鱼类DNA提取方法
主要步骤如下：
（1）取50mg左右的经无水乙醇浸泡过的肌肉样品，用灭菌的牙签挑成细丝状，自然晾干。转入1.5ml离心管中，加入500μl DNA裂解液，加入5ml 20mg/ml蛋白酶K振荡混匀。55℃水浴保温2～3小时，每隔10min摇匀一次。
（2）加入等体积的Tris饱和酚，摇匀,用封口膜封好，37℃水浴2～3小时。每隔10min摇匀一次。
（3）10，000rpm离心10min，小心转移上清液至一新离心管中，加入等体积的酚/氯仿（1：1），摇匀5～10min。
（4）10，000rpm离心10min，小心转移上清液至一新离心管中，加入等体积的氯仿，摇匀5～10min。
（5）10，000rpm离心10min，转移上清液至一新离心管中，加入0.9倍体积的异丙醇以及0.1体积的3mol/LNaAc，摇匀1～2min。
（6）置于-20℃冰箱中3小时。
2.2鱼类总DNA的纯化
试剂：70％乙醇，无水乙醇，1XTE（Ph8.0）、1%琼脂糖。
（1）将2.2.1（6）的总DNA溶液，10，000rpm离心10min，去上清液，留下沉淀。用70％乙醇500μl洗脱，剧烈摇匀，用手指弹击。重复此步骤一次。
（2）10，000rpm离心10min，去上清液，留下沉淀，加入500μl无水乙醇洗脱，剧烈摇匀，用手指弹击。
（3）10，000rpm离心10min，去上清液，把离心管斜置于超净工作台中，自然晾干。
（4）加入50μl 1XTE溶解DNA沉淀，用手指弹击，室温放置30min，取3μl DNA用1％琼脂糖进行电泳检测。
（5）每个DNA样品分成两份，一份－20℃保存备用，另一份4℃保存进行下一步实验。
1.3.1 DNA的提取
总DNA的提取采用改进的高盐法。 1、取鱼背部肌肉约0.01g，挥发乙醇后放入1.5mlBuffer管中用无菌小剪刀剪碎，加入400μL SDS提取缓冲液和8μL20mg/mL的蛋白酶K，混均，放在55℃水浴锅中水浴2 h或者37℃过夜，中间震荡数次。
2、上清加入300μL的6M/L NaCl溶液，充分摇均，10, 000g/min 离心30 min。
3、本文中加一步：上清移入新管加入等体积的氯仿:异戊醇(24:1)混合液，摇均，10, 000g/min 离心10min。
4、上清移入新管加入等体积异丙醇，-20℃下沉淀1h以上，10, 000g/ min 离心10
min。
5、弃去上清液，沉淀用70%的酒精冲洗两次，无水乙醇洗一次。
6、室温下晾干，加入50μL TE溶液溶解。-20℃保存，备用。
1.3.2 总DNA电泳检测
取3μL DNA样品和1μL 溴汾蓝buffer混合，用1%的琼脂糖凝胶在75V电压下电泳30min，EB溶液染色15~20min，电泳结果用凝胶成像系统观察照相。
1.3.3 PCR扩增体系与程序
PCR反应在UNOⅡBiometra仪上进行，PCR扩增引物序列为AFbL：5′-ACCG
AGA CCAATGACTTGAARAACCACCGTTG-3′，AFbR：5′- CTTTGGGAGTTAG
GGG TGGG AG-3′。
30 μL PCR反应体系包括：
10× Taq Buffer 3.0 μL
MgCl2 25 mM·L-1 3.0 μL
dNTPS 2.5 mM·L-1 2.4 μL
AFbL 20 mM·L-1 0.6 μmol/L
AFbR 20 mM·L-1 0.6 μmol/L
DMSO 1.5 μL
BSA 0.1mg/ml 1.0μL
Taq polymerase 0.9 U
DNA模板 1 -2μL(约10ng) 未足体积部分用无菌超纯水补足。
PCR反应程序为：95℃预变性3 min，然后95℃变性45s，56℃退火1 min，72℃延伸1 min，共进行32个循环，最后72℃延伸10 min。反应设不含模板的反应液作空白对照，PCR产物用1%琼脂糖凝胶电泳检测得到清晰谱带，产物纯化后在ABI
3730自动测序仪上用扩增引物双向测序。
斑马鱼两种转基因方法的比较
斑马鱼两种转基因方法的比较
柳晓瑜;王豪博;仇雪梅;于旭蓉;刘洋;王秀利
【摘 要】对斑马鱼(Danio rerio)的两种转基因方法进行比较,分别采用显微注射和电脉冲导入法将携带有GFP报告基因的表达载体质粒导入斑马鱼受精卵,得出电脉冲最佳导入条件为最适电压125 V/cm,电阻50 Ω,最佳导入时期为1-2细胞期(40-50 min),以及最佳外源基因浓度为300 ng/μL.利用两种方法均得到转GFP基因的斑马鱼,而两种方法对比的结果表明,显微注射法耗时费力,但转基因阳性率高；电脉冲法一次可以处理大批量受精卵,但转基因阳性率远低于显微注射法.
【期刊名称】《生物技术通报》
【年(卷),期】2011(000)012
【总页数】5页(P205-209)
【关键词】斑马鱼;显微注射;电脉冲导入法;转基因效率
【作 者】柳晓瑜;王豪博;仇雪梅;于旭蓉;刘洋;王秀利
【作者单位】大连海洋大学生命科学与技术学院,大连116023;大连海洋大学生命科学与技术学院,大连116023;大连海洋大学生命科学与技术学院,大连116023;大连海洋大学生命科学与技术学院,大连116023;大连海洋大学生命科学与技术学院,大连116023;大连海洋大学生命科学与技术学院,大连116023
【正文语种】中 文
自20世纪80年代首批转基因鱼诞生以来［1］，世界范围内掀起了转基因鱼研究的热潮，很多实验室都进行了一系列的转基因鱼的研究［2］。目前，已有多种转基因技术应用于转基因鱼的培育和品种改良。其中显微注射应用的最为广泛，1984年，我国科学家朱作言［1］应用显微注射的方法将人的生长激素基因注射到了鱼的受精卵原核，获得了生长速度快的转基因鱼。之后显微注射技术被广泛应用，并日益改进和完善。其次，电脉冲基因导入法和精子介导法在鱼类转基因的研究中也被大量使用。Aliye等［3］应用电脉冲基因导入法将Cecropins基因导入青鳉受精卵中，得到了少量的转基因个体，但检测结果显示，这些阳性个体的抗菌活性明显高于对照组。应用精子-电脉冲导入法则得到了较高阳性率的转基因贝类［4,5］和鲍类［6］。
3种鳢属鱼类ITS序列及系统进化分析
3种鳢属鱼类ITS序列及系统进化分析
[目的]阐明乌鳢、斑鳢、月鳢核基因序列（ITS）的遗传变异情况，并用ITS序列研究鳢属系统进化关系。[方法]利用PCR扩增3种鳢的ITS，经克隆、拼接得到ITS全长后进行分析。[结果]乌鳢、斑鳢和月鳢ITS全序列长度为902、 927、902或903 bp。3种鳢ITS的G+C含量较高，约占72%。3种鳢之间核苷酸差异明显大于种内，明显的差异性ITS片段可以鉴别3种鳢。采用NJ和ML方法建立的进化树都表明乌鳢和斑鳢的遗传距离最近，而乌鳢和月鳢遗传距离最远。[结论]该研究为鳢属的分类鉴定、系统进化关系以及种间杂交提供基础资料。
真核生物的核糖体都有3种rRNA，即18S rRNA、5.8S rRNA 和28S rRNA。这3种rRNA 基因都是以串联重复形式存在，编码这些rRNA的基因都按一定顺序排列在DNA上。ITS包括ITS1和ITS2，分别位于18S rRNA与5.8S rRNA，5.8S rRNA 和28S rRNA之间。由于ITS1和ITS2进化速度较快，两者广泛应用于鱼类物种的鉴定，特别用于分类较相似的鱼类之间[1-4]。可以根据ITS两边rRNA 具有很高的保守性，设计引物扩增ITS序列片段。
笔者对我国较为常见的乌鳢、斑鳢、月鳢种间的分子遗传距离和进化关系进行研究，旨在促进对其种内遗传多样性的认识，为分析鳢属种间杂交提供借鉴。
1材料与方法
1.1材料
3种鳢属鱼类样本于2013年5～10月份采集。乌鳢样本采集于山东微山湖，斑鳢和月鳢都采自广东。每种鳢采集5尾，样本均采自水上作业的渔民或附近的水产品市场，剪取少量胸鳍，保存于无水乙醇中，贴好标签放置于4 ℃冰箱备用。
1.2DNA提取
将胸鳍组织从乙醇中取出，充分漂洗晾干并剪碎，采用标准的酚-氯仿法提取基因组DNA。取2 μl DNA用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，并稀释到合适浓度用于PCR扩增。
环境DNA技术在自然资源监测中的应用
环境DNA技术在自然资源监测中的应用
自然资源是维持地球生态平衡和人类持续发展的基础。然而，随着人类活动的不断扩张和自然环境的恶化，对自然资源的监测和保护变得尤为重要。环境DNA（Environmental DNA，简称eDNA）技术作为一种新兴的监测工具，正逐渐被广泛应用于自然资源的保护与管理中。本文将探讨环境DNA技术在自然资源监测中的应用，并阐述其优势和挑战。
环境DNA技术是通过提取环境中生物体体液、细胞碎片和粪便等卸载物质中的DNA来监测物种存在和生活活动的一项技术。相比传统的物种监测方法，如捕捉标记再释放法和传统野外调查法，环境DNA技术具有以下几个显著优势。首先，环境DNA技术无需人员直接观察和捕捉物种，避免了人为干扰和对物种造成的潜在伤害。其次，环境DNA技术能够检测到微量的DNA，大大提高了物种监测的灵敏度和准确性。此外，环境DNA技术还具备高通量、高效率、非侵入性和低成本等优点，适用于大范围的物种监测和生物多样性研究。
在自然资源监测中，环境DNA技术已经被广泛应用于多个领域。首先，环境DNA技术在水生生物监测领域有着重要的应用。通过分析水体中的环境DNA，可以快速、准确地检测到目标物种的存在和分布信息。以鱼类监测为例，传统的鱼类监测通常需要捕获、标记和释放鱼群，并进行统计分析。而环境DNA技术可以直接从水样中提取鱼类DNA，无需直接接触鱼群，极大地降低了监测的难度和工作量。此外，环境DNA技术还可以在水产养殖中应用于鱼类健康监测和品种鉴定等方面。
其次，环境DNA技术在野生动物监测和保护中也展现了巨大的潜力。传统的野生动物监测方法往往需要人员长时间的观察和追踪，费时费力且效果有限。而环境DNA技术可以通过分析环境中的粪便、毛发等DNA来源，迅速识别出目标物种的存在和迁徙路径。这对于研究野生动物的种群数量、分布范围和生境利用等方面具有重要意义。同时，环境DNA技术还可以用于检测非法猎捕和走私行为，为野生动物保护提供科学依据。
DNA检测方法在鱼类物种鉴定中的应用
２第０１。２０葶９ 期 ＮＡＴＵＲＡＬ ＳＣＩ海ＥＮ南ＣＥ大ＪＯ学ＵＲ学Ｎ报ＡＬ自Ｏ然Ｆ Ｈ科Ａｌ学＿ＮＡ版Ｎ ＵＮ１ＶＥＲＳＩ．＇年月 Ｉ’Ｙ Ｖ０１．３Ｏ Ｎｏ．３Ｓｅｐ．２０１２
文章编号：１００４—１７２９（２０１２）０３—０２９３—０６
ＤＮＡ检测方法在鱼类物种鉴定中的应用
王嘉鹤，陈双雅，陈伟玲，徐敦明，周 昱
（厦门出入境检验检疫局检验检疫技术中心，福建厦门３６１０２６）
摘要：总结了近年来在鱼类物种鉴定中常用的ＤＮＡ序列分析、ＤＮＡ指纹技术、物种特异性聚合酶链式反 应和实时荧光ＰＣＲ技术等ＤＮＡ检测方法，同时对各类方法的特点和局限性进行了分析． 关键词：ＤＮＡ检测方法；物种鉴定；鱼类 中图分类号：Ｏ ６５８ 文献标志码：Ａ
随着经济的发展和人们生活水平的提高，食品安全问题成为了人们关注的重点．由于物种来源不明
的食品，有可能因为含有过敏原成分或有毒成分而给消费者带来食品安全方面的风险；另外，由于不同鱼 种的价值差异巨大，错误标签和以次充好的现象也时有发生，因此，需要一些快速、可靠、重复性高的物种
鉴定方法来保障市场的监管行为．欧洲委员会第１０４／２０００条例和我国《预包装食品标签通则》都要求产
品标识真实属性的专用名称，ＦＤＡ“水产品危害及控制指南”第４版（２０１１）也要求水产品标签必须使用 ＦＤＡ可销售鱼种名录中的名称．因此，准确、快速地鉴别鱼类物种显得尤为重要．
鱼类的物种鉴定，已从形态学方法发展到目前广泛应用的分子生物学方法，形态学鉴定适合整条鱼 的物种鉴定，但是，鱼一旦进行了切片、鱼肉绞碎等加工，在鱼类原本的形态学特征缺失以后，鉴定将变得
很困难．分子生物学方法主要包括蛋白质检测方法和ＤＮＡ检测方法，等电聚集、毛细管电泳等蛋白质检 测方法主要用于新鲜或冰冻组织的鉴定，不适用于被加工的食品，因为高盐、高热、高压等加工方式会导
致蛋白质变性，蛋白质的理化性质及空间结构会被破坏，从而使分析结果的可靠性降低． ＤＮＡ检测方法由于具有特异性好、灵敏度高、操作简便等优势，已成为物种鉴定的主要检测方法．首
fish met扩增的标准 -回复
fish met扩增的标准 -回复
鱼MET扩增的标准是指在分子生物学研究中，使用特定方法扩增鱼类MET基因的一套标准程序。MET基因是编码鱼类胡椒鲚蛋白的基因，其在鱼类的生长和发育过程中起着重要的调控作用。通过鱼MET扩增的标准，研究人员可以在不同鱼类中准确地检测和比较该基因的表达，从而揭示其在不同生理和病理过程中的功能和调控机制。下面将详细介绍一步一步的鱼MET扩增标准程序。
第一步：设计引物
鱼MET扩增的第一步是设计适用于鱼类MET基因的引物。引物是一对短的DNA序列，能够与目标基因的两侧序列互补配对，并在PCR反应中作为起始点对目标序列进行扩增。在设计引物时，需要确保引物序列特异性，即仅与鱼类MET基因相匹配，而不与其他基因或序列发生非特异性扩增。此外，引物长度和GC含量也需要在一定范围内以保证反应的特异性和稳定性。
第二步：DNA提取
为了进行鱼MET扩增，需要先提取鱼类样品中的DNA。这可以通过标准的DNA提取方法来完成，例如酚/氯仿法、盐溶液法或商业化的DNA提取试剂盒。提取的DNA应具备足够的纯度和质量，以确保后续的扩增反应能够顺利进行。
第三步：PCR反应
PCR是鱼MET扩增的核心步骤，可利用DNA聚合酶酶促反应扩增鱼类MET基因。首先，在反应管中组装PCR反应体系，包括DNA模板、引物对、聚合酶、反应缓冲液、dNTPs及Mg2+等。然后，将反应管放入恒温水浴中，按照一定的温度程序进行PCR反应。此过程涉及到一系列的变温步骤，包括变性、退火和延伸，以实现DNA的分离、引物的结合和DNA的复制。PCR反应一般持续30-40个循环，每个循环包括3个阶段，整个扩增过程通常持续数小时。
第四步：凝胶电泳分析
完成PCR反应后，需要对扩增产物进行凝胶电泳分析。凝胶电泳是一种常用的分离和检测DNA分子的方法，可以根据DNA分子的大小和电荷来区分和分离。在鱼MET扩增中，将PCR反应产物与一定浓度的DNA标记物（如DNA分子量标记物）一起加入凝胶孔道中，然后通电进行电泳。经过一定时间后，根据扩增产物在凝胶上的迁移距离，可以评估扩增结果的特异性和产物大小。具体的分析方法和分子量标准将根据实验室的实际需求进行选择。
《美丽硬仆骨舌鱼的全基因组的微卫星标记的开发及利用》
《美丽硬仆骨舌鱼的全基因组的微卫星标记的开发及利用》
美丽硬仆骨舌鱼的全基因组微卫星标记的开发及利用
一、引言
随着现代生物学技术的迅猛发展，基因组学已经成为生物学领域研究的重要方向。在众多的生物研究中，硬仆骨舌鱼的基因组学研究也引起了广大科研人员的极大兴趣。其中，对美丽硬仆骨舌鱼全基因组的微卫星标记（SSR标记）的开发与利用显得尤为重要。这一技术不仅可以用于深入了解其基因结构和功能，而且有助于在生态保护、物种进化以及育种等多个方面进行实际应用。
二、美丽硬仆骨舌鱼全基因组微卫星标记的开发
1. 开发方法
对于美丽硬仆骨舌鱼全基因组微卫星标记的开发，主要采用的方法包括：生物信息学分析、PCR扩增、克隆测序等。首先，通过生物信息学分析，从已公布的基因组数据中筛选出潜在的微卫星序列；然后，利用PCR技术进行扩增；最后，通过克隆测序等技术手段，验证其准确性和特异性。
2. 实验步骤
具体实验步骤如下：
（1）收集美丽硬仆骨舌鱼的DNA样本； （2）利用生物信息学软件进行序列分析，筛选出潜在的微卫星序列；
（3）设计特异性引物，进行PCR扩增；
（4）对PCR产物进行克隆测序，验证微卫星标记的准确性和特异性；
（5）对验证后的微卫星标记进行定位和命名。
三、美丽硬仆骨舌鱼全基因组微卫星标记的利用
1. 生态保护
通过对美丽硬仆骨舌鱼全基因组微卫星标记的研究，可以更好地了解其种群遗传结构、遗传多样性以及种群动态变化等。这有助于评估其生态风险，制定出更为有效的生态保护策略。
2. 物种进化
微卫星标记可用于研究美丽硬仆骨舌鱼的进化历程。通过比较不同地域、不同种群的微卫星标记差异，可以揭示其进化历程和种群间的亲缘关系。
3. 育种应用
在育种方面，微卫星标记可用于亲本鉴定、杂交育种等方面。例如，通过分析微卫星标记的遗传多态性，可以鉴定出优质的亲本，提高育种效率。此外，还可以利用微卫星标记进行亲子鉴定，为水产养殖业提供有力的技术支持。
高盐法提取DNA
高盐法提取DNA操作
一 所需试剂
1 TNES抽提缓冲液：10 mM Tris-HCl； 400mM NaCl；100 mM EDTA；0.6 % SDS；
10M NaOH调节pH =7.5，高压灭菌；
2 TE 缓冲液：10mmol/LTris-HCl；1mmol/L EDTA；
（浓）盐酸调节pH=8.0，加ddH2O定容至50ml，高压灭菌；
3 蛋白酶K （1mg/ml或20mg/ml），颠倒混匀；
4饱和NaCl；（5 M NaCl也可），高压灭菌；
5 无水乙醇或异丙醇（-20℃预冷）
6 70％乙醇
7 ddH2O
二 操作步骤
1 准备小镊子、小剪刀、PE手套、卷筒纸、marker笔、写好标记的EP管及EP管插板、1000μl、100μl、10μl移液枪及大口径枪头，开水浴锅到55℃；
2 若为冷冻肌肉样品，则预先在EP管中加入400μl TNES缓冲液，再剪取30-50mg鱼类背部肌肉，在PE手套上用小剪刀尽量剪碎，放入EP管中；
若为酒精浸泡肌肉样品，则取酒精浸泡的鱼类背部肌肉约30-50mg，尽量剪碎，放入EP管中，置于烘箱中烘干（或室温放置半小时）至无酒精味，再加入400μl TNES缓冲液；
3 取出冷冻保存的蛋白酶K，待其稍解冻，每个EP管加入1μl 20mg/ml蛋白酶K（或加入20μl 1mg/ml 蛋白酶K），将EP管插浮板上，55℃水浴5-6h；
注：水浴的过程中，开始每隔30min用小枪头轻轻搅动EP管中的肌肉8-10下，稍混匀，共搅动3次。注意动作要轻。
4 水浴结束后将EP管取出，（放冰箱）冷至室温，加入120μl饱和NaCl（或5M NaCl）和120μl氯仿；
5 将EP管放摇床上颠倒混匀5-10min，4℃，13000rpm离心25-30min；
6 取出EP管，用大口径枪头吸取上清（400-450μl），加入2倍体积冷冻无水乙醇或异丙醇（约900μl），轻轻颠倒混匀5-6次；
麦穗鱼的组型分析和DNA含量测定
第３１卷第３期 ２０１２年６月 华中农业大学学报 Ｊｏｕｒｎａ１ ｏｆ Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ＶｏｌＩ ３１ Ｎｏ．３ Ｊｕｎｅ ２０１２，３７１￣３７５
麦穗鱼的组型分析和Ｄ ＮＡ含量测定
杨 坤 王子健 祝东梅 方礼豹 王卫民
１．华中农业大学水产学院，武汉４３００７０；２．ｑ－国科学院生态环境研究中心，北京１０００８５
摘要采用ＰＨＡ和秋水仙素活体注射、肾细胞短期培养和空气干燥制片法，对麦穗鱼染色体数目和核型 进行研究；以麦穗鱼外周血细胞为样本，鸡血细胞ＤＮＡ为标准（２．３０ Ｐｇ），使用美国贝克曼库尔特公司Ｃｅｌｌ Ｌａｂ Ｑｕａｎｔａ ＳＣ流式细胞仪测定了麦穗鱼二倍体细胞的ＤＮＡ含量。结果显示：麦穗鱼染色体数目２ｎ＝５０，未观察到 次缢痕及性染色体，亦未发现有随体，核型公式为１８ ｍ４－２２ ｓｍ＋１０ ｓｔ，ＮＦ＝９０；麦穗鱼二倍体细胞ＤＮＡ含量 为鸡血对照的１．３８倍，绝对含量为３．１８ ｐｇ。 关键词麦穗鱼；染色体；核型分析；流式细胞术；ＤＮＡ含量 中图分类号Ｑ ９５９．４６ ８ 文献标识码Ａ 文章编号１０００—２４２１（２０１２）０３—０３７１—０５
麦穗鱼（Ｐｓｅｕｄｏｒａｓｂｏｒａ ｐａｒｖａ），属鲤形目
（Ｃｙｐｒｉｎｉｆｏｒｍｅｓ）鲤科（Ｃｙｐｒｉｎｉｄａｅ）朐亚科（Ｇｏｂｉｏ—
ｎｉｎａｅ）麦穗鱼属（Ｐｓｅｕｄｏｒａｓｂｏｒａ），起初分布于亚洲
中部（中国、蒙古、韩国、日本等），后随着经济鱼类的
引种被带入欧洲地区，现广泛分布于亚洲、欧洲、非
洲的阿尔及利亚等地＿１ ］。麦穗鱼是一种常见的淡
水小型鱼类，其分布广泛，在鱼类养殖生产中属于野
杂鱼，常被视为清除对象，但有时也作为经济鱼类的
一种饵料鱼。麦穗鱼生长速度快，在室内室外均容 易养殖，分批产卵，１龄便可达性成熟，且对环境耐
受能力强，因此其具有被开发成为一种新的模式鱼
三种马鲛鱼快速检测方法的建立及应用
CHINA FOOD SAFETY 67分析检测
三种马鲛鱼快速检测方法的建立及应用
杨健琪1,2，李 昂2，柳淑芳2*
（1.大连海洋大学 水产与生命学院，辽宁大连 116023； 2.中国水产科学研究院黄海水产研究所，农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室，山东青岛 266071）
摘 要：为了准确快速鉴定马鲛鱼样品，本研究分别以线粒体Cytb和D-loop为靶基因，筛选出康氏马鲛、
蓝点马鲛与斑点马鲛的特异性PCR扩增引物，建立了3种马鲛鱼的快速检测方法，并对检测方法的特异性、重复性和灵敏性进行了验证，随后运用该方法对市售马鲛鱼及其加工制品进行检测。结果表明，马鲛鱼的快速检测方法具有良好的特异性和重复性，灵敏性检测限低于2.000 ng·µL-1 DNA，运用该方法能快速检测出原
料及加工产品中的马鲛鱼成分，整个过程最短用时2 h。本研究建立的3种马鲛鱼PCR快速检测方法，可实现马鲛鱼物种鉴定，满足日常检测需求，对防止水产品掺假、维护消费者权益、规范市场秩序具有重要意义。关键词：聚合酶链式反应（PCR）；马鲛鱼；快速检测；物种鉴定
The Establishment and Application of Rapid Detection
Methods for Three Species of Mackerel
YANG Jianqi1,2, LI Ang2, LIU Shufang2*
(1.College of Fisheries and Life Science, Dalian Ocean University, Dalian 116023, China; 2.Key Laboratory of Sustainable Development of Marine Fisheries, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China)Abstract: To accurately and swiftly identify samples of Scomberomorus species, this study utilized
醋酸铵法提取卵形鲳鲹基因组DNA
天津农业科学Ｔｉａｎｊｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
·畜牧兽医与水产养殖
醋酸铵法提取卵形鲳 基因组ＤＮＡ
彭敏，陈秀荔，蒋伟明，杨春玲，李咏梅 （广西壮族自治区水产研究所，广西南宁５３００２１）
摘要：建立了一种简便、安全、经济的提取卵形鲳 基因组ＤＮＡ的方法，即醋酸铵法。该方法采用７．５ ｔｏｏｌ·Ｌ 醋酸铵代替 酚、氯仿，通过高盐一ＳＤＳ去除蛋白和多糖，异丙醇在一定浓度醋酸铵存在条件下选择性沉淀ＤＮＡ，而不沉淀蛋白，并通过酶 切和ＡＦＬＰ验证该法抽提的ＤＮＡ纯度。该法提取的ＤＮＡ质量较高，无蛋白质和ＲＮＡ污染，较酚／氯仿法和试剂盒法抽提得 到量多，酶切和ＡＦＬＰ试验结果表明，提取的ＤＮＡ可用于酶切分析和分子标记等试验。此法安全、简便、经济，该方法更适合 于对大量样品的提取。 关键词：卵形鲳够；ＤＮＡ抽提；醋酸铵法 中图分类号：￥９６５．３３１文献标识码：Ａ ＤＯＩ编码：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ。１００６—６５００．２０１１．０１．０２９
Ａｍｍｏｎｉｕｍ Ａｃｅｔａｔｅ Ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ Ｉｓｏｌａｔｅ Ｈｉｇｈ Ｑｕａｌｉｔｙ Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｏｆ Ｔｒａｃｈｉｎｏｔｕｓ ｏｖａｔｕｓ ＰＥＮＧ Ｍｉｎ，ＣＨＥＮ Ｘｉｕ－ｌｉ，ＪＩＡＮＧ Ｗｅｉ－ｍｉｎｇ，ＹＡＮＧ Ｃｈｕｎ—ｌｉｎｇ，ＬＩ Ｙｏｎｇ—ｍｅｉ （Ｇｕａｎｇｘｉ Ｆｉｓｈｅｒｉｅｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｎａｎｎｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｘｉ ５３００２１，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｈｉｇｈ—ｑｕａｌｉｔｙ ＤＮＡ ｗａｓ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｂａｓｅ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ，ｓｕｃｈ ａｓ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒｓ．Ａｍｍｏｎｉｕｍ ａｅ— ｅｔａｔｅ ｍｅｔｈｏｄ，ａ ｓｉｍｐｌｅ，ｅｃｏｎｏｍｉｃａｌ ａｎｄ ｓａｆｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ｔｏ ｉｓｏｌａｔｅ ｈｉｇｈ ｑｕａｌｉｔｙ ＤＮＡ ｆｒｏｍ Ｔｒａｃｈｉｎｏｔｕｓ ｏｖａｔｕｓ．Ｉｎｓｔｅａｄ ｏｆ ｐｈｅｎｏｌ ａｎｄ ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ．７．５ ｔｏｏｌ·Ｌ一 ａｍｍｏｎｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｒｅｍｏｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｉｎ ａｎ ＳＤＳ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ ｉｎ ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ．Ｗｉｔｈ ａ ｃｅｒｔａｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａｍｍｏｎｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ，ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ ｃａｎ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅ ＤＮＡ ｗｉｔｈｏｕｔ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｔｈｅ ｐｕ— ｒｉｔｙ ｏｆ ＤＮＡ ｗａｓ ｖａｌｉｄａｔｅｄ ｂｙ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｅｎｚｙｍｅ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ａｎｄ ＡＦＬＰ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｔｈｅ ＤＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｂｙ ａｍｍｏｎｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ ｈａｓ ｈｉｇｈ— ｑｕａｌｉｔｙ，ｈａｓ ｎｏｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ＲＮＡ ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ，ｈａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｙｉｅｌｄ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｐｈｅｎｏｌ／ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｋｉｔ ｍｅｔｈｏｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｅｎｚｙｍｅ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ａｎｄ ＡＦＬＰ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐｕｒｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ＤＮＡ ｗａｓ ｇｏｏｄ ｅｎｏｕｇｈ ｆｏｒ ｔｈｅ ｆｕｒｔｈｅｒ ｂｉｏｔｅｅｈｎｏｌｏｇｙ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｓｕｃｈ ａｓ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ｂｙ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｅｎｚｙｍｅ，ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒ ａｎｄ ＳＯ ｏｎ．Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｓａｆｅ，ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ｅ— ｃｏｎｏｍｉｃａ１．Ｔｈｉｓ ａｍｍｏｎｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｍｏｒｅ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ｆｏｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｌａｒｇｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｓａｍｐｌｅｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｔｒａｃｈｉｎｏｔｕｓ ｏｖａｔｕ￣；ＤＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ａｍｍｏｎｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ ｍｅｔｈｏｄ