］。成纤维细胞是一种易获得、耐受性好，便于细胞重编程潜在的初始细胞［4］。利用特定的因子将体细胞诱导产生神经前体（ciNPCs）或神经干细胞（NSCs）为神经退行性疾病如帕金森病（PD）、亨廷顿病（HD）、阿尔兹海默症（AD）的细胞治疗提供了新的途径［5］。有研究证实，利用过表达神经谱系特异性转录因子或采用细胞重编程转录因子，与小分子化合物相结合，可以直接将体细胞重编程为神经元或化学诱导的多能干细胞样细胞（ciPSLC）［6,7］。但由于外源性基因引入和病毒转染存在一定的安全性问题，限制了它们在细胞治疗中的应用。而小分子化合物具有安全性高、易获得、易操作与高细胞渗透性等优势，在不引入任何外源因子的情况下，通过化学介导实现细胞重编程已得到广泛关注［8,9］。小分子化合物组合将人胚胎成纤维细胞体外编程为神经前体细胞
杨盼1，王圆圆1，高群伟1，刘阳1，王翼1，郭俣2，刘长青1，刘高峰1蚌埠医学院1生命科学学院，2检验医学院，安徽蚌埠233000
ChemicalreprogrammingofhumanembryonicfibroblastsintoneuralprogenitorcellsinvitroYANGPan1,WANGYuanyuan1,GAO
Qunwei1,LIUYang1,WANGYi1,GUOYu2,LIUChangqing1,LIUGaofeng1BengbuMedicalCollege1SchoolofLifeSciences,2SchoolofLaboratoryMedicine,Bengbu233000,China摘要：目的通过小分子化合物组合将人胚胎成纤维细胞（HEFs）重编程为化学诱导神经前体细胞（ciNPCs）。方法HEFs重编程为ciNPCs涉及两个阶段，第1阶段是小分子组合诱导阶段，常氧条件下，将HEFs在含有小分子化合物组合VCR（VPA，CHIR99021，Repsox）的KSR培养基中培养15d，HEFs形态发生变化，形成致密细胞集落。第2阶段是特异性诱导ciNPCs，将形成的细胞集落胰酶消化后，低粘附板中悬浮培养，可以形成ciNPCs神经球。采用CM-DiI染料标记P3代ciNPCs，并将其移植于6-OHDA法制作的帕金森大鼠模型右脑内侧前脑束（MFB）区，检测ciNPCs在PD大鼠脑内微环境中的存活、迁移以及分化状况。结果VCR组合诱导10d细胞开始出现明显的聚集趋势，15d时，形成致密的细胞集落。单层培养1×105/孔中大约形成40个克隆，且AP染色呈阳性。将细胞集落消化后，低粘附板中悬浮培养培养2d，可见大量神经球形成，即为第1代ciNPCs（P1代）。ciNPC高表达神经前体细胞（NPCs）特异性标记物（Nestin、Pax6和Sox2），经体外神经特异性诱导分化，ciNPCs表达神经元特异性标记物Tuj1和星形胶质细胞特异性标记物GFAP。而且，P3代ciNPCs移植PD大鼠脑内4周后，可以分化为Tuj1+、GFAP+、TH+和GABA+细胞。结论VCR可以将HEFs重编程为ciNPCs，而无需引入外源性基因，为神经科学研究和神经退行性疾病的治疗提供有利的供体材料。关键词：小分子化合物组合；细胞重编程；人胚胎成纤维细胞；神经前体细胞